সিলিকা-ভিত্তিক চৌম্বক পুঁতির সাহায্যে রক্তের ডিএনএ/আরএনএ নিষ্কাশনকে সহজ করা

1.ভূমিকা

সিলিকা ভিত্তিক চৌম্বক পুঁতি, নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন ব্যবহৃত, আধুনিক আণবিক জীববিজ্ঞানে একটি মূল এবং পরিপক্ক প্রযুক্তির প্রতিনিধিত্ব করে, মেডিকেল ডায়াগনস্টিকস, এবং জেনেটিক পরীক্ষা. তাদের মৌলিক নীতি পৃষ্ঠ-পরিবর্তিত চৌম্বকীয় ন্যানো পার্টিকেল ব্যবহার করে (চৌম্বক জপমালা) যা বিশেষভাবে নিউক্লিক অ্যাসিডের সাথে আবদ্ধ (ডিএনএ বা আরএনএ) নির্দিষ্ট বাফার অবস্থার অধীনে ইলেক্ট্রোস্ট্যাটিক মিথস্ক্রিয়া এবং হাইড্রোফোবিক বাহিনীর মাধ্যমে, একটি বাহ্যিক চৌম্বক ক্ষেত্রের প্রয়োগের মাধ্যমে নিউক্লিক অ্যাসিডের পৃথকীকরণ এবং পরিশোধন সক্ষম করা.

2. মূল নীতি: কেন সিলিকা-ভিত্তিক চৌম্বক পুঁতি নিউক্লিক অ্যাসিড শোষণ করে??

সিলিকা-ভিত্তিক চৌম্বক পুঁতির মূলটি আয়রন অক্সাইডের মতো চৌম্বকীয় পদার্থ দিয়ে তৈরি (Fe₃O₄), সিলিকার একটি স্তর দিয়ে লেপা (SiO₂). নির্দিষ্ট অবস্থার অধীনে, সিলিকা পৃষ্ঠ নিউক্লিক অ্যাসিডের সাথে আবদ্ধ হতে পারে, হাইড্রোফোবিক মিথস্ক্রিয়া এবং হাইড্রোজেন বন্ধনের মাধ্যমে উচ্চ-লবণ এবং নিম্ন-পিএইচ অবস্থার মধ্যে.

2.1 লাইসিস এবং বাইন্ডিং:

একটি lysis বাফার কর্ম অধীনে (সাধারণত গুয়ানিডিন হাইড্রোক্লোরাইড বা গুয়ানিডিন আইসোথিওসায়ানেটের মতো ক্যাওট্রপিক লবণের উচ্চ ঘনত্ব থাকে) এবং ডিটারজেন্ট, রক্তে কোষের ঝিল্লি এবং নিউক্লিয়ার মেমব্রেন ব্যাহত হয়, নিউক্লিক অ্যাসিড মুক্তি.

একই সাথে, ক্যাওট্রপিক লবণের উচ্চ ঘনত্ব জলের অণুগুলির মধ্যে হাইড্রোজেন বন্ধন কাঠামোকে ব্যাহত করে, গঠন a “লবণ সেতু” নিউক্লিক অ্যাসিড এবং চৌম্বক পুঁতির চারপাশে. এটি নিউক্লিক অ্যাসিড ফসফেট ব্যাকবোনের নেতিবাচক চার্জকে নিরপেক্ষ করে, নিউক্লিক অ্যাসিড অণু মধ্যে ইলেক্ট্রোস্ট্যাটিক বিকর্ষণ নির্মূল.

এটি মূলত হাইড্রোফিলিক নিউক্লিক অ্যাসিডকে হাইড্রোফোবিক অবস্থায় রূপান্তরিত করে, তাদের হাইড্রোফোবিক মিথস্ক্রিয়াগুলির মাধ্যমে সিলিকা-ভিত্তিক চৌম্বকীয় পুঁতির হাইড্রোফোবিক পৃষ্ঠের উপর দক্ষতার সাথে শোষণ করার অনুমতি দেয়.

2.2 ধোয়া:

একটি চৌম্বক ক্ষেত্রের প্রভাব অধীনে, নিউক্লিক অ্যাসিডের সাথে আবদ্ধ চুম্বকীয় পুঁতিগুলি টিউবের প্রাচীরের দিকে আকৃষ্ট হয়, এবং সুপারনাট্যান্ট (প্রোটিনের মতো অমেধ্য রয়েছে, হেম, লিপিড, এবং লবণ আয়ন) বাতিল করা হয়.

ক 70%-80% ইথানল ধোয়ার দ্রবণ যোগ করা হয়. ইথানল প্রোটিন এবং লবণের মতো হাইড্রোফিলিক অমেধ্যকে কার্যকরভাবে দ্রবীভূত করে এবং ধুয়ে ফেলার সময় নিউক্লিক অ্যাসিড এবং চৌম্বকীয় পুঁতির মধ্যে বন্ধন বজায় রাখে. হাইড্রোফোবিক নিউক্লিক অ্যাসিড-চৌম্বকীয় গুটিকা কমপ্লেক্স আবদ্ধ থাকে.

2.3 ইলুশন:

ইথানল ধোয়ার দ্রবণটি বাতিল করার পরে এবং এটি শুকানোর অনুমতি দেয়, একটি কম লবণ বা লবণ-মুক্ত ইলুশন বাফার (যেমন TE বাফার বা জীবাণুমুক্ত জল) যোগ করা হয়.

কম আয়নিক শক্তি পরিবেশ ব্যাহত করে “লবণ সেতু,” জলের অণুগুলিকে নিউক্লিক অ্যাসিডগুলিকে পুনরায় হাইড্রেট করার অনুমতি দেয়, তাদের হাইড্রোফিলিসিটি এবং নেতিবাচক চার্জ পুনরুদ্ধার করা. এর ফলে নিউক্লিক অ্যাসিডগুলি চৌম্বক পুঁতির হাইড্রোফোবিক পৃষ্ঠ থেকে বিচ্ছিন্ন হয়ে ইলুশন বাফারে দ্রবীভূত হয়.

অবশেষে, চৌম্বক ক্ষেত্রের প্রভাবের অধীনে, বিশুদ্ধ নিউক্লিক অ্যাসিড ধারণকারী ইলুশন বাফার একটি নতুন টিউবে স্থানান্তরিত হয়, নিষ্কাশন সম্পন্ন করা.

3. রক্তের নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশনের সুবিধা

ঐতিহ্যগত ফেনল-ক্লোরোফর্ম নিষ্কাশন এবং কেন্দ্রাতিগ কলাম পদ্ধতির তুলনায়, সিলিকা ম্যাগনেটিক বিড পদ্ধতি পুরো রক্তের নমুনা প্রক্রিয়াকরণের জন্য উল্লেখযোগ্য সুবিধা প্রদান করে:

• অটোমেশন এবং উচ্চ থ্রুপুট: পুরো প্রক্রিয়াটি সহজেই 96-ওয়েল প্লেটের মতো বিন্যাসে অভিযোজিত হতে পারে, এটি তরল হ্যান্ডলিং ওয়ার্কস্টেশন ব্যবহার করে অটোমেশনের জন্য অত্যন্ত উপযুক্ত করে তোলে. এটি নমুনা থ্রুপুটকে ব্যাপকভাবে বৃদ্ধি করে, বড় আকারের ক্লিনিকাল পরীক্ষার চাহিদা পূরণ.
• সহজ এবং দ্রুত অপারেশন: একাধিক সেন্ট্রিফিউগেশন পদক্ষেপ এবং কষ্টকর তরল স্থানান্তরের প্রয়োজনীয়তা দূর করে, ম্যানুয়াল অপারেশন এবং প্রক্রিয়াকরণের সময় হ্রাস করা. সম্পূর্ণ প্রক্রিয়া সাধারণত মধ্যে সম্পন্ন হয় 20-40 মিনিট.
• উচ্চ নিরাপত্তা: ফেনল এবং ক্লোরোফর্মের মতো বিষাক্ত বিকারকগুলির ব্যবহার এড়িয়ে যায়, এটি অপারেটর এবং পরিবেশের জন্য নিরাপদ করে তোলে.
• উচ্চ নিষ্কাশন গুণমান: রক্তে উচ্চ-প্রাচুর্যের ইনহিবিটরগুলিকে কার্যকরভাবে অপসারণ করে, যেমন heme, ইমিউনোগ্লোবুলিন, এবং ল্যাকটোফেরিন. ফলস্বরূপ নিউক্লিক অ্যাসিডগুলি উচ্চ বিশুদ্ধতা এবং অখণ্ডতা, পিসিআর-এর মতো ডাউনস্ট্রিম অ্যাপ্লিকেশনের জন্য তাদের আদর্শ করে তোলে, qPCR, এবং সিকোয়েন্সিং.
• নমনীয়তা: চৌম্বক পুঁতি এবং বিকারক পরিমাণ নমনীয়ভাবে শুরু নমুনা ভলিউমের উপর ভিত্তি করে সামঞ্জস্য করা যেতে পারে (কয়েক মাইক্রোলিটার থেকে কয়েক মিলিলিটার পর্যন্ত).
• উচ্চ পুনরুদ্ধারের হার: সেন্ট্রিফিউগাল কলাম পদ্ধতির তুলনায় কম ঘনত্বের নিউক্লিক অ্যাসিড পুনরুদ্ধারে আরও ভাল দক্ষতা অফার করে.

4. নির্দিষ্ট অ্যাপ্লিকেশন

সিলিকা চৌম্বক গুটিকা রক্তের নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন প্রযুক্তি ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়:

সংক্রামক রোগ নির্ণয়: এইচআইভির মতো প্যাথোজেনের জন্য ভাইরাল লোড টেস্টিং, এইচবিভি, এইচসিভি, এবং SARS-CoV-2.

নন-ইনভেসিভ প্রসবপূর্ব পরীক্ষা (এনআইপিটি): জেনেটিক রোগ স্ক্রীনিংয়ের জন্য মাতৃ পেরিফেরাল রক্ত ​​থেকে ভ্রূণ কোষ-মুক্ত ডিএনএ বের করা.

টিউমার ডিএনএ সঞ্চালন (ctDNA) সনাক্তকরণ: প্রাথমিক ক্যান্সার স্ক্রীনিং জন্য ব্যবহৃত, চিকিত্সার কার্যকারিতা নিরীক্ষণ, এবং পূর্বাভাস মূল্যায়ন.

ফরেনসিক: STR প্রোফাইলিং এবং ব্যক্তিগত সনাক্তকরণের জন্য রক্তের দাগ এবং অন্যান্য অপরাধ দৃশ্যের প্রমাণ থেকে ডিএনএ বের করা.

ব্লাড ব্যাঙ্ক স্ক্রীনিং: প্যাথোজেনের জন্য দাতার রক্তের নিউক্লিক অ্যাসিড স্ক্রীনিং.

জেনেটিক রোগ গবেষণা: জেনেটিক মিউটেশন বিশ্লেষণের জন্য রক্তের নমুনা থেকে জিডিএনএ বের করা.

5. সাংহাই Lingjun সিলিকা-ভিত্তিক চৌম্বক জপমালা পণ্যের আবেদন কেস 160014 রক্তের নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন মধ্যে

লিংজুন বায়ো ব্যবহার করে 160014 LJbio-32H স্বয়ংক্রিয় নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন এবং পরিশোধন সিস্টেমে লিংজুনের ব্লাড জিনোমিক ডিএনএ এক্সট্রাকশন কিটের পাশাপাশি সিলিকা-ভিত্তিক চৌম্বকীয় পুঁতি, জিনোমিক ডিএনএ চারটি রক্তের নমুনা থেকে বের করা হয়েছিল.

পরীক্ষামূলক ফলাফল নীচের চিত্রে দেখানো হয়েছে:

নমুনা	সংখ্যা	260/280	260/230	কনক. (এর/উল)	নিউক্লিক অ্যাসিড ফলন (μg)
রক্তের নমুনা 1200ul	1	1.809	1.933	91.35	9.1
	2	1.804	1.931	84.9	8.5
	গড়	1.8065	1.932	88.13	8.8
রক্তের নমুনা 2200ul	3	1.794	2.053	106.95	10.7
	4	1.788	2.003	93.6	9.4
	গড়	1.791	2.028	100.28	10
রক্তের নমুনা 3200ul	5	1.802	2.026	97.5	9.8
	6	1.793	2.019	112.7	11.3
	গড়	1.7975	2.0225	105.1	10.5

অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস:

ফলাফল বিশ্লেষণ:

জিনোমিক ডিএনএ স্থিরভাবে তিনটি নমুনা থেকে বের করা হয়েছিল,দ 260/280 অনুপাত সব উপরে ছিল 1.79, এবং 260/230 অনুপাত সব উপরে ছিল 1.9.

থেকে ফলন 200 μL নমুনা উপরে ছিল 8 μg, ডাউনস্ট্রিম অ্যাপ্লিকেশনের জন্য যথেষ্ট,এবং ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যান্ডগুলি অক্ষত ছিল, কোন অবক্ষয় বা smearing সঙ্গে.

6.উপসংহার

সিলিকা ম্যাগনেটিক বিড পদ্ধতি পুরো রক্ত/রক্তের নমুনা থেকে নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশনের জন্য সোনার মানক প্রযুক্তিতে পরিণত হয়েছে. এটি পুরোপুরি দক্ষতার ভারসাম্য বজায় রাখে, গুণমান, থ্রুপুট, এবং অটোমেশন, আধুনিক আণবিক ডায়গনিস্টিকস এবং জীবন বিজ্ঞান গবেষণার জন্য শক্তিশালী সমর্থন প্রদান করে. এর ভৌত রাসায়নিক নীতি “উচ্চ-লবণ বাঁধাই, কম লবণ নির্গমন” সহজ কিন্তু অত্যন্ত দক্ষ. ক্রমাগত প্রক্রিয়া অপ্টিমাইজেশান এবং বিকারক গঠন উন্নতির মাধ্যমে, এটি বিভিন্ন জটিল নমুনা এবং কঠোর ডাউনস্ট্রিম অ্যাপ্লিকেশনের চাহিদা পূরণ করে.

নির্ভুল ওষুধ এবং ব্যক্তিগতকৃত ডায়াগনস্টিকসের বিকাশের জন্য উচ্চতর সংবেদনশীলতা প্রয়োজন, গতি, এবং রক্তের নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশনে অটোমেশন. সিলিকা ম্যাগনেটিক বিড প্রযুক্তি এই ক্ষেত্রে উদ্ভাবন এবং অগ্রগতির মূল চালক হতে থাকবে.

সরবরাহকারী

সাংহাই লিংজুন বায়োটেকনোলজি কো., লিমিটেডসালে প্রতিষ্ঠিত হয় 2016 যা বায়োম্যাগনেটিক উপকরণ এবং নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন বিকারকগুলির একটি পেশাদার প্রস্তুতকারক.

আমাদের নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন এবং পরিশোধন সমৃদ্ধ অভিজ্ঞতা আছে, প্রোটিন পরিশোধন, কোষ বিচ্ছেদ, কেমিলুমিনেসেন্স, এবং অন্যান্য প্রযুক্তিগত ক্ষেত্র.

আমাদের পণ্য ব্যাপকভাবে অনেক ক্ষেত্রে ব্যবহৃত হয়, যেমন মেডিকেল টেস্টিং, জেনেটিক পরীক্ষা, বিশ্ববিদ্যালয় গবেষণা, জেনেটিক প্রজনন, এবং তাই. আমরা কেবল পণ্য সরবরাহ করি না তবে OEM গ্রহণ করতে পারি, ওডিএম, এবং অন্যান্য প্রয়োজন. আপনি যদি একটি সম্পর্কিত প্রয়োজন আছে, আমাদের সাথে যোগাযোগ বিনা দ্বিধায় দয়া করে .