Eastóscadh DNA/RNA Fola a Shimpliú le Coirníní Maighnéadacha Bunaithe ar Shilice

1.Réamhrá

Coirníní maighnéadacha atá bunaithe ar shilice, a úsáidtear in eastóscadh aigéid núicléacha, is ionann iad agus croítheicneolaíocht aibí sa bhitheolaíocht mhóilíneach nua-aimseartha, diagnóisic leighis, agus tástáil ghéiniteach. Baineann a mbunphrionsabal le húsáid nanacháithníní maighnéadacha dromchla-mhodhnaithe (coirníní maighnéadacha) a cheanglaíonn go sonrach le haigéid núicléacha (DNA nó RNA) trí idirghníomhaíochtaí leictreastatacha agus fórsaí hidreafóbach faoi choinníollacha maoláin sonracha, a chumasaíonn scaradh agus íonú aigéid núicléacha trí réimse maighnéadach seachtrach a chur i bhfeidhm.

2. Croíphrionsabal: Cén fáth a bhfuil coirníní maighnéadacha shilice-bhunaithe adsorb Aigéid Núicléacha?

Tá croílár coirníní maighnéadacha silica-bhunaithe déanta as ábhair mhaighnéadacha cosúil le ocsaíd iarainn (Fe₃O₄), brataithe le sraith de shilice (SiO₂). Faoi choinníollacha sonracha, is féidir leis an dromchla shilice ceangal le haigéid núicléacha, go príomha trí idirghníomhaíochtaí hidreafóbach agus nascadh hidrigine faoi choinníollacha ard-salainn agus íseal-pH.

2.1 Lysis agus Ceangal:

Faoi ghníomh maolán lysis (ina bhfuil tiúchan arda de shalainn chaotrópacha amhail hidreaclóiríd ghuainidín nó iseatiocianáit guainidín) agus glantaigh, cuirtear isteach ar na seicní cille agus ar na seicní núicléacha san fhuil, aigéid núicléacha a scaoileadh.

Ag an am céanna, cuireann tiúchain arda salainn chaotrópacha isteach ar an struchtúr nasctha hidrigine idir móilíní uisce, foirmi a “droichead salainn” timpeall na n-aigéid núicléacha agus na coirníní maighnéadacha. Neodraíonn sé seo lucht diúltach an chnámh droma fosfáit aigéid núicléigh, deireadh a chur le héaradh leictreastatach idir móilíní aigéid núicléacha.

Athraíonn sé seo na haigéid núicléacha hidreafhile a bhí ann ar dtús ina stát hidreafóbach, ag ligean dóibh ionsú go héifeachtach ar dhromchla hidreafóbach na gcoirníní maighnéadacha atá bunaithe ar shilice trí idirghníomhaíochtaí hidreafóbach.

2.2 Níochán:

Faoi thionchar réimse maighnéadach, déantar na coirníní maighnéadacha atá ceangailte le haigéid núicléacha a mhealladh chuig balla an fheadáin, agus an supernatant (ina bhfuil neamhíonachtaí cosúil le próitéiní, uaim, lipidí, agus iain salainn) caitear leis.

A 70%-80% Cuirtear tuaslagán nigh eatánóil leis. Coinníonn eatánól an ceangal idir na haigéid núicléacha agus na coirníní maighnéadacha agus é ag tuaslagadh agus ag níochán go héifeachtach eisíontais hidreafaileacha amhail próitéiní agus salainn.. Fanann na coimpléisc coirníní aigéad-maighnéadacha hidreafóbach faoi cheangal.

2.3 Elution:

Tar éis an tuaslagán nigh eatánóil a chaitheamh amach agus ligean dó triomú, maolán íseal-salann nó saor ó shalann (amhail maolán TE nó uisce steiriúil) cuirtear.

Cuireann an timpeallacht neart ianach íseal isteach ar an “droichead salainn,” ag ligean do mhóilíní uisce na haigéid núicléacha a athhiodráitiú, ag athbhunú a n-hydrophilicity agus lucht diúltach. Déanann sé seo na haigéid núicléacha a dhícheangal ó dhromchla hidreafóbach na gcoirníní maighnéadacha agus a thuaslagadh isteach sa mhaolán elution.

Ar deireadh, faoi ​​thionchar réimse maighnéadach, aistrítear an maolán elution ina bhfuil aigéid núicléacha íon go feadán nua, an t-eastóscadh a chomhlánú.

3. Buntáistí i bhFola Eastóscadh Aigéad Núicléach

I gcomparáid le modhanna traidisiúnta eastóscadh feanól-clóraform agus colún lártheifeacha, cuireann an modh coirníní maighnéadacha shilice buntáistí suntasacha chun samplaí fola iomlána a phróiseáil:

• Uathoibriú agus Tréchur Ard: Is féidir an próiseas iomlán a oiriúnú go héasca do bhformáidí cosúil le plátaí 96-tobar, rud a fhágann go bhfuil sé thar a bheith oiriúnach le haghaidh uathoibrithe ag baint úsáide as stáisiúin oibre láimhseála leachta. Méadaíonn sé seo go mór tréchur na samplaí, freastal ar éilimh na tástála cliniciúla ar mhórscála.
• Oibríocht Simplí agus Thapa: Cuireann sé deireadh leis an ngá atá le ilchéimeanna lártheifneoraithe agus aistrithe leachta achrannacha, oibríochtaí láimhe agus am próiseála a laghdú. Is gnách go gcuirtear an nós imeachta ar fad i gcrích laistigh de 20-40 nóiméad.
• Sábháilteacht Ard: Seachnaíonn sé úsáid imoibrithe tocsaineacha ar nós feanól agus Clóraform, é a dhéanamh níos sábháilte d’oibreoirí agus don chomhshaol.
• Cáilíocht Eastóscadh Ard: Go héifeachtach baintear coscairí ard-raidhse san fhuil, mar shampla heme, Glóbailin Imdhíonachta, agus lactoferrin. Tá ardíonacht agus sláine ard ag na haigéid núicléacha a bhíonn mar thoradh orthu, rud a fhágann go bhfuil siad oiriúnach d'fheidhmchláir iartheachtacha mar PCR, qPCR, agus seicheamhú.
• Solúbthacht: Is féidir méideanna coirníní maighnéadacha agus imoibrithe a choigeartú go solúbtha bunaithe ar an méid sampla tosaigh (ó chúpla micrilítear go roinnt millilítear).
• Ráta Aisghabhála Ard: Tairiscintí éifeachtacht níos fearr a ghnóthú aigéid núicléacha íseal-tiúchan i gcomparáid le Modhanna colún lártheifeacha.....

4. Feidhmchláir Sonracha

Úsáidtear teicneolaíocht eastóscadh aigéad núicléach fola coirnín shilice go forleathan i:

Diagnóisic Ghalair Thógálacha: Tástáil ualaigh víreasach le haghaidh pataiginí cosúil le VEID, HBV, HCV, agus SARS-CoV-2.

Tástáil Réamhbhreithe Neamhionrach (NIPT): DNA féatais saor ó chealla a bhaint as fuil imeallach na máthar le haghaidh scagadh galar géiniteach.

Scaipeadh DNA meall (ctDNA) Brath: Úsáidtear é le haghaidh scagthástála ailse go luath, monatóireacht ar éifeachtúlacht cóireála, agus measúnú prognóis.

Fóiréinseach: DNA a bhaint as stainníní fola agus fianaise láithreacha coire eile le haghaidh próifíliú STR agus sainaithint phearsanta.

Scagadh Bainc Fola: Scagthástáil aigéid núicléigh ar fhuil deontóra le haghaidh pataiginí.

Taighde ar Ghalair Géiniteacha: GDNA a bhaint as samplaí fola le haghaidh anailíse sóchán géiniteach.

5. Cás Iarratais Táirge coirníní maighnéadacha shilice Shanghai Lingjun 160014 in Eastóscadh Aigéad Núicléach Fola

Ag baint úsáide as Lingjun Bio's 160014 coirníní maighnéadacha shilice-bhunaithe taobh le Kit Asbhainte DNA Genomic Fola Lingjun ar an LJbio-32H uathoibrithe eastóscadh aigéid núicléacha agus córas íonú, Baineadh DNA géanómach as ceithre shampla fola.

Taispeántar na torthaí turgnamhacha san fhíor thíos:

Sampla	uimhir	260/280	260/230	Conc. (de/ul)	Táirgeacht aigéid núicléigh (μg)
Sampla fola 1200ul	1	1.809	1.933	91.35	9.1
	2	1.804	1.931	84.9	8.5
	meánlíon	1.8065	1.932	88.13	8.8
Sampla fola 2200ul	3	1.794	2.053	106.95	10.7
	4	1.788	2.003	93.6	9.4
	meánlíon	1.791	2.028	100.28	10
Sampla fola 3200ul	5	1.802	2.026	97.5	9.8
	6	1.793	2.019	112.7	11.3
	meánlíon	1.7975	2.0225	105.1	10.5

Leictreafóiréis glóthach agarose:

Anailís ar Thorthaí:

Baineadh DNA géanómach go seasta as na trí shampla,an 260/280 bhí na cóimheasa thuas ar fad 1.79, agus an 260/230 bhí na cóimheasa thuas ar fad 1.9.

An toradh ó 200 Bhí samplaí μL thuas 8 μg, leordhóthanach le haghaidh feidhmchláir iartheachtacha,agus Bhí na bannaí leictreafóiréis slán, gan aon díghrádú nó smearadh.

6.Conclúid

Is é an modh coirníní maighnéadacha shilice an teicneolaíocht chaighdeánach óir d'eastóscadh aigéad núicléach ó shamplaí iomlána fola/fola. Cothromaíonn sé éifeachtacht go foirfe, cáilíochta, tréchur, agus uathoibriú, tacaíocht láidir a sholáthar do dhiagnóisic mhóilíneach nua-aimseartha agus taighde eolaíochta beatha. A prionsabal fisiciceimiceach de “ceangailteach ard-salann, elution íseal-salann” simplí ach an-éifeachtach. Trí leas iomlán a bhaint próisis leanúnach agus feabhsuithe foirmiú imoibrí, comhlíonann sé éilimh samplaí casta éagsúla agus iarratais iartheachtacha déine.

Teastaíonn íogaireacht níos airde chun leigheas beachtas agus diagnóisic phearsantaithe a fhorbairt, luas, agus uathoibriú in eastóscadh aigéid núicléacha fola. Leanfaidh teicneolaíocht coirníní maighnéadacha shilice mar phríomhthiománaí nuálaíochta agus dul chun cinn sa réimse seo.

Soláthraí

Shanghai Lingjun Biteicneolaíocht Co., Teo.bunaíodh i 2016 atá ina mhonaróir gairmiúil d'ábhair bithmhaighnéadacha agus imoibrithe eastóscadh aigéid núicléacha.

Tá taithí shaibhir againn in eastóscadh agus íonú aigéad núicléasach, íonú próitéine, scaradh cille, ceimileacanacht, agus réimsí teicniúla eile.

Úsáidtear ár gcuid táirgí go forleathan i go leor réimsí, mar thástáil leighis, tástáil ghéiniteach, taighde ollscoile, pórú géiniteach, agus mar sin de. Ní chuirimid ar fáil ach táirgí ach freisin is féidir tabhairt faoi OEM, ODM, agus riachtanais eile. Má tá riachtanas gaolmhar agat, bíodh leisce ort teagmháil a dhéanamh linn .