Optamú Maolán PEG/Salainn | Uasmhéadaigh Cobhsaíocht Bead Maighnéadach & Comhsheasmhacht Measúnachta

Díchódú PEG/Maolán Salainn Optamaithe le haghaidh Feidhmíochta Iontaofa Coirníní Maighnéadacha

In ullmhú leabharlainne NGS, scagadh blúirí, agus turgnaimh ghabhála spriocdhírithe, tá coirníní maighnéadacha atá bunaithe ar shilice ina chroí-uirlis fíor-riachtanach. Mar sin féin, tá go leor taighdeoirí tar éis teacht ar an aincheist seo: léiríonn coirníní nua-oscailte rátaí aisghabhála den scoth, ach tar éis stórála, laghdaítear go ciúin ar a bhfeidhmíocht - ní thagann aisghabháil chun cinn, méaduithe asaithe nonspecific, agus cuirtear sláine na blúirí sprice i gcontúirt. Go minic, nach é an bhunchúis na coirníní iad féin, ach tá an “díghníomhú dofheicthe” den mhaolán stórála. Mar taiscéalaithe domhain i dteicneolaíocht bead maighnéadach, tuigimid é sin 90% Braitheann cobhsaíocht fhadtéarmach coirníní agus in-atáirgtheacht feidhmíochta ar a “timpeallacht maireachtála”— dearadh an mhaoláin stórála. Inniu, ag tosú ón gcéad phrionsabail, taispeánfaimid conas an maolán PEG/salann a choigeartú go heolaíoch chun córas cobhsaí a thógáil a ligeann do choirníní maighnéadacha shilice buaicfheidhmíocht a choinneáil san fhadtéarma.

Fréamh na Fadhb: Cén Fáth nach féidir le Gnáth-mhaoláin PEG/Salainn Tacú le Stóráil Fadtéarmach?

Cé go gceadaíonn an córas traidisiúnta PEG/NaCl ceangal gearrthéarmach, tá trí lochtanna móra aige mar réiteach stórála:

Sailleadh Amach agus Comhiomlánú: Tiúchan arda d'ian salainn (e.g., NaCl, Mhg²⁺) is féidir leis a bheith ina chúis le comhiomlánú do-aisiompaithe sailleadh coirníní le linn stórála.

Hidrealú agus pH Drift: Is féidir le ionsú CO₂ nó galú uisce an pH a athrú, cur isteach ar chothromaíocht muirear dromchla an mhaitrís shilice.

Easpa Bacainn Chosanta: Díghníomhaíonn na suíomhanna gníomhacha ar an dromchla coirníní de réir a chéile nó seachnaíonn siad neamhíonachtaí le linn stórála statach fada.

An Réiteach: Ceithre Chuid Chomhtháite a Thógáil “Cobhsú Chliste” Córas Maoláin

Bailíochtaithe trí na céadta turgnaimh, molaimid an loighic maolánach optamaithe seo a leanas maidir le foirmliú agus ullmhúcháin.

Croífhoirmiú (le haghaidh 100 mL):

PEG 8000: 6.5% (w/v)

Déantar an tiúchan a choigeartú go beacht bunaithe ar an spriocmhéid blúirí: 6.5-7.5% le haghaidh 100-300 bp, 7.5-8.5% le haghaidh 300-1000 bp.

Córas Ion Salainn: 1.5 M NaCl + 10 mM MgCl₂

Mg²⁺ cuireann sé go mór le sainiúlacht téarnaimh le haghaidh blúirí fada >500 bp.

Cobhsaitheoir pH: 10 mM Tris-HCl, pH 5.5

Nuálaíocht Eochair: An pH a ísliú ón ngnáthnós 7.5-8.0 chuig 5.5-6.0 Moillíonn go mór hidrealú bannaí siloxane (Tá-Ó-Tá), cobhsaíocht fhadtéarmach an sciath croí maighnéadach a fheabhsú.

Cosantóir Stéig: 0.1% (w/v) BSA atá cóireáilte le protease

Foirmíonn sé ciseal cosanta monamhóilíneach, teagmháil dhíreach agus comhiomlánú coirníní le coirníní a chosc.

Chelating Frithocsaídeach: 5 mM EDTA + 0.01% (w/v) Ascorbate Sóidiam

Chelates hiain miotail throma agus cosc ​​damáiste radacach ocsaídiúcháin saor in aisce do cheimic dromchla coirníní.

Fliuchadh & Gníomhaire Scaipthe: 0.01% (v/v) Tween-20

Cinntíonn sé go bhfanann coirníní i bhfionraí aonchineálach, dríodrú agus cácáil a chosc.

Léim go domhain isteach sa Mheicníocht: Misean Beacht Gach Comhpháirte

Rialú Beacht ar PEG 8000 Tiúchan
Cuireann PEG teagmháil DNA leis an dromchla coirníní chun cinn tríd an “éifeacht eisiamh toirte.” Laghdaíonn tiúchan íseal aisghabháil blúirí beaga, cé go bhfuil tiúchan ard mar thoradh go héasca ar asaithe nonspecific. Tá an6.5-8.5% raon é an “fuinneog órga” arna bhailíochtú trí chuair toirtmheasctha moirtiúlachta agus aisghabhála, téarnamh ard agus roghnaíocht ard blúirí araon a bhaint amach.

An Réabhlóid Cobhsaíochta ag pH 5.5
I dtimpeallacht lag aigéadach, na grúpaí silanol (Si-OH) ar an dromchla shilice atá níos prótónáitithe. Ní hamháin go laghdaíonn sé seo a bhféinchomhdhlúthú ach cuireann sé cosc ​​freisin ar hidrealú alcaileach aigéid núicléacha. Léiríonn sonraí turgnamhacha go bhfuil sláine na blúirí a aisghabháil (Luach DV200) le haghaidh coirníní atá stóráilte ag pH 5.5 le haghaidh 6 mhí níos airde ná dóibh siúd atá stóráilte ag pH 8.0.

Tionchar sineirgisteacha na nIain Shalainn Ilchodacha
Soláthraíonn NaCl an príomhfhórsa tiomána, agus MgCl₂ á chur leis, trí idirlinne cation divalent, feabhsaíonn sé éifeachtúlacht gabhála le haghaidh blúirí fada gan asaithe cúlra a mhéadú. An neart ianach a rialú go docht le coibhéis1.2-1.5 M NaCl ríthábhachtach chun fórsa ceangailteach agus cobhsaíocht stórála a chothromú.

Tógáil an Líonra Cosanta
Cruthaíonn BSA agus Tween-20 bacainn steiriciúil fhisiciúil, agus tógann EDTA agus ascorbate sóidiam líonra cosanta ceimiceach. Oibríonn na ceithre chomhpháirt seo i sineirgíocht, “ocsaigin a leithlisiú, miotail a aonrú, agus aonrú a chéile” ag an leibhéal micreascópach, fíorchaomhnú cosúil le hibernation a bhaint amach do na coirníní.

Treoir Oibriúcháin: Réiteach Réidh le Úsáid

Chun in-atáirgtheacht deiridh i do thorthaí turgnamhacha a chinntiú, molaimid go láidir:

Stóráil Aliquot: Cuir na coirníní ar fionraí arís sa mhaolán optamaithe a bhfuil cur síos air thuas agus déan iad a roinnt ina méideanna aonúsáide.

Gníomhachtaithe Réamhúsáide: Níl ort ach nigh faoi dhó leis an maolán ceangailteach bunaidh (gan cosantóirí) chun an ghníomhaíocht cheangailteach is fearr a athbhunú.

Rialú Cáilíochta: Roimh úsáid a bhaint as gach baisc coirníní, tástáil ar scála beag a dhéanamh le a 10 ng blúire DNA caighdeánach lena fháil amach an gcomhlíonann an ráta aisghabhála do chritéir cháilíochta.

Réamhrá Táirge

Leveraging dearadh coirníní aibí agus próisis déantúsaíochta, Shanghai Lingjun Biteicneolaíocht Co., Teo. Tá a ard-fheidhmíocht forbartha Sraith FR0015 coirníní maighnéadacha shilice. Le meánmhéid na gcáithníní 400nm-500nm, airíonna maighnéadacha láidre, monodispersity den scoth, agus leath-am dríodraithe níos mó ná 1 uair an chloig, tá an líne táirge seo oiriúnach go príomha do:

Eastóscadh blúirí DNA/RNA Séiream/Plasma saor ó chealla

Sórtáil/roghnú blúirí DNA

Feidhmchláir óna dteastaíonn cobhsaíocht fhionraí coirníní den scoth agus comh-eastóscadh blúirí DNA/RNA thar raon leathan méide.

Conclúid

Is í Eolaíocht na Cobhsaíochta Bunchloch na hIn-atáirgtheachta

Ní hamháin teicníc é roghnú coirníní maighnéadacha, is tionscadal innealtóireachta córais beacht é. Tá maolán atá optamaithe go domhain cosúil le a “pod hibernation réalt” crafted do na coirníní, ag ligean am chun fanacht gan stad le linn stórála agus a n-acmhainneacht iomlán a bheith ag taitneamh le linn úsáide. Ciallaíonn roghnú fócas a roghnú cobhsaíocht deiridh i ngach babhta turgnaimh. Tosaímid le heolaíocht bhunúsach an mhaoláin agus ath-shainmhínímid teorainneacha iontaofa feidhmíochta coirníní maighnéadacha.

Soláthraí

Shanghai Lingjun Biteicneolaíocht Co., Teo.bunaíodh i 2016 atá ina mhonaróir gairmiúil d'ábhair bithmhaighnéadacha agus imoibrithe eastóscadh aigéid núicléacha.

Tá taithí shaibhir againn in eastóscadh agus íonú aigéad núicléasach, íonú próitéine, scaradh cille, ceimileacanacht, agus réimsí teicniúla eile.

Úsáidtear ár gcuid táirgí go forleathan i go leor réimsí, mar thástáil leighis, tástáil ghéiniteach, taighde ollscoile, pórú géiniteach, agus mar sin de. Ní chuirimid ar fáil ach táirgí ach freisin is féidir tabhairt faoi OEM, ODM, agus riachtanais eile. Má tá riachtanas gaolmhar agat, bíodh leisce ort teagmháil a dhéanamh linn .