PEG/Salt Buffer Optimization | காந்த மணி நிலைத்தன்மையை அதிகரிக்கவும் & மதிப்பாய்வு நிலைத்தன்மை

நம்பகமான காந்த மணி செயல்திறனுக்கான டிகோடிங் PEG/Salt Buffer Optimization

NGS நூலகத் தயாரிப்பில், துண்டு திரையிடல், மற்றும் இலக்கு பிடிப்பு சோதனைகள், சிலிக்கா அடிப்படையிலான காந்த மணிகள் இன்றியமையாத முக்கிய கருவியாக மாறியுள்ளன. எனினும், பல ஆராய்ச்சியாளர்கள் இந்த சிக்கலை எதிர்கொண்டுள்ளனர்: புதிதாக திறக்கப்பட்ட மணிகள் சிறந்த மீட்பு விகிதங்களைக் காட்டுகின்றன, ஆனால் சேமிப்பிற்குப் பிறகு, அவர்களின் செயல்திறன் அமைதியாக குறைகிறது-மீட்பு சீரற்றதாகிறது, குறிப்பிடப்படாத உறிஞ்சுதல் அதிகரிக்கிறது, மற்றும் இலக்கு துண்டுகளின் ஒருமைப்பாடு சமரசம் செய்யப்படுகிறது. அடிக்கடி, மூல காரணம் மணிகள் அல்ல, ஆனால் தி “கண்ணுக்கு தெரியாத செயலிழப்பு” சேமிப்பக இடையகத்தின். காந்த மணி தொழில்நுட்பத்தில் ஆழ்ந்த ஆய்வாளர்களாக, நாங்கள் அதை புரிந்துகொள்கிறோம் 90% ஒரு மணியின் நீண்ட கால நிலைத்தன்மை மற்றும் செயல்திறன் மறுஉருவாக்கம் அதன் மீது சார்ந்துள்ளது “வாழும் சூழல்”- சேமிப்பக இடையகத்தின் வடிவமைப்பு. இன்று, முதல் கொள்கைகளில் இருந்து தொடங்குகிறது, சிலிக்கா அடிப்படையிலான காந்த மணிகள் நீண்ட காலத்திற்கு உச்ச செயல்திறனைப் பராமரிக்க அனுமதிக்கும் ஒரு நிலையான அமைப்பை உருவாக்க PEG/உப்பு இடையகத்தை எவ்வாறு அறிவியல் ரீதியாக சரிசெய்வது என்பதை நாங்கள் வெளிப்படுத்துவோம்..

பிரச்சனையின் வேர்: ஏன் சாதாரண PEG/Salt Buffers நீண்ட கால சேமிப்பை ஆதரிக்க முடியாது?

பாரம்பரிய PEG/NaCl அமைப்பு குறுகிய கால பிணைப்பை செயல்படுத்துகிறது, சேமிப்பக தீர்வாக இது மூன்று முக்கிய குறைபாடுகளைக் கொண்டுள்ளது:

சால்ட்டிங்-அவுட் மற்றும் திரட்டுதல்: உப்பு அயனிகளின் அதிக செறிவு (எ.கா., NaCl, Mg²⁺) சேமிப்பின் போது மணிகளின் மீளமுடியாத உப்பிடுதல்-அவுட் திரட்டலை ஏற்படுத்தலாம்.

நீராற்பகுப்பு மற்றும் pH சறுக்கல்: CO₂ உறிஞ்சுதல் அல்லது நீர் ஆவியாதல் pH ஐ மாற்றலாம், சிலிக்கா மேட்ரிக்ஸின் மேற்பரப்பு சார்ஜ் சமநிலையை சீர்குலைக்கிறது.

பாதுகாப்பு தடை இல்லாதது: மணி மேற்பரப்பில் செயலில் உள்ள தளங்கள் நீடித்த நிலையான சேமிப்பின் போது படிப்படியாக செயலிழக்க அல்லது அசுத்தங்களை உறிஞ்சும்.

தீர்வு: ஒரு ஒருங்கிணைந்த நான்கு-பகுதியை உருவாக்குதல் “அறிவார்ந்த நிலைப்படுத்தல்” இடையக அமைப்பு

நூற்றுக்கணக்கான சோதனைகள் மூலம் சரிபார்க்கப்பட்டது, பின்வரும் உகந்த இடையக உருவாக்கம் மற்றும் தயாரிப்பு தர்க்கத்தை நாங்கள் முன்மொழிகிறோம்.

மைய உருவாக்கம் (க்கான 100 எம்.எல்):

PEG 8000: 6.5% (w/v)

இலக்கு துண்டு அளவின் அடிப்படையில் செறிவு துல்லியமாக சரிசெய்யப்படுகிறது: 6.5-7.5% க்கான 100-300 பிபி, 7.5-8.5% க்கான 300-1000 பிபி.

உப்பு அயன் அமைப்பு: 1.5 எம் NaCl + 10 mM MgCl₂

Mg²⁺ நீண்ட துண்டுகளுக்கான மீட்புத் தன்மையை கணிசமாக அதிகரிக்கிறது >500 பிபி.

pH நிலைப்படுத்தி: 10 mM Tris-HCl, pH 5.5

முக்கிய கண்டுபிடிப்பு: வழக்கத்திலிருந்து pH ஐக் குறைத்தல் 7.5-8.0 செய்ய 5.5-6.0 siloxane பிணைப்புகளின் நீராற்பகுப்பை வெகுவாகக் குறைக்கிறது (ஆம்-ஓ-ஆம்), காந்த மைய பூச்சு நீண்ட கால நிலைத்தன்மையை மேம்படுத்துகிறது.

ஸ்டெரிக் பாதுகாவலர்: 0.1% (w/v) புரோட்டீஸ்-சிகிச்சை BSA

மோனோமாலிகுலர் பாதுகாப்பு அடுக்கை உருவாக்குகிறது, மணி-க்கு-மணி தொடர்பு மற்றும் திரட்டலைத் தடுக்கிறது.

செலேட்டிங் ஆன்டிஆக்ஸிடன்ட்: 5 mM EDTA + 0.01% (w/v) சோடியம் அஸ்கார்பேட்

ஹெவி மெட்டல் அயனிகளை செலேட்டுகள் மற்றும் பீட் மேற்பரப்பு வேதியியலுக்கு ஆக்ஸிஜனேற்ற ஃப்ரீ ரேடிக்கல் சேதத்தைத் தடுக்கிறது.

நனைத்தல் & சிதறல் முகவர்: 0.01% (v/v) ட்வீன்-20

மணிகள் ஒரே மாதிரியான இடைநீக்கத்தில் இருப்பதை உறுதி செய்கிறது, வண்டல் மற்றும் கேக்கிங் தடுக்கும்.

பொறிமுறையில் ஆழமாக மூழ்குங்கள்: ஒவ்வொரு கூறுகளின் துல்லியமான பணி

PEG இன் துல்லியமான கட்டுப்பாடு 8000 செறிவு
PEG மூலம் மணி மேற்பரப்புடன் DNA தொடர்பை ஊக்குவிக்கிறது “தொகுதி விலக்கு விளைவு.” குறைந்த செறிவு சிறிய துண்டுகளை மீட்டெடுப்பதை குறைக்கிறது, அதிக செறிவு எளிதில் குறிப்பிடப்படாத உறிஞ்சுதலுக்கு வழிவகுக்கிறது. தி6.5-8.5% வரம்பு என்பது “தங்க ஜன்னல்” டர்பிடிட்டி டைட்ரேஷன் மற்றும் மீட்பு வளைவுகள் மூலம் சரிபார்க்கப்பட்டது, உயர் மீட்பு மற்றும் உயர் துண்டு தேர்வு இரண்டையும் அடைதல்.

pH இல் ஸ்திரத்தன்மை புரட்சி 5.5
பலவீனமான அமில சூழலில், சிலானால் குழுக்கள் (Si-OH) சிலிக்கா மேற்பரப்பில் அதிக புரோட்டானேட் உள்ளது. இது அவற்றின் சுய ஒடுக்கத்தை குறைப்பது மட்டுமல்லாமல் நியூக்ளிக் அமிலங்களின் கார நீராற்பகுப்பையும் தடுக்கிறது.. மீட்கப்பட்ட துண்டுகளின் ஒருமைப்பாடு என்பதை பரிசோதனை தரவு காட்டுகிறது (DV200 மதிப்பு) pH இல் சேமிக்கப்படும் மணிகளுக்கு 5.5 க்கான 6 pH இல் சேமிக்கப்பட்டதை விட மாதங்கள் அதிகம் 8.0.

கலப்பு உப்பு அயனிகளின் சினெர்ஜிஸ்டிக் விளைவு
NaCl முக்கிய உந்து சக்தியை வழங்குகிறது, MgCl₂ சேர்க்கும் போது, divalent cation பிரிட்ஜிங் மூலம், பின்னணி உறிஞ்சுதலை அதிகரிக்காமல் நீண்ட துண்டுகளுக்கு பிடிப்பு திறனை அதிகரிக்கிறது. அதற்கு சமமான அயனி வலிமையை கண்டிப்பாக கட்டுப்படுத்துதல்1.2-1.5 எம் NaCl பிணைப்பு சக்தி மற்றும் சேமிப்பக நிலைத்தன்மையை சமநிலைப்படுத்துவதற்கு முக்கியமானது.

பாதுகாப்பு நெட்வொர்க்கின் கட்டுமானம்
பிஎஸ்ஏ மற்றும் ட்வீன்-20 ஆகியவை இயற்பியல் ஸ்டெரிக் தடையை உருவாக்குகின்றன, EDTA மற்றும் சோடியம் அஸ்கார்பேட் ஒரு இரசாயன பாதுகாப்பு வலையமைப்பை உருவாக்குகின்றன. இந்த நான்கு கூறுகளும் சினெர்ஜியில் வேலை செய்கின்றன, “ஆக்ஸிஜனை தனிமைப்படுத்துகிறது, உலோகங்களை தனிமைப்படுத்துதல், மற்றும் ஒருவரையொருவர் தனிமைப்படுத்துதல்” நுண்ணிய அளவில், மணிகளுக்கு உண்மையான உறக்கநிலை போன்ற பாதுகாப்பை அடைதல்.

செயல்பாட்டு வழிகாட்டி: பயன்படுத்த தயாராக உள்ள தீர்வு

உங்கள் சோதனை முடிவுகளில் இறுதி மறுஉற்பத்தியை உறுதிசெய்ய, நாங்கள் கடுமையாக பரிந்துரைக்கிறோம்:

அலிகோட் சேமிப்பு: மேலே விவரிக்கப்பட்ட உகந்த பஃப்பரில் உள்ள மணிகளை மீண்டும் இணைத்து, அவற்றை ஒருமுறை பயன்படுத்தக்கூடிய தொகுதிகளாக மாற்றவும்.

பயன்பாட்டிற்கு முன் செயல்படுத்துதல்: அசல் பிணைப்பு இடையகத்துடன் இரண்டு முறை கழுவவும் (பாதுகாவலர்கள் இல்லாமல்) உகந்த பிணைப்பு செயல்பாட்டை மீட்டெடுக்க.

தரக் கட்டுப்பாடு: ஒவ்வொரு தொகுதி மணிகளையும் பயன்படுத்துவதற்கு முன், ஒரு சிறிய அளவிலான சோதனையை மேற்கொள்ளவும் 10 ng நிலையான DNA துண்டு மீட்பு விகிதம் உங்கள் தகுதி அளவுகோல்களை சந்திக்கிறதா என்பதை தீர்மானிக்க.

தயாரிப்பு அறிமுகம்

முதிர்ந்த மணி வடிவமைப்பு மற்றும் உற்பத்தி செயல்முறைகளை மேம்படுத்துதல், ஷாங்காய் லிங்ஜுன் பயோடெக்னாலஜி கோ., லிமிடெட். அதன் உயர் செயல்திறனை உருவாக்கியுள்ளது FR0015 தொடர் சிலிக்கா காந்த மணிகள். சராசரி துகள் அளவு 400nm-500nm, வலுவான காந்த பண்புகள், சிறந்த monodispersity, மற்றும் அரை-வண்டல் நேரம் அதிகமாக உள்ளது 1 மணி, இந்த தயாரிப்பு வரிசை முதன்மையாக பொருத்தமானது:

சீரம்/பிளாஸ்மா செல் இல்லாத டிஎன்ஏ/ஆர்என்ஏ துண்டு பிரித்தெடுத்தல்

டிஎன்ஏ துண்டு வரிசைப்படுத்துதல்/தேர்வு

சிறந்த பீட் சஸ்பென்ஷன் நிலைப்புத்தன்மை மற்றும் பரந்த அளவு வரம்பில் டிஎன்ஏ/ஆர்என்ஏ துண்டுகளின் இணைப் பிரித்தெடுத்தல் தேவைப்படும் பயன்பாடுகள்.

முடிவுரை

ஸ்திரத்தன்மையின் அறிவியல் என்பது மறுஉற்பத்தியின் மூலக்கல்லாகும்

காந்த மணிகளைத் தேர்ந்தெடுப்பது ஒரு நுட்பம் மட்டுமல்ல, இது ஒரு துல்லியமான கணினி பொறியியல் திட்டம். ஒரு ஆழமான உகந்த தாங்கல் ஒரு போன்றது “நட்சத்திர உறக்கநிலை நெற்று” மணிகளுக்காக வடிவமைக்கப்பட்டது, சேமிப்பகத்தின் போது அசையாமல் நிற்க நேரத்தை அனுமதிக்கிறது மற்றும் பயன்பாட்டின் போது அவற்றின் முழு திறனையும் பிரகாசிக்கச் செய்கிறது. கவனத்தைத் தேர்ந்தெடுப்பது என்பது ஒவ்வொரு சுற்று சோதனைகளிலும் இறுதி நிலைத்தன்மையைத் தேர்ந்தெடுப்பதாகும். இடையகத்தின் அடிப்படை அறிவியலுடன் தொடங்குவோம் மற்றும் காந்த மணி செயல்திறனின் நம்பகமான எல்லைகளை மறுவரையறை செய்வோம்.

சப்ளையர்

ஷாங்காய் லிங்ஜுன் பயோடெக்னாலஜி கோ., லிமிடெட்இல் நிறுவப்பட்டது 2016 உயிர் காந்த பொருட்கள் மற்றும் நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் உலைகளின் தொழில்முறை உற்பத்தியாளர்.

நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் சுத்திகரிப்பு ஆகியவற்றில் எங்களுக்கு சிறந்த அனுபவம் உள்ளது, புரத சுத்திகரிப்பு, செல் பிரிப்பு, இரசாயன ஒளிர்வு, மற்றும் பிற தொழில்நுட்ப துறைகள்.

எங்கள் தயாரிப்புகள் பல துறைகளில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, மருத்துவ பரிசோதனை போன்றவை, மரபணு சோதனை, பல்கலைக்கழக ஆராய்ச்சி, மரபணு இனப்பெருக்கம், மற்றும் பல. நாங்கள் தயாரிப்புகளை வழங்குவது மட்டுமல்லாமல் OEM ஐயும் மேற்கொள்ள முடியும், ODM, மற்றும் பிற தேவைகள். உங்களுக்கு தொடர்புடைய தேவை இருந்தால், தயவு செய்து எங்களை தொடர்பு கொள்ளவும் .