كيف يعزز الخرز المغناطيسي اختبار RSV: الأتمتة & حساسية

مقدمة

يتم استخدام استخلاص الحمض النووي المعتمد على الخرز المغناطيسي في تنقية الحمض النووي الريبي الفيروسي عالي الجودة من عينات الجهاز التنفسي المعقدة من خلال عمليات ربط وغسل فعالة ومحددة أثناء استخلاص الفيروس المخلوي التنفسي. (RSV) الحمض النووي. تلبي هذه الطريقة المتطلبات الصارمة لتقنيات الكشف الجزيئي شديدة الحساسية. مع خصائصه الأتمتة, إنتاجية عالية, والسلامة العالية, أصبح استخراج الحمض النووي القائم على الخرز المغناطيسي أداة قوية لا غنى عنها للكشف عن مسببات الأمراض RSV في المختبرات السريرية الحديثة ومجالات الصحة العامة.

1. طلب: سير عمل محدد للطريقة القائمة على الخرز المغناطيسي في استخلاص الحمض النووي RSV

يتضمن المبدأ الأساسي لاستخراج الحمض النووي RSV القائم على الخرز المغناطيسي استخدام الخرز المغناطيسي النانوي الفائق المغنطيسي السطحي. تحت ظروف عازلة محددة, هذه الخرز تمتز بشكل انتقائي الأحماض النووية (الحمض النووي الريبي) من خلال التفاعلات الكهروستاتيكية, التفاعلات مسعور, أو الرابطة الهيدروجينية, فصلها عن البروتينات, الحطام الخلوي, وغيرها من الشوائب. أخيراً, تتم تصفية الأحماض النووية المنقاة.

سير العمل المحدد لاستخراج RSV من العينات السريرية (مثل مسحات البلعوم الأنفي أو سائل غسل القصبات الهوائية) على النحو التالي:

1.1 تحلل العينة:

يتم خلط العينة المجمعة مع محلول تحلل يحتوي على تركيزات عالية من الأملاح الفوضوية (على سبيل المثال, إيزوثيوسيانات الجوانيدين) والمشوهات (على سبيل المثال, الحزب الديمقراطي الصربي). الأغراض الرئيسية لهذه الخطوة هي:

لتعطيل الفيروس وإفساد بروتينات القفيصة الفيروسية, إطلاق الحمض النووي الريبي الفيروسي (RSV هو فيروس RNA).

لتحطيم RNases في العينة, منع تدهور الحمض النووي الريبي.

لإفساد وتعطيل الجزيئات البيولوجية الأخرى (على سبيل المثال, البروتينات, السكريات, الدهون) في العينة.

1.2 امتزاز الحمض النووي

تتم إضافة الخرز المغناطيسي إلى المحللة. تحت ظروف مناسبة لدرجة الحموضة وتركيز أيون الملح, تمتز جزيئات الحمض النووي سالبة الشحنة على وجه التحديد على سطح الخرز المغناطيسي (المغلفة عادة بالسيليكا) من خلال الروابط الهيدروجينية والتفاعلات الكارهة للماء, تشكيل أ “حبة الحمض النووي المغناطيسي” معقد.

1.3 غسل

تحت مجال مغناطيسي خارجي, يتم امتصاص مجمع الحمض النووي ذو الخرز المغناطيسي على جدار الأنبوب, والنفايات السائلة التي تحتوي على البروتينات, الحطام الخلوي, ويتم التخلص من الشوائب الأخرى. ثم, يتم غسل الخرزات 2-3 مرات بمحلول غسيل إيثانول 70%-80% لإزالة الأملاح المتبقية., مثبطات, والشوائب العضوية.

1.4 تجفيف

يتم طرد العينة لفترة وجيزة أو تركها في مكانها للسماح للإيثانول المتبقي بالتبخر تمامًا, تجنب أي آثار ضارة على PCR اللاحقة أو تفاعلات التضخيم الأخرى.

1.5 شطف

تتم إزالة المجال المغناطيسي, والمياه الخالية من ريبونوكلياز أو منطقة عازلة منخفضة الملح (على سبيل المثال, TE العازلة) يضاف. تحت ظروف القوة الأيونية المنخفضة, يتم تعطيل قوة الربط بين الأحماض النووية والخرز المغناطيسي, ويتم تحرير الحمض النووي الريبي (RNA) من الخرز إلى المخزن المؤقت للشطف, تسفر عن عالية النقاء RSV RNA.

2. مزايا الطريقة القائمة على الخرز المغناطيسي في استخلاص الحمض النووي RSV

مقارنة بالطرق التقليدية لاستخراج الفينول كلوروفورم والطرق القائمة على الأعمدة, توفر الطريقة القائمة على الخرزة المغناطيسية مزايا كبيرة لاستخراج الحمض النووي RSV:

• الأتمتة العالية والإنتاجية: متوافق للغاية مع أدوات الاستخراج الآلي, تمكين المعالجة المتوازية في 96 لوحة جيدة أو حتى إنتاجية أعلى. وهذا يحسن الكفاءة بشكل كبير, تلبية متطلبات الاختبارات السريرية واسعة النطاق, وخاصة خلال مواسم الذروة RSV.
• عملية بسيطة, وقت- وتوفير العمالة: حتى العمليات اليدوية واضحة نسبيًا, تجنب خطوات الطرد المركزي وتغيير الأنبوب المتعددة المطلوبة في الأساليب القائمة على الأعمدة. وهذا يقلل من الخطأ البشري وكثافة اليد العاملة. يمكن إكمال العملية بأكملها في غضون 30-60 دقيقة.
• درجة نقاء عالية وإنتاجية: يمتص السطح المعدل خصيصًا للخرزات المغناطيسية الحمض النووي الريبي (RNA) بكفاءة ويزيل مثبطات PCR بشكل فعال (على سبيل المثال, الهيموجلوبين, الغلوبولين المناعي, الهيبارين, اليوريا). الحمض النووي الريبي المستخرج عالي النقاء, مما يجعلها مناسبة للغاية للكشف عن RT-qPCR الحساس في المصب, وبالتالي تحسين دقة الكشف والحساسية.
• سلامة عالية: يلغي استخدام الكواشف السامة مثل الفينول والكلوروفورم, حماية المشغلين’ الصحة والحد من التلوث المختبري.
• مرونة عالية: يمكن في كثير من الأحيان تكييف نفس مجموعة الخرز المغناطيسي مع أنواع العينات المختلفة (مسحات, مصل, الأنسجة, وسائل الإعلام ثقافة الخلية, إلخ.) مع تعديلات طفيفة على التحلل والظروف الملزمة.
• لا بقايا: يتجنب مخاطر بقايا الألياف الغشائية التي قد تحدث في الطرق القائمة على الأعمدة.

3. الآفاق المستقبلية

آفاق الأساليب القائمة على الخرز المغناطيسي في الكشف عن RSV والمجال الأوسع للتشخيص الجزيئي واسعة النطاق:

• التكامل مع POCT (اختبار نقطة الرعاية): تطوير رقائق ميكروفلويديك أو خراطيش دمج التحلل, اِستِخلاص, التضخيم, والكشف, مع الخرز المغناطيسي كوسيلة الاستخراج الأساسية. وهذا يمكن أن يتيح التشخيص السريع لفيروس RSV بجانب السرير, مناسبة للمستشفيات الأولية, عيادات, وحتى الأسر.
• الكشف عن مسببات الأمراض المتعددة: غالبًا ما تشبه أعراض الإصابة بفيروس RSV أعراض فيروس الأنفلونزا, سارس-كوف-2, الفيروس الغدي, إلخ. إن طبيعة الإنتاجية العالية للطرق المعتمدة على الخرز المغناطيسي تجعلها مثالية للاستخراج المتزامن للأحماض النووية من فيروسات متعددة في عينة واحدة, تمكين تعدد إرسال PCR أو التسلسل للتشخيص التفريقي لمسببات الأمراض.
• التطبيق المباشر في PCR الرقمي وتسلسل الجيل التالي (خ ع): للتقنيات التي تتطلب درجة عالية جدًا من نقاء وسلامة الحمض النووي (على سبيل المثال, القياس الكمي الدقيق للحمل الفيروسي, تسلسل الجينوم الفيروسي, ومراقبة البديل), يمكن للطرق القائمة على الخرز المغناطيسي أن توفر قوالب عالية الجودة, تطوير أبحاث الطب الدقيق وعلم الفيروسات.
• تحسين وتكامل الأطقم: سوف تصبح مجموعات المستقبل أكثر “الكل في واحد” و “معبأة مسبقًا,” تقليل الخطوات التي تتطلب فتح الأغطية, التقليل من مخاطر تلوث الهباء الجوي, وتمكين مؤتمتة بالكامل “التحميل والذهاب” سير العمل.
• خفض التكلفة والاعتماد على نطاق أوسع: مع نضوج عمليات إنتاج الخرز المغناطيسي وزيادة المنافسة في السوق, سوف تنخفض التكاليف بشكل أكبر, مما يجعل هذه التكنولوجيا متاحة على نطاق أوسع في إعدادات الرعاية الصحية الأولية.

4. توصيات الخرزة المغناطيسية

عند اختيار الخرز المغناطيسي, عوامل مثل حجم الجسيمات, تركيز, تعديل السطح, التشتت, وينبغي النظر في الاستجابة المغناطيسية. وهنا بعض التوصيات:

• معايير الاختيار الأساسية:
• خصوصية: كفاءة امتصاص عالية للحمض النووي الريبي (RNA). (وخاصة شظايا الحمض النووي الريبي الفيروسي الأقصر).
• حساسية: مناسبة لعينات الحمل الفيروسي المنخفض ذات الإنتاجية العالية.
• نقاء: يزيل بشكل فعال مثبطات PCR المختلفة.
• استقرار: الحد الأدنى من الاختلاف من دفعة إلى دفعة, أداء مستقر, ومدة صلاحية طويلة.
• التوافق: متوافق مع أداة الاستخراج الآلي أو سير العمل اليدوي.

5. توصية العلامة التجارية

شركة شنغهاي لينغجون للتكنولوجيا الحيوية, المحدودة. تقدم نماذج مختلفة من الخرز المغناطيسي المعتمد على السيليكا والمستخدم على نطاق واسع في تشخيص الأمراض المسببة للأمراض. خاصة, هُم 160024 الخرز المغناطيسي مناسب للفيروس المخلوي التنفسي (RSV) اِستِخلاص. توفر هذه الخرزات حساسية كشف عالية للغاية, تمكين الفحص المبكر أثناء الإصابة وتوفير وقت ثمين لمكافحة الأمراض والوقاية منها.

【مواصفات المنتج】

رمز المنتج: 160024

المحتوى الصلب: 100 ملغم/مل

التعبئة والتغليف: 2 مل / 10 مل / 50 مل / 500 مل / 1000 مل

【معلمات المنتج】

المجموعة النشطة: سي-أوه

مصفوفة الخرزة المغناطيسية: السيليكا

متوسط ​​حجم الجسيمات: 1.4 ميكرومتر

قوة التشبع المغناطيسي: 75 ± 5 الاتحاد الاقتصادي والنقدي / ز

【مزايا المنتج】

ارتفاع معدل الامتزاز: تجاوز الحد الأقصى لمعدل الاسترداد 95%, مع أداء امتصاص قوي لكل من الأجزاء الكبيرة والصغيرة.

خصائص مغناطيسية قوية: قوة التشبع المغناطيسي 75 ± 5 الاتحاد الاقتصادي والنقدي / ز.

مناسب بشكل خاص لاستخلاص الحمض النووي الفيروسي واستخراج أجزاء الحمض النووي الخالية من المصل/البلازما.

درجة نقاء وحساسية عالية في استخلاص الحمض النووي.

عملية إنتاج ناضجة وتناسق ممتاز من دفعة إلى دفعة.

في ملخص, بسبب كفاءته, أمان, والأتمتة, أصبحت الطريقة القائمة على الخرزة المغناطيسية هي النهج السائد لاستخراج الحمض النووي RSV وستلعب دورًا متزايد الأهمية في تشخيص وأبحاث مسببات الأمراض في المستقبل. يعد اختيار الخرز المغناطيسي المناسب خطوة حاسمة في ضمان نتائج كشف دقيقة وموثوقة.

مزود

شركة شنغهاي لينغجون للتكنولوجيا الحيوية, المحدودة.تأسست في 2016 وهي شركة متخصصة في تصنيع المواد المغناطيسية الحيوية وكواشف استخلاص الحمض النووي.

لدينا خبرة غنية في استخراج وتنقية الحمض النووي, تنقية البروتين, فصل الخلايا, التألق الكيميائي, وغيرها من المجالات التقنية.

منتجاتنا تستخدم على نطاق واسع في العديد من المجالات, مثل الفحوصات الطبية, الاختبارات الجينية, البحوث الجامعية, التكاثر الوراثي, وهكذا. نحن لا نقدم المنتجات فحسب، بل يمكننا أيضًا إجراء تصنيع المعدات الأصلية, أوديإم, وغيرها من الاحتياجات. إذا كان لديك حاجة ذات صلة, لا تتردد في الاتصال بنا .