Come le sfere magnetiche migliorano il test RSV: Automazione & Sensibilità

Introduzione

L'estrazione dell'acido nucleico a base di sfere magnetiche viene utilizzata nella purificazione dell'RNA virale di alta qualità da campioni respiratori complessi attraverso processi di legame e lavaggio efficienti e specifici durante l'estrazione del virus respiratorio sinciziale (RSV) acido nucleico. Questo metodo soddisfa i severi requisiti delle tecnologie di rilevamento molecolare a valle altamente sensibili. Con le sue caratteristiche di automazione, rendimento elevato, e alta sicurezza, L'estrazione dell'acido nucleico basata su sfere magnetiche è diventata uno strumento indispensabile e potente per il rilevamento dei patogeni RSV nei moderni laboratori clinici e nei campi della sanità pubblica.

1. Applicazione: Flusso di lavoro specifico del metodo basato su sfere magnetiche nell'estrazione dell'acido nucleico RSV

Il principio fondamentale dell'estrazione dell'acido nucleico RSV basato su sfere magnetiche prevede l'uso di sfere micro-nano magnetiche superparamagnetiche modificate in superficie. In condizioni tampone specifiche, queste perle assorbono selettivamente gli acidi nucleici (RNA) attraverso interazioni elettrostatiche, interazioni idrofobiche, o legame idrogeno, separandoli dalle proteine, detriti cellulari, e altre impurità. Finalmente, gli acidi nucleici purificati vengono eluiti.

Il flusso di lavoro specifico per l'estrazione dell'RSV da campioni clinici (come tamponi nasofaringei o liquido di lavaggio broncoalveolare) è il seguente:

1.1 Lisi del campione:

Il campione raccolto viene miscelato con un tampone di lisi contenente alte concentrazioni di sali caotropici (per esempio., isotiocianato di guanidina) e denaturanti (per esempio., Scheda di sicurezza). Gli scopi principali di questo passaggio sono:

Per inattivare il virus e denaturare le proteine ​​del capside virale, rilasciando RNA virale (L'RSV è un virus a RNA).

Per degradare le RNasi nel campione, prevenendo la degradazione dell’RNA.

Per denaturare e inattivare altre macromolecole biologiche (per esempio., proteine, polisaccaridi, lipidi) nel campione.

1.2 Adsorbimento di acidi nucleici

Al lisato vengono aggiunte sfere magnetiche. In condizioni adeguate di pH e concentrazione di ioni salini, le molecole di acido nucleico caricate negativamente vengono adsorbite in modo specifico sulla superficie delle sfere magnetiche (tipicamente rivestito di silice) attraverso legami idrogeno e interazioni idrofobiche, formando un “perla magnetica dell'acido nucleico” complesso.

1.3 Lavaggio

Sotto un campo magnetico esterno, il complesso perlina magnetica-acido nucleico viene adsorbito sulla parete del tubo, e il liquido di scarto contenente proteine, detriti cellulari, e altre impurità vengono scartate. Poi, le sfere vengono lavate 2–3 volte con una soluzione di lavaggio di etanolo al 70%–80% per rimuovere i sali residui, inibitori, e impurità organiche.

1.4 Essiccazione

Il campione viene centrifugato brevemente o lasciato riposare per consentire all'etanolo residuo di evaporare completamente, evitando qualsiasi effetto avverso sulla PCR successiva o su altre reazioni di amplificazione.

1.5 Eluizione

Il campo magnetico viene rimosso, e acqua priva di RNasi o un tampone a basso contenuto di sale (per esempio., Buffer TE) viene aggiunto. In condizioni di bassa forza ionica, la forza legante tra gli acidi nucleici e le sfere magnetiche viene interrotta, e l'RNA viene rilasciato dalle sfere nel tampone di eluizione, producendo RNA RSV di elevata purezza.

2. Vantaggi del metodo basato su perline magnetiche nell'estrazione dell'acido nucleico RSV

Rispetto all'estrazione tradizionale con fenolo-cloroformio e ai metodi basati su colonna, il metodo basato su sfere magnetiche offre vantaggi significativi per l'estrazione dell'acido nucleico dell'RSV:

• Elevata automazione e produttività: Altamente compatibile con gli strumenti di estrazione automatizzata, consentendo l'elaborazione parallela in piastre da 96 pozzetti o produttività ancora più elevate. Ciò migliora notevolmente l'efficienza, soddisfare le esigenze dei test clinici su larga scala, soprattutto durante le stagioni di punta dell'RSV.
• Operazione semplice, Tempo- e risparmio di manodopera: Anche le operazioni manuali sono relativamente semplici, evitando le molteplici fasi di centrifugazione e cambio delle provette richieste nei metodi basati su colonne. Ciò riduce l’errore umano e l’intensità del lavoro. L'intero processo può essere completato entro 30-60 minuti.
• Elevata purezza e resa: La superficie appositamente modificata delle sfere magnetiche assorbe efficacemente l'RNA e rimuove efficacemente gli inibitori della PCR (per esempio., emoglobina, immunoglobuline, eparina, urea). L'RNA estratto è di elevata purezza, rendendolo altamente adatto per il rilevamento sensibile RT-qPCR a valle, migliorando così la precisione e la sensibilità del rilevamento.
• Alta sicurezza: Elimina l'uso di reagenti tossici come fenolo e cloroformio, tutelare gli operatori’ salute e riducendo la contaminazione del laboratorio.
• Elevata flessibilità: Lo stesso kit di biglie magnetiche può spesso essere adattato a vari tipi di campioni (tamponi, siero, tessuti, mezzi di coltura cellulare, ecc.) con piccoli aggiustamenti alla lisi e alle condizioni di legame.
• No Residue: Evita il rischio di residui di fibre di membrana che possono verificarsi nei metodi basati su colonne.

3. Prospettive future

Le prospettive dei metodi basati su sfere magnetiche nel rilevamento dell’RSV e nel campo più ampio della diagnostica molecolare sono ampie:

• Integrazione con POCT (Test al punto di cura): Sviluppo di chip o cartucce microfluidici che integrano la lisi, estrazione, amplificazione, e rilevamento, con sfere magnetiche come mezzo di estrazione del nucleo. Ciò potrebbe consentire una rapida diagnosi dell’RSV al letto del paziente, adatto per ospedali primari, cliniche, e anche le famiglie.
• Rilevamento di agenti patogeni multiplex: I sintomi dell’infezione da RSV spesso assomigliano a quelli del virus dell’influenza, SARS-CoV-2, adenovirus, ecc. La natura ad alta produttività dei metodi basati su biglie magnetiche li rende ideali per l'estrazione simultanea di acidi nucleici da più virus in un unico campione, consentendo la PCR multiplex o il sequenziamento per la diagnosi differenziale dei patogeni.
• Applicazione diretta nella PCR digitale e nel sequenziamento di nuova generazione (NGS): Per tecnologie che richiedono purezza e integrità degli acidi nucleici estremamente elevate (per esempio., quantificazione precisa della carica virale, sequenziamento del genoma virale, e monitoraggio delle varianti), I metodi basati su perline magnetiche possono fornire modelli di alta qualità, promuovere la ricerca in medicina di precisione e virologia.
• Ottimizzazione e integrazione dei kit: I kit futuri diventeranno di più “tutto in uno” E “preconfezionato,” riducendo i passaggi che richiedono l'apertura dei coperchi, riducendo al minimo i rischi di contaminazione da aerosol, e abilitandolo in modo completamente automatizzato “carica e vai” flussi di lavoro.
• Riduzione dei costi e adozione più ampia: Con la maturazione dei processi di produzione delle perle magnetiche e l’aumento della concorrenza sul mercato, i costi diminuiranno ulteriormente, rendere questa tecnologia più ampiamente accessibile nelle strutture sanitarie primarie.

4. Raccomandazioni sulle sfere magnetiche

Quando si selezionano le perline magnetiche, fattori come la dimensione delle particelle, concentrazione, modificazione della superficie, disperdibilità, e la reattività magnetica dovrebbe essere considerata. Ecco alcuni consigli:

• Criteri di selezione fondamentali:
• Specificità: Elevata efficienza di adsorbimento per l'RNA (frammenti di RNA virale particolarmente più corti).
• Sensibilità: Adatto per campioni a bassa carica virale con resa elevata.
• Purezza: Rimuove efficacemente vari inibitori della PCR.
• Stabilità: Variazione minima da lotto a lotto, prestazione stabile, e lunga durata.
• Compatibilità: Compatibile con il vostro strumento di estrazione automatizzata o con il flusso di lavoro manuale.

5. Raccomandazione del marchio

Shanghai Lingjun Biotecnologia Co., Ltd. offre vari modelli di sfere magnetiche a base di silice ampiamente utilizzate nella diagnostica delle malattie patogene. Nello specifico, loro 160024 le sfere magnetiche sono adatte per il virus respiratorio sinciziale (RSV) estrazione. Queste sfere forniscono una sensibilità di rilevamento estremamente elevata, consentendo uno screening precoce durante l’infezione e offrendo tempo prezioso per il controllo e la prevenzione della malattia.

【Specifiche del prodotto】

Codice prodotto: 160024

Contenuto solido: 100 mg/ml

Confezione: 2 ml / 10 ml / 50 ml / 500 ml / 1000 ml

【Parametri del prodotto】

Gruppo attivo: Si-OH

Matrice di perline magnetiche: Silice

Dimensione media delle particelle: 1.4 µm

Forza di saturazione magnetica: 75 ± 5 emù/g

【Vantaggi del prodotto】

Alto tasso di assorbimento: Tasso di recupero massimo superato 95%, con forti prestazioni di assorbimento sia per frammenti grandi che piccoli.

Forti proprietà magnetiche: Forza di saturazione magnetica di 75 ± 5 emù/g.

Particolarmente adatto per l'estrazione di acidi nucleici virali e per l'estrazione di frammenti di DNA liberi da siero/plasma.

Elevata purezza e sensibilità nell'estrazione dell'acido nucleico.

Processo di produzione maturo ed eccellente coerenza tra batch.

In sintesi, grazie alla sua efficienza, sicurezza, e automazione, il metodo basato su sfere magnetiche è diventato l'approccio tradizionale per l'estrazione dell'acido nucleico dell'RSV e svolgerà un ruolo sempre più importante nella futura diagnostica e ricerca sui patogeni. La selezione delle sfere magnetiche appropriate è un passaggio fondamentale per garantire risultati di rilevamento accurati e affidabili.

Fornitore

Shanghai Lingjun Biotecnologia Co., Ltd.è stato fondato nel 2016 che è un produttore professionale di materiali biomagnetici e reagenti per l'estrazione degli acidi nucleici.

Abbiamo una ricca esperienza nell'estrazione e purificazione degli acidi nucleici, purificazione delle proteine, separazione cellulare, chemiluminescenza, e altri campi tecnici.

I nostri prodotti sono ampiamente utilizzati in molti campi, come i test medici, test genetici, ricerca universitaria, allevamento genetico, e così via. Non solo forniamo prodotti, ma possiamo anche intraprendere l'OEM, ODM, e altre esigenze. Se hai un'esigenza correlata, non esitate a contattarci .