कैसे चुंबकीय मोती आरएसवी परीक्षण को बढ़ाते हैं: स्वचालन & संवेदनशीलता

परिचय

चुंबकीय मनका-आधारित न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण का उपयोग श्वसन सिंकाइटियल वायरस के निष्कर्षण के दौरान कुशल और विशिष्ट बाइंडिंग और धुलाई प्रक्रियाओं के माध्यम से जटिल श्वसन नमूनों से उच्च गुणवत्ता वाले वायरल आरएनए के शुद्धिकरण में किया जाता है। (आरएसवी) न्यूक्लिक अम्ल. यह विधि अत्यधिक संवेदनशील डाउनस्ट्रीम आणविक पहचान प्रौद्योगिकियों की कठोर आवश्यकताओं को पूरा करती है. स्वचालन की अपनी विशेषताओं के साथ, उच्च थ्रूपुट, और उच्च सुरक्षा, आधुनिक नैदानिक ​​प्रयोगशालाओं और सार्वजनिक स्वास्थ्य क्षेत्रों में आरएसवी रोगज़नक़ का पता लगाने के लिए चुंबकीय मनका-आधारित न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण एक अनिवार्य और शक्तिशाली उपकरण बन गया है।.

1. आवेदन: आरएसवी न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण में चुंबकीय मनका-आधारित विधि का विशिष्ट कार्यप्रवाह

चुंबकीय मनका-आधारित आरएसवी न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण के मूल सिद्धांत में सतह-संशोधित सुपरपरामैग्नेटिक माइक्रो-नैनो चुंबकीय मोतियों का उपयोग शामिल है. विशिष्ट बफ़र शर्तों के तहत, ये मोती चुनिंदा रूप से न्यूक्लिक एसिड को सोखते हैं (शाही सेना) इलेक्ट्रोस्टैटिक इंटरैक्शन के माध्यम से, हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन, या हाइड्रोजन बॉन्डिंग, उन्हें प्रोटीन से अलग करना, कोशिकामय मलबे, और अन्य अशुद्धियाँ. अंत में, शुद्ध किए गए न्यूक्लिक एसिड को निक्षालित किया जाता है.

नैदानिक ​​नमूनों से आरएसवी निकालने के लिए विशिष्ट कार्यप्रवाह (जैसे कि नासॉफिरिन्जियल स्वैब या ब्रोन्कोएल्वियोलर लैवेज तरल पदार्थ) इस प्रकार है:

1.1 नमूना विश्लेषण:

एकत्र किए गए नमूने को एक लाइसिस बफर के साथ मिलाया जाता है जिसमें कैओट्रोपिक लवण की उच्च सांद्रता होती है (जैसे, गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट) और विकृतीकरणकर्ता (जैसे, एसडीएस). इस कदम के मुख्य उद्देश्य हैं:

वायरस को निष्क्रिय करने और वायरल कैप्सिड प्रोटीन को विकृत करने के लिए, वायरल आरएनए जारी करना (आरएसवी एक आरएनए वायरस है).

नमूने में RNases को नीचा दिखाने के लिए, आरएनए क्षरण को रोकना.

अन्य जैविक मैक्रोमोलेक्यूल्स को विकृत और निष्क्रिय करना (जैसे, प्रोटीन, पॉलिसैक्राइड, लिपिड) नमूने में.

1.2 न्यूक्लिक एसिड अवशोषण

लाइसेट में चुंबकीय मोती मिलाए जाते हैं. उपयुक्त पीएच और नमक आयन सांद्रता स्थितियों के तहत, नकारात्मक रूप से आवेशित न्यूक्लिक एसिड अणु विशेष रूप से चुंबकीय मोतियों की सतह पर सोख लेते हैं (आमतौर पर सिलिका-लेपित) हाइड्रोजन बॉन्डिंग और हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन के माध्यम से, एक गठन “न्यूक्लिक एसिड-चुंबकीय मनका” जटिल.

1.3 धुलाई

किसी बाहरी चुंबकीय क्षेत्र के अंतर्गत, चुंबकीय मनका-न्यूक्लिक एसिड कॉम्प्लेक्स ट्यूब की दीवार पर अवशोषित होता है, और प्रोटीन युक्त अपशिष्ट तरल, कोशिकामय मलबे, और अन्य अशुद्धियाँ त्याग दी जाती हैं. तब, अवशिष्ट लवण को हटाने के लिए मोतियों को 70%-80% इथेनॉल धोने के घोल से 2-3 बार धोया जाता है, अवरोधकों, और जैविक अशुद्धियाँ.

1.4 सुखाने

अवशिष्ट इथेनॉल को पूरी तरह से वाष्पित करने की अनुमति देने के लिए नमूने को संक्षेप में सेंट्रीफ्यूज किया जाता है या खड़े रहने के लिए छोड़ दिया जाता है, बाद के पीसीआर या अन्य प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं पर किसी भी प्रतिकूल प्रभाव से बचना.

1.5 क्षालन

चुंबकीय क्षेत्र हटा दिया जाता है, और RNase मुक्त पानी या कम नमक वाला बफर (जैसे, टीई बफर) जोड़ा जाता है. कम आयनिक शक्ति की स्थिति में, न्यूक्लिक एसिड और चुंबकीय मोतियों के बीच बंधन बल बाधित हो जाता है, और आरएनए को मोतियों से रेफरेंस बफर में छोड़ा जाता है, उच्च शुद्धता वाले आरएसवी आरएनए का उत्पादन.

2. आरएसवी न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण में चुंबकीय मनका-आधारित विधि के लाभ

पारंपरिक फिनोल-क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण और स्तंभ-आधारित तरीकों की तुलना में, चुंबकीय मनका-आधारित विधि आरएसवी न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण के लिए महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करती है:

• उच्च स्वचालन और थ्रूपुट: स्वचालित निष्कर्षण उपकरणों के साथ अत्यधिक संगत, 96-वेल प्लेटों या इससे भी अधिक थ्रूपुट में समानांतर प्रसंस्करण को सक्षम करना. इससे कार्यक्षमता में काफी सुधार होता है, बड़े पैमाने पर नैदानिक ​​​​परीक्षण की मांगों को पूरा करना, विशेष रूप से आरएसवी पीक सीज़न के दौरान.
• सरल ऑपरेशन, समय- और श्रम-बचत: यहां तक ​​कि मैन्युअल ऑपरेशन भी अपेक्षाकृत सरल हैं, स्तंभ-आधारित विधियों में आवश्यक एकाधिक सेंट्रीफ्यूजेशन और ट्यूब-परिवर्तन चरणों से बचना. इससे मानवीय त्रुटि और श्रम तीव्रता कम हो जाती है. पूरी प्रक्रिया 30-60 मिनट के भीतर पूरी की जा सकती है.
• उच्च शुद्धता और उपज: चुंबकीय मोतियों की विशेष रूप से संशोधित सतह आरएनए को कुशलतापूर्वक अवशोषित करती है और पीसीआर अवरोधकों को प्रभावी ढंग से हटा देती है (जैसे, हीमोग्लोबिन, इम्युनोग्लोबुलिन, हेपरिन, यूरिया). निकाला गया आरएनए उच्च शुद्धता का होता है, जो इसे संवेदनशील डाउनस्ट्रीम आरटी-क्यूपीसीआर जांच के लिए अत्यधिक उपयुक्त बनाता है, जिससे पता लगाने की सटीकता और संवेदनशीलता में सुधार होता है.
• उच्च सुरक्षा: फिनोल और क्लोरोफॉर्म जैसे जहरीले अभिकर्मकों के उपयोग को समाप्त करता है, ऑपरेटरों की सुरक्षा’ स्वास्थ्य और प्रयोगशाला संदूषण को कम करना.
• उच्च लचीलापन: एक ही चुंबकीय मनका किट को अक्सर विभिन्न नमूना प्रकारों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है (फाहे, सीरम, ऊतकों, सेल कल्चर मीडिया, वगैरह।) लाइसिस और बाइंडिंग स्थितियों में मामूली समायोजन के साथ.
• कोई अवशेष नहीं: स्तंभ-आधारित विधियों में होने वाले झिल्ली फाइबर अवशेषों के जोखिम से बचा जाता है.

3. भविष्य की संभावनाओं

आरएसवी का पता लगाने और आणविक निदान के व्यापक क्षेत्र में चुंबकीय मनका-आधारित तरीकों की संभावनाएं व्यापक हैं:

• POCT के साथ एकीकरण (प्वाइंट-ऑफ-केयर परीक्षण): लाइसिस को एकीकृत करने वाले माइक्रोफ्लुइडिक चिप्स या कार्ट्रिज का विकास, निष्कर्षण, विस्तारण, और पता लगाना, मुख्य निष्कर्षण माध्यम के रूप में चुंबकीय मोतियों के साथ. इससे आरएसवी का त्वरित निदान संभव हो सकेगा, प्राथमिक अस्पतालों के लिए उपयुक्त, क्लिनिक, और यहां तक ​​कि घर-परिवार भी.
• मल्टीप्लेक्स रोगज़नक़ का पता लगाना: आरएसवी संक्रमण के लक्षण अक्सर इन्फ्लूएंजा वायरस से मिलते जुलते हैं, SARS-CoV-2, एडिनोवायरस, वगैरह. चुंबकीय मनका-आधारित विधियों की उच्च-थ्रूपुट प्रकृति उन्हें एक ही नमूने में कई वायरस से न्यूक्लिक एसिड के एक साथ निष्कर्षण के लिए आदर्श बनाती है।, विभेदक रोगज़नक़ निदान के लिए मल्टीप्लेक्स पीसीआर या अनुक्रमण को सक्षम करना.
• डिजिटल पीसीआर और अगली पीढ़ी के अनुक्रमण में प्रत्यक्ष अनुप्रयोग (एनजीएस): अत्यधिक उच्च न्यूक्लिक एसिड शुद्धता और अखंडता की आवश्यकता वाली प्रौद्योगिकियों के लिए (जैसे, सटीक वायरल लोड मात्रा का ठहराव, वायरल जीनोम अनुक्रमण, और भिन्न निगरानी), चुंबकीय मनका-आधारित विधियाँ उच्च-गुणवत्ता वाले टेम्पलेट प्रदान कर सकती हैं, सटीक चिकित्सा और विषाणु विज्ञान अनुसंधान को आगे बढ़ाना.
• किटों का अनुकूलन और एकीकरण: भविष्य में किटें और अधिक हो जाएंगी “ऑल - इन - वन” और “पहले से पैक,” ढक्कन खोलने की आवश्यकता वाले चरणों को कम करना, एयरोसोल संदूषण जोखिम को कम करना, और पूरी तरह से स्वचालित सक्षम करना “लोड करो और जाओ” workflows.
• लागत में कमी और व्यापक रूप से अपनाना: जैसे-जैसे चुंबकीय मनका उत्पादन प्रक्रिया परिपक्व होती है और बाजार में प्रतिस्पर्धा बढ़ती है, लागत में और कमी आएगी, प्राथमिक स्वास्थ्य देखभाल सेटिंग्स में इस तकनीक को अधिक व्यापक रूप से सुलभ बनाना.

4. चुंबकीय मनका अनुशंसाएँ

चुंबकीय मोतियों का चयन करते समय, कण आकार जैसे कारक, एकाग्रता, सतह संशोधन, dispersibility, और चुंबकीय प्रतिक्रिया पर विचार किया जाना चाहिए. यहां कुछ सिफ़ारिशें दी गई हैं:

• मुख्य चयन मानदंड:
• विशेषता: आरएनए के लिए उच्च सोखना दक्षता (विशेष रूप से छोटे वायरल आरएनए टुकड़े).
• संवेदनशीलता: उच्च उपज वाले कम वायरल लोड नमूनों के लिए उपयुक्त.
• पवित्रता: विभिन्न पीसीआर अवरोधकों को प्रभावी ढंग से हटाता है.
• स्थिरता: न्यूनतम बैच-दर-बैच भिन्नता, स्थिर प्रदर्शन, और लंबी शेल्फ लाइफ.
• अनुकूलता: आपके स्वचालित निष्कर्षण उपकरण या मैन्युअल वर्कफ़्लो के साथ संगत.

5. ब्रांड अनुशंसा

शंघाई लिंगजुन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी, लिमिटेड. रोगज़नक़ रोग निदान में व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले सिलिका-आधारित चुंबकीय मोतियों के विभिन्न मॉडल पेश करता है. विशेष रूप से, उनका 160024 चुंबकीय मोती श्वसन सिंकाइटियल वायरस के लिए उपयुक्त हैं (आरएसवी) निष्कर्षण. ये मोती अत्यंत उच्च पहचान संवेदनशीलता प्रदान करते हैं, संक्रमण के दौरान शीघ्र जांच को सक्षम करना और रोग नियंत्रण और रोकथाम के लिए बहुमूल्य समय प्रदान करना.

【उत्पाद विशिष्टताएँ】

उत्पाद कोड: 160024

यथार्थ सामग्री: 100 मिलीग्राम/एमएल

पैकेजिंग: 2 एमएल / 10 एमएल / 50 एमएल / 500 एमएल / 1000 एमएल

【उत्पाद पैरामीटर】

सक्रिय समूह: सी-ओह

चुंबकीय मनका मैट्रिक्स: सिलिका

औसत कण आकार: 1.4 माइक्रोन

चुंबकीय संतृप्ति शक्ति: 75 ± 5 एमु/जी

【उत्पाद लाभ】

उच्च अवशोषण दर: अधिकतम रिकवरी दर से अधिक 95%, बड़े और छोटे दोनों टुकड़ों के लिए मजबूत सोखना प्रदर्शन के साथ.

मजबूत चुंबकीय गुण: की चुंबकीय संतृप्ति शक्ति 75 ± 5 एमु/जी.

वायरल न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और सीरम/प्लाज्मा मुक्त डीएनए फ्रैगमेंट निष्कर्षण के लिए विशेष रूप से उपयुक्त.

न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण में उच्च शुद्धता और संवेदनशीलता.

परिपक्व उत्पादन प्रक्रिया और उत्कृष्ट बैच-टू-बैच संगति.

सारांश, इसकी कार्यकुशलता के कारण, सुरक्षा, और स्वचालन, चुंबकीय मनका-आधारित विधि आरएसवी न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण के लिए मुख्यधारा का दृष्टिकोण बन गई है और भविष्य में रोगज़नक़ निदान और अनुसंधान में तेजी से महत्वपूर्ण भूमिका निभाएगी।. सटीक और विश्वसनीय पहचान परिणाम सुनिश्चित करने के लिए उपयुक्त चुंबकीय मोतियों का चयन एक महत्वपूर्ण कदम है.

देने वाला

शंघाई लिंगजुन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी, लिमिटेडमें स्थापित किया गया था 2016 जो बायोमैग्नेटिक सामग्रियों और न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण अभिकर्मकों का एक पेशेवर निर्माता है.

हमारे पास न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण में समृद्ध अनुभव है, प्रोटीन शुद्धि, कोशिका पृथक्करण, chemiluminescence, और अन्य तकनीकी क्षेत्र.

हमारे उत्पाद कई क्षेत्रों में व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं, जैसे चिकित्सा परीक्षण, आनुवंशिक परीक्षण, विश्वविद्यालय अनुसंधान, आनुवंशिक प्रजनन, और इसी तरह. हम न केवल उत्पाद उपलब्ध कराते हैं बल्कि ओईएम का कार्य भी कर सकते हैं, ओडीएम, और अन्य जरूरतें. यदि आपको इससे संबंधित कोई आवश्यकता है, हमसे संपर्क करने के लिए कृपया स्वतंत्र महसूस करें .