जटिल पशु ऊतकों से कुल आरएनए निष्कर्षण का तकनीकी अनुकूलन: चुंबकीय मनका विधि के आधार पर एक मिनी-एक्सट्रैक्शन प्रोटोकॉल का मूल्यांकन

1.अमूर्त

पशु आंत के ऊतक (जैसे कि लीवर, किडनी, दिल, और आंतों के ऊतक) अंतर्जात न्यूक्लिअस में समृद्ध हैं, पॉलिसैक्राइड, लिपिड, और संयोजी ऊतक घटक. नतीजतन, इन ऊतकों से कुल आरएनए के निष्कर्षण को लंबे समय तक गिरावट के उच्च जोखिम जैसी तकनीकी चुनौतियों का सामना करना पड़ा है, कम उत्पाद शुद्धता, और अस्थिर पैदावार. पारंपरिक फिनोल-क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण विधि न केवल बोझिल और समय लेने वाली है, बल्कि इसमें विषाक्त कार्बनिक अभिकर्मक भी शामिल हैं।, इससे उच्च-थ्रूपुट और स्वचालित प्रयोगों की मांगों को पूरा करना मुश्किल हो गया है.

शंघाई लिंगजुन बायोटेक के एप्लिकेशन डेटा के आधार पर यूनिवर्सल टोटल आरएनए एक्सट्रैक्शन किट (चुंबकीय मनका विधि) विभिन्न जानवरों के आंत के नमूनों में, यह पेपर छोटी मात्रा के निष्कर्षण में इसके प्रदर्शन का व्यवस्थित रूप से मूल्यांकन करता है. नतीजे बताते हैं कि किट प्रोटीन और पॉलीसेकेराइड संदूषण को प्रभावी ढंग से हटा देती है. निकाले गए आरएनए के ए260/ए280 और ए260/ए230 अनुपात दोनों डाउनस्ट्रीम आणविक जीवविज्ञान प्रयोगों के लिए गुणवत्ता आवश्यकताओं को पूरा करते हैं।, और उपज विभिन्न अनुप्रयोगों के लिए पर्याप्त है, जैसे कि आरटी-क्यूपीसीआर और ट्रांसक्रिप्टोमिक अनुक्रमण, जटिल ऊतक नमूनों से आरएनए निष्कर्षण के लिए एक सुरक्षित और कुशल समाधान प्रदान करना.

2.परिचय

राइबोन्यूक्लिक एसिड की अखंडता और शुद्धता (शाही सेना) जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण जैसे आणविक जीवविज्ञान प्रयोगों के लिए महत्वपूर्ण पूर्वापेक्षाएँ हैं, ट्रांस्क्रिप्टोमिक अनुक्रमण, और गैर-कोडिंग आरएनए अनुसंधान. जानवरों के आंत के ऊतक-विशेषकर यकृत, गुर्दे, दिल, और आंतों को आमतौर पर आरएनए निष्कर्षण के लिए "कठिन नमूने" माना जाता है. लीवर ग्लाइकोजन और अंतर्जात RNases से समृद्ध है; गुर्दे और आंतों के ऊतकों में बड़ी मात्रा में पॉलीसेकेराइड और प्रोटीयोलाइटिक एंजाइम होते हैं; और दिल, इसके मांसपेशीय तंतुओं की सघन संरचना के कारण, पर्याप्त रूप से लिसिस नहीं करता है. ये सभी कारक आरएनए क्षरण का कारण बन सकते हैं, कम प्राप्ति, या अशुद्धियों का सह-शुद्धिकरण, जो बदले में रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन दक्षता और परिमाणीकरण परिणामों की विश्वसनीयता को प्रभावित करते हैं.

हाल के वर्षों में, न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण के लिए चुंबकीय मनका विधि धीरे-धीरे पारंपरिक सेंट्रीफ्यूजेशन कॉलम और कार्बनिक विलायक विधियों के विकल्प के रूप में उभरी है, परिचालन सुरक्षा के इसके फायदों के लिए धन्यवाद, स्वचालन में आसानी, और लगातार उत्पाद की गुणवत्ता. इस अध्ययन ने चुंबकीय मनका विधि के आधार पर एक सार्वभौमिक कुल आरएनए निष्कर्षण किट के प्रदर्शन का मूल्यांकन किया, शंघाई लिंगजुन बायोटेक्नोलॉजी द्वारा विकसित, सूअरों और चूहों के आंत के नमूनों में, ऐसे नमूनों से आरएनए निष्कर्षण के लिए एक व्यवस्थित तकनीकी संदर्भ प्रदान करना.

3.उत्पाद तकनीकी सिद्धांत

यह किट सतह-संशोधित चुंबकीय मनका प्रौद्योगिकी पर आधारित है और आरएनए को शुद्ध करने के लिए एक विशिष्ट बफर सिस्टम में चुंबकीय मोतियों द्वारा न्यूक्लिक एसिड के चयनात्मक सोखने का उपयोग करता है।. निष्कर्षण प्रक्रिया शामिल है: एक लिसिस बफर का उपयोग करके नमूने से कुल आरएनए जारी करना; चुंबकीय मोतियों से न्यूक्लिक एसिड का विशिष्ट बंधन; वॉश बफ़र्स का उपयोग करके प्रोटीन और नमक आयन अशुद्धियों को हटाना; और उच्च शुद्धता आरएनए प्राप्त करने के लिए न्यूक्लीज-मुक्त धुलाई के साथ निक्षालन. इस प्रणाली में फिनोल और क्लोरोफॉर्म जैसे कार्बनिक विलायकों के उपयोग की आवश्यकता नहीं होती है, जिससे पारंपरिक तरीकों से जुड़े स्वास्थ्य जोखिमों और अपशिष्ट निपटान बोझ से बचा जा सके. इसके अतिरिक्त, चुंबकीय मनका विधि सेंट्रीफ्यूजेशन-आधारित निस्पंदन के दौरान नमूना कणों के कारण होने वाले स्तंभ अवरोध को रोकती है, और लचीला एल्युशन वॉल्यूम प्रदान करता है (30-100 μL), इसे कम सांद्रता वाले आरएनए नमूनों की एकाग्रता और पुनर्प्राप्ति के लिए उपयुक्त बनाता है.

4.प्रायोगिक डेटा और विश्लेषण

प्रत्येक मछली का जिगर लगभग 5-10 मिलीग्राम, आंत्र ऊतक, गलफड़ा, और हृदय को लिंगजुन बायोटेक यूनिवर्सल टोटल आरएनए स्मॉल-वॉल्यूम एक्सट्रैक्शन किट का उपयोग करके एकत्र और निकाला गया. परिणाम नीचे दी गई तालिका में दिखाए हैं.

नहीं.	नमूना	260/280	260/230	सान्द्र. (एनजी/μL)
1	5 एमजी मछली का जिगर	1.92	1.54	272.95
2	10एमजी मछली आंत	1.84	2.04	119.15
3	10एमजी फिश गिल	1.92	2.13	276.15
4	10एमजी मछली का दिल	1.89	1.89	113.70

वैद्युतकणसंचलन परिणाम：

जैसे भी दिखेगा, A260/280 अनुपात ऊपर हैं 1.9, सांद्रताएँ सभी से ऊपर हैं 100 एनजी/μL, और मुख्य बैंड स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहा है.

5.आवेदन हेतु चर्चा एवं सिफ़ारिशें

5.1 चुंबकीय मनका विधि के तकनीकी लाभ

पारंपरिक ट्राइज़ोल पद्धति की तुलना में, चुंबकीय मनका विधि प्रसंस्करण समय को काफी कम कर देती है (पूरी प्रक्रिया निम्नलिखित में पूरी की जा सकती है 40 मिनट) और प्रक्रिया के दौरान जोखिम के कारण आरएनए क्षरण के जोखिम को कम करता है. इसके अलावा, चुंबकीय मनका विधि स्वचालित न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण प्लेटफार्मों के साथ संगत है, इसे उच्च-थ्रूपुट नमूना प्रसंस्करण के लिए उपयुक्त बनाना.

5.2निष्कर्षण रणनीति

आरटी-क्यूपीसीआर जैसे नियमित विश्लेषण के लिए छोटी मात्रा का निष्कर्षण उपयुक्त है, सीडीएनए पुस्तकालय निर्माण, और उत्तरी धब्बा; इसके लिए केवल थोड़ी मात्रा में नमूने की आवश्यकता होती है और यह कीमती नमूनों की प्रारंभिक जांच के लिए आदर्श है. उच्च वसा सामग्री या उच्च RNase स्तर वाले ऊतकों के लिए (जैसे अग्न्याशय), लसीका बफर की मात्रा उचित रूप से बढ़ाई जा सकती है या निष्कर्षण दक्षता को अनुकूलित करने के लिए एक RNase अवरोधक को पहले से जोड़ा जा सकता है.

6.निष्कर्ष

शंघाई लिंगजुन बायोटेक यूनिवर्सल टोटल आरएनए एक्सट्रैक्शन किट (चुंबकीय मनका विधि) उत्कृष्ट शुद्धता प्रदर्शित करता है, उपज, और जानवरों के आंत के ऊतकों से आरएनए के निष्कर्षण में उपयोग में आसानी. यह प्रणाली एक तकनीकी समाधान प्रदान करती है जो जटिल जैविक नमूनों पर आरएनए अनुसंधान के लिए दक्षता और गुणवत्ता को जोड़ती है, और परिणामी आरएनए डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए उपयुक्त है, आरटी-क्यूपीसीआर से ट्रांसक्रिप्टोमिक अनुक्रमण तक.

देने वाला

शंघाई लिंगजुन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी, लिमिटेडमें स्थापित किया गया था 2016 जो बायोमैग्नेटिक सामग्रियों और न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण अभिकर्मकों का एक पेशेवर निर्माता है.

हमारे पास न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण में समृद्ध अनुभव है, प्रोटीन शुद्धि, कोशिका पृथक्करण, chemiluminescence, और अन्य तकनीकी क्षेत्र.

हमारे उत्पाद कई क्षेत्रों में व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं, जैसे चिकित्सा परीक्षण, आनुवंशिक परीक्षण, विश्वविद्यालय अनुसंधान, आनुवंशिक प्रजनन, और इसी तरह. हम न केवल उत्पाद उपलब्ध कराते हैं बल्कि ओईएम का कार्य भी कर सकते हैं, ओडीएम, और अन्य जरूरतें. यदि आपको इससे संबंधित कोई आवश्यकता है, हमसे संपर्क करने के लिए कृपया स्वतंत्र महसूस करें .