Pengoptimuman Teknikal Jumlah Pengekstrakan RNA daripada Tisu Haiwan Kompleks: Penilaian Protokol Pengekstrakan Mini Berdasarkan Kaedah Manik Magnet

1.Abstrak

Tisu viseral haiwan (seperti hati, buah pinggang, hati, dan tisu usus) kaya dengan nuklease endogen, polisakarida, lipid, dan komponen tisu penghubung. Akibatnya, pengekstrakan jumlah RNA daripada tisu ini telah lama menghadapi cabaran teknikal seperti risiko degradasi yang tinggi, ketulenan produk yang rendah, dan hasil yang tidak stabil. Kaedah pengekstrakan fenol-kloroform tradisional bukan sahaja menyusahkan dan memakan masa tetapi juga melibatkan reagen organik toksik, menyukarkan untuk memenuhi permintaan percubaan berdaya tinggi dan automatik.

Berdasarkan data aplikasi daripada Shanghai Lingjun Biotech Kit Pengekstrakan RNA Jumlah Sejagat (Kaedah Manik Magnet) dalam pelbagai sampel viseral haiwan, kertas ini secara sistematik menilai prestasinya dalam pengekstrakan volum kecil. Keputusan menunjukkan bahawa kit ini berkesan menghilangkan pencemaran protein dan polisakarida. Nisbah A260/A280 dan A260/A230 bagi RNA yang diekstrak kedua-duanya memenuhi keperluan kualiti untuk eksperimen biologi molekul hiliran, dan hasil adalah mencukupi untuk pelbagai aplikasi, seperti RT-qPCR dan penjujukan transkriptik, menyediakan penyelesaian yang selamat dan cekap untuk pengekstrakan RNA daripada sampel tisu kompleks.

2.pengenalan

Keutuhan dan ketulenan asid ribonukleik (RNA) adalah prasyarat kritikal untuk eksperimen biologi molekul seperti analisis ekspresi gen, penjujukan transkriptomi, dan penyelidikan RNA bukan pengekodan. Tisu viseral haiwan—terutamanya hati, buah pinggang, hati, dan usus—biasanya dianggap sebagai "sampel sukar" untuk pengekstrakan RNA. Hati kaya dengan glikogen dan RNases endogen; buah pinggang dan tisu usus mengandungi sejumlah besar polisakarida dan enzim proteolitik; dan hati, disebabkan oleh struktur padat gentian ototnya, tidak lisis secukupnya. Faktor-faktor ini semuanya boleh menyebabkan kemerosotan RNA, hasil rendah, atau penyucian bersama kekotoran, yang seterusnya menjejaskan kecekapan transkripsi terbalik dan kebolehpercayaan keputusan kuantifikasi.

Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, kaedah manik magnet untuk pengekstrakan asid nukleik telah secara beransur-ansur muncul sebagai alternatif kepada lajur sentrifugasi tradisional dan kaedah pelarut organik, berkat kelebihan keselamatan operasinya, kemudahan automasi, dan kualiti produk yang konsisten. Kajian ini menilai prestasi kit pengekstrakan total RNA sejagat berdasarkan kaedah manik magnetik, dibangunkan oleh Shanghai Lingjun Biotechnology, dalam sampel visceral daripada babi dan tikus, menyediakan rujukan teknikal yang sistematik untuk pengekstrakan RNA daripada sampel tersebut.

3.Prinsip Teknikal Produk

Kit ini berdasarkan teknologi manik magnet yang diubah suai permukaan dan menggunakan penjerapan terpilih asid nukleik oleh manik magnet dalam sistem penimbal khusus untuk membersihkan RNA. Proses pengekstrakan termasuk: melepaskan jumlah RNA daripada sampel menggunakan penimbal lisis; pengikatan spesifik asid nukleik pada manik magnet; penyingkiran kekotoran ion protein dan garam menggunakan penimbal pencuci; dan elusi dengan pencucian bebas nuklease untuk mendapatkan RNA ketulenan tinggi. Sistem ini tidak memerlukan penggunaan pelarut organik seperti fenol dan kloroform, dengan itu mengelakkan risiko kesihatan dan beban pelupusan sisa yang berkaitan dengan kaedah tradisional. Selain itu, kaedah manik magnet menghalang lajur tersumbat yang disebabkan oleh zarah sampel semasa penapisan berasaskan sentrifugasi, dan menawarkan volum elusi yang fleksibel (30–100 μL), menjadikannya sesuai untuk kepekatan dan pemulihan sampel RNA kepekatan rendah.

4.Data dan Analisis Eksperimen

Kira-kira 5–10 mg setiap hati ikan, tisu usus, insang, dan jantung dikumpul dan diekstrak menggunakan Kit Pengekstrakan Isipadu Kecil RNA Total RNA Lingjun Biotech. Keputusan ditunjukkan dalam jadual di bawah.

Tidak.	Sampel	260/280	260/230	Conc. (ng/μL)
1	5 mg Hati ikan	1.92	1.54	272.95
2	10mg Keberanian ikan	1.84	2.04	119.15
3	10mg insang ikan	1.92	2.13	276.15
4	10mg Jantung ikan	1.89	1.89	113.70

Keputusan Elektroforesis：

Seperti yang dapat dilihat, nisbah A260/280 adalah di atas 1.9, kepekatan semua di atas 100 ng/μL, dan jalur utama jelas kelihatan.

5.Perbincangan dan Syor untuk Permohonan

5.1 Kelebihan Teknikal Kaedah Manik Magnet

Berbanding dengan kaedah Trizol tradisional, kaedah manik magnet mengurangkan masa pemprosesan dengan ketara (the entire process can be completed in under 40 minit) and minimizes the risk of RNA degradation due to exposure during the procedure. Selain itu, the magnetic bead method is compatible with automated nucleic acid extraction platforms, menjadikannya sesuai untuk pemprosesan sampel berkemampuan tinggi.

5.2Extraction Strategy

Small-volume extraction is suitable for routine analyses such as RT-qPCR, cDNA library construction, and Northern blot; it requires only a small amount of sample and is ideal for the initial screening of precious samples. For tissues with high fat content or high RNase levels (such as the pancreas), the amount of lysis buffer can be appropriately increased or an RNase inhibitor can be added in advance to optimize extraction efficiency.

6.Kesimpulan

The Shanghai Lingjun Biotech Universal Total RNA Extraction Kit (Kaedah Manik Magnet) demonstrates excellent purity, hasil, and ease of use in the extraction of RNA from animal visceral tissues. This system provides a technical solution that combines efficiency and quality for RNA research on complex biological samples, and the resulting RNA is suitable for a wide range of downstream applications, from RT-qPCR to transcriptomic sequencing.

Pembekal

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ditubuhkan pada 2016 yang merupakan pengilang profesional bahan biomagnet dan reagen pengekstrakan asid nukleik.

Kami mempunyai pengalaman yang kaya dalam pengekstrakan dan penulenan asid nukleik, penulenan protein, pemisahan sel, chemiluminescence, dan bidang teknikal yang lain.

Produk kami digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang, seperti ujian perubatan, ujian genetik, penyelidikan universiti, pembiakan genetik, dan seterusnya. Kami bukan sahaja menyediakan produk tetapi juga boleh menjalankan OEM, ODM, dan keperluan lain. Jika anda mempunyai keperluan yang berkaitan, sila hubungi kami .