Technische Optimierung der Gesamt-RNA-Extraktion aus komplexen tierischen Geweben: Evaluierung eines Mini-Extraktionsprotokolls basierend auf der Magnetkügelchen-Methode

1.Abstrakt

Tierische viszerale Gewebe (wie Leber, Niere, Herz, und Darmgewebe) sind reich an endogenen Nukleasen, Polysaccharide, Lipide, und Bindegewebsbestandteile. Infolge, Die Extraktion der Gesamt-RNA aus diesen Geweben war lange Zeit mit technischen Herausforderungen verbunden, wie zum Beispiel einem hohen Risiko des Abbaus, geringe Produktreinheit, und instabile Erträge. Die herkömmliche Phenol-Chloroform-Extraktionsmethode ist nicht nur umständlich und zeitaufwändig, sondern beinhaltet auch giftige organische Reagenzien, Dies macht es schwierig, die Anforderungen von Hochdurchsatz- und automatisierten Experimenten zu erfüllen.

Basierend auf Anwendungsdaten von Shanghai Lingjun Biotech Universelles Gesamt-RNA-Extraktionskit (Magnetische Perlenmethode) in verschiedenen viszeralen Tierproben, In diesem Artikel wird die Leistung bei Extraktionen kleiner Volumina systematisch bewertet. Die Ergebnisse zeigen, dass das Kit Protein- und Polysaccharidverunreinigungen wirksam entfernt. Die A260/A280- und A260/A230-Verhältnisse der extrahierten RNA erfüllen beide die Qualitätsanforderungen für nachgelagerte molekularbiologische Experimente, und die Ausbeute ist für verschiedene Anwendungen ausreichend, wie RT-qPCR und transkriptomische Sequenzierung, Bereitstellung einer sicheren und effizienten Lösung für die RNA-Extraktion aus komplexen Gewebeproben.

2.Einführung

Die Integrität und Reinheit der Ribonukleinsäure (RNA) sind entscheidende Voraussetzungen für molekularbiologische Experimente wie die Genexpressionsanalyse, Transkriptomsequenzierung, und nicht-kodierende RNA-Forschung. Tierisches viszerales Gewebe – insbesondere die Leber, Nieren, Herz, und Darm – gelten typischerweise als „schwierige Proben“ für die RNA-Extraktion. Die Leber ist reich an Glykogen und endogenen RNasen; Nieren- und Darmgewebe enthalten große Mengen an Polysacchariden und proteolytischen Enzymen; und das Herz, aufgrund der dichten Struktur seiner Muskelfasern, lysiert nicht ausreichend. Diese Faktoren können alle zum RNA-Abbau führen, geringer Ertrag, oder die Mitreinigung von Verunreinigungen, was sich wiederum auf die Effizienz der reversen Transkription und die Zuverlässigkeit der Quantifizierungsergebnisse auswirkt.

In den letzten Jahren, Die Magnetkügelchen-Methode zur Nukleinsäureextraktion hat sich nach und nach als Alternative zu herkömmlichen Zentrifugationssäulen- und organischen Lösungsmittelmethoden herausgestellt, dank seiner Vorteile der Betriebssicherheit, einfache Automatisierung, und gleichbleibende Produktqualität. Diese Studie bewertete die Leistung eines universellen Gesamt-RNA-Extraktionskits basierend auf der Magnetkügelchen-Methode, entwickelt von Shanghai Lingjun Biotechnology, in viszeralen Proben von Schweinen und Mäusen, Bereitstellung einer systematischen technischen Referenz für die RNA-Extraktion aus solchen Proben.

3.Technische Produktprinzipien

Dieses Kit basiert auf der oberflächenmodifizierten Magnetkügelchen-Technologie und nutzt die selektive Adsorption von Nukleinsäuren durch Magnetkügelchen in einem spezifischen Puffersystem zur Reinigung von RNA. Der Extraktionsprozess umfasst: Freisetzung der gesamten RNA aus der Probe unter Verwendung eines Lysepuffers; spezifische Bindung von Nukleinsäuren an die Magnetkügelchen; Entfernung von Protein- und Salzionenverunreinigungen mithilfe von Waschpuffern; und Elution mit einer nukleasefreien Wäsche, um hochreine RNA zu erhalten. Dieses System erfordert keine Verwendung organischer Lösungsmittel wie Phenol und Chloroform, Dadurch werden die mit herkömmlichen Methoden verbundenen Gesundheitsrisiken und die Belastung durch die Abfallentsorgung vermieden. Zusätzlich, Die Magnetkügelchen-Methode verhindert ein Verstopfen der Säule durch Probenpartikel während der zentrifugationsbasierten Filtration, und bietet flexible Elutionsvolumina (30–100 μL), Dadurch eignet es sich für die Konzentration und Gewinnung von RNA-Proben mit niedriger Konzentration.

4.Experimentelle Daten und Analyse

Jeweils ca. 5–10 mg Fischleber, Darmgewebe, Kiemen, und Herz wurden mit dem Lingjun Biotech Universal Total RNA Small-Volume Extraction Kit gesammelt und extrahiert. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle aufgeführt.

NEIN.	Probe	260/280	260/230	Konz. (ng/μL)
1	5 mg Fischleber	1.92	1.54	272.95
2	10mg Fischdärme	1.84	2.04	119.15
3	10mg Fischkiemen	1.92	2.13	276.15
4	10mg Fischherz	1.89	1.89	113.70

Ergebnisse der Elektrophorese：

Wie man sehen kann, Die A260/280-Verhältnisse sind oben 1.9, Die Konzentrationen sind alle oben 100 ng/μL, und das Hauptband ist deutlich sichtbar.

5.Diskussion und Anwendungsempfehlungen

5.1 Technische Vorteile der Magnetperlenmethode

Im Vergleich zur traditionellen Trizol-Methode, Die Magnetperlenmethode verkürzt die Verarbeitungszeit erheblich (Der gesamte Vorgang kann im Folgenden abgeschlossen werden 40 Minuten) und minimiert das Risiko eines RNA-Abbaus aufgrund der Exposition während des Verfahrens. Zusätzlich, Die Magnetkügelchen-Methode ist mit automatisierten Nukleinsäure-Extraktionsplattformen kompatibel, Dadurch eignet es sich für die Probenverarbeitung mit hohem Durchsatz.

5.2Extraktionsstrategie

Die Extraktion kleiner Volumina eignet sich für Routineanalysen wie RT-qPCR, Aufbau einer cDNA-Bibliothek, und Northern-Blot; Es erfordert nur eine geringe Probenmenge und ist ideal für das erste Screening wertvoller Proben. Für Gewebe mit hohem Fettgehalt oder hohem RNase-Gehalt (wie zum Beispiel die Bauchspeicheldrüse), Zur Optimierung der Extraktionseffizienz kann die Menge des Lysepuffers entsprechend erhöht oder vorab ein RNase-Inhibitor hinzugefügt werden.

6.Abschluss

Das Shanghai Lingjun Biotech Universal Total RNA Extraction Kit (Magnetische Perlenmethode) weist eine hervorragende Reinheit auf, Ertrag, und Benutzerfreundlichkeit bei der Extraktion von RNA aus tierischem Viszeralgewebe. Dieses System bietet eine technische Lösung, die Effizienz und Qualität für die RNA-Forschung an komplexen biologischen Proben vereint, und die resultierende RNA eignet sich für eine Vielzahl nachgelagerter Anwendungen, von RT-qPCR bis zur transkriptomischen Sequenzierung.

Anbieter

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.wurde gegründet in 2016 Das ist ein professioneller Hersteller von biomagnetischen Materialien und Nukleinsäure-Extraktionsreagenzien.

Wir verfügen über umfangreiche Erfahrung in der Extraktion und Reinigung von Nukleinsäuren, Proteinreinigung, Zelltrennung, Chemilumineszenz, und anderen technischen Bereichen.

Unsere Produkte werden in vielen Bereichen weit verbreitet eingesetzt, wie zum Beispiel medizinische Tests, Gentests, universitäre Forschung, genetische Zucht, und so weiter. Wir liefern nicht nur Produkte, sondern können auch OEM übernehmen, ODM, und andere Bedürfnisse. Wenn Sie einen entsprechenden Bedarf haben, Nehmen Sie gerne Kontakt zu uns auf .