Otimização Técnica da Extração de RNA Total de Tecidos Animais Complexos: Avaliação de um protocolo de miniextração baseado no método de esfera magnética

1.Resumo

Tecidos viscerais de animais (como fígado, rim, coração, e tecidos intestinais) são ricos em nucleases endógenas, polissacarídeos, lipídios, e componentes do tecido conjuntivo. Como resultado, a extração de RNA total desses tecidos há muito enfrenta desafios técnicos, como um alto risco de degradação, baixa pureza do produto, e rendimentos instáveis. O método tradicional de extração com fenol-clorofórmio não é apenas complicado e demorado, mas também envolve reagentes orgânicos tóxicos, dificultando o atendimento às demandas de experimentos automatizados e de alto rendimento.

Com base em dados de aplicação da Shanghai Lingjun Biotech Kit universal de extração de RNA total (Método de Conta Magnética) em várias amostras viscerais de animais, este artigo avalia sistematicamente seu desempenho em extrações de pequenos volumes. Os resultados indicam que o kit remove eficazmente a contaminação por proteínas e polissacarídeos. As proporções A260/A280 e A260/A230 do RNA extraído atendem aos requisitos de qualidade para experimentos de biologia molecular a jusante, e o rendimento é suficiente para diversas aplicações, como RT-qPCR e sequenciamento transcriptômico, fornecendo uma solução segura e eficiente para extração de RNA de amostras de tecidos complexos.

2.Introdução

A integridade e pureza do ácido ribonucleico (ARN) são pré-requisitos críticos para experimentos de biologia molecular, como análise de expressão gênica, sequenciamento transcriptômico, e pesquisa de RNA não codificante. Tecidos viscerais de animais – particularmente o fígado, rins, coração, e intestinos – são normalmente considerados “amostras difíceis” para extração de RNA. O fígado é rico em glicogênio e RNases endógenas; os tecidos renais e intestinais contêm grandes quantidades de polissacarídeos e enzimas proteolíticas; e o coração, devido à estrutura densa de suas fibras musculares, não lise suficientemente. Todos esses fatores podem levar à degradação do RNA, baixo rendimento, ou a co-purificação de impurezas, que por sua vez afetam a eficiência da transcrição reversa e a confiabilidade dos resultados de quantificação.

Nos últimos anos, o método de esfera magnética para extração de ácido nucleico emergiu gradualmente como uma alternativa aos métodos tradicionais de coluna de centrifugação e solventes orgânicos, graças às suas vantagens de segurança operacional, facilidade de automação, e qualidade de produto consistente. Este estudo avaliou o desempenho de um kit universal de extração de RNA total baseado no método de esfera magnética, desenvolvido pela Shanghai Lingjun Biotechnology, em amostras viscerais de porcos e ratos, fornecendo uma referência técnica sistemática para extração de RNA de tais amostras.

3.Princípios Técnicos do Produto

Este kit é baseado na tecnologia de esferas magnéticas de superfície modificada e utiliza a adsorção seletiva de ácidos nucleicos por esferas magnéticas em um sistema tampão específico para purificar o RNA.. O processo de extração inclui: liberando RNA total da amostra usando um tampão de lise; ligação específica de ácidos nucleicos às esferas magnéticas; remoção de impurezas de proteínas e íons salinos usando tampões de lavagem; e eluição com uma lavagem sem nuclease para obter RNA de alta pureza. Este sistema não requer o uso de solventes orgânicos como fenol e clorofórmio, evitando assim os riscos para a saúde e os encargos de eliminação de resíduos associados aos métodos tradicionais. Adicionalmente, o método de esfera magnética evita o entupimento da coluna causado por partículas de amostra durante a filtração baseada em centrifugação, e oferece volumes de eluição flexíveis (30–100 μL), tornando-o adequado para a concentração e recuperação de amostras de RNA de baixa concentração.

4.Dados Experimentais e Análise

Aproximadamente 5–10 mg de fígado de peixe cada, tecido intestinal, guelras, e coração foram coletados e extraídos usando o Kit de Extração de Pequeno Volume Universal Total RNA da Lingjun Biotech. Os resultados são mostrados na tabela abaixo.

Não.	Amostra	260/280	260/230	Concentração. (ng/μL)
1	5 mg Fígado de peixe	1.92	1.54	272.95
2	10mg Tripas de peixe	1.84	2.04	119.15
3	10mg Gill de peixe	1.92	2.13	276.15
4	10mg Coração de peixe	1.89	1.89	113.70

Resultados da eletroforese：

Como pode ser visto, as proporções A260/280 estão acima 1.9, as concentrações estão todas acima 100 ng/μL, e a banda principal é claramente visível.

5.Discussão e recomendações para aplicação

5.1 Vantagens Técnicas do Método do Esfera Magnética

Comparado ao método Trizol tradicional, o método do cordão magnético reduz significativamente o tempo de processamento (todo o processo pode ser concluído em menos de 40 minutos) e minimiza o risco de degradação do RNA devido à exposição durante o procedimento. Além disso, o método do cordão magnético é compatível com plataformas automatizadas de extração de ácido nucleico, tornando-o adequado para processamento de amostras de alto rendimento.

5.2Estratégia de Extração

A extração de pequeno volume é adequada para análises de rotina, como RT-qPCR, construção de biblioteca de cDNA, e mancha do norte; requer apenas uma pequena quantidade de amostra e é ideal para a triagem inicial de amostras preciosas. Para tecidos com alto teor de gordura ou altos níveis de RNase (como o pâncreas), a quantidade de tampão de lise pode ser aumentada adequadamente ou um inibidor de RNase pode ser adicionado antecipadamente para otimizar a eficiência da extração.

6.Conclusão

Kit universal de extração de RNA total da Shanghai Lingjun Biotech (Método de Conta Magnética) demonstra excelente pureza, colheita, e facilidade de uso na extração de RNA de tecidos viscerais animais. Este sistema fornece uma solução técnica que combina eficiência e qualidade para pesquisas de RNA em amostras biológicas complexas, e o RNA resultante é adequado para uma ampla gama de aplicações downstream, de RT-qPCR ao sequenciamento transcriptômico.

Fornecedor

Xangai Lingjun Biotecnologia Co., Ltda.foi estabelecido em 2016 que é um fabricante profissional de materiais biomagnéticos e reagentes de extração de ácido nucleico.

Temos vasta experiência em extração e purificação de ácidos nucleicos, purificação de proteínas, separação celular, quimioluminescência, e outras áreas técnicas.

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