Extração manual de esferas magnéticas no inverno: Principais precauções para manuseio em baixa temperatura

Prefácio

Ao usar manualmente o cordão magnético – reagentes de extração de ácido nucleico baseados no inverno frio, atenção especial deve ser dada ao impacto da temperatura na atividade dos reagentes, eficiência de adsorção de grânulo magnético, e operações experimentais. As precauções específicas são as seguintes:

1. Reaquecimento antecipado de reagentes

Reagentes como suspensões de esferas magnéticas, tampões de lise, e tampões de lavagem são propensos à precipitação de componentes ou agregação de esferas magnéticas em baixas temperaturas. Tire-os da geladeira 15 – 30 minutos de antecedência, deixe-os reaquecer em temperatura ambiente, e inverta suavemente e misture-os. Evite agitação violenta para evitar que as esferas magnéticas quebrem.

2. Mantenha uma temperatura ambiente operacional estável

Tente operar em um laboratório com temperatura ambiente de 18 – 25℃. Evite áreas diretamente sopradas por ar frio, como o ar – tomadas de ar condicionado e portas e janelas. Se a temperatura ambiente estiver muito baixa, use uma constante – temperatura do banho de metal ou banho-maria para manter a temperatura das amostras e reagentes, evitando uma diminuição na eficiência do tampão de lise e ligação insuficiente entre o DNA e as esferas magnéticas.

3. Tempo de controle nas etapas de adsorção e separação de esferas magnéticas

Baixas temperaturas irão desacelerar a velocidade de ligação de esferas magnéticas e ácidos nucleicos. Prolongue adequadamente o tempo de incubação das esferas magnéticas (geralmente aumenta em 5 – 10 minutos). Ao mesmo tempo, ao separar esferas magnéticas no suporte magnético, a velocidade de sedimentação das esferas magnéticas diminui em baixas temperaturas. Prolongue o tempo de espera para garantir que as esferas magnéticas sejam completamente adsorvidas na parede do tubo antes de descartar o líquido residual para evitar a perda de esferas magnéticas.

4. Otimize a temperatura do eluente

A temperatura do eluente afeta diretamente a eficiência de eluição do ácido nucleico. No inverno, pré – aquecer o eluente até 50 – 65℃ antes de usar. Agitar brevemente e misturar durante a eluição e deixar repousar durante 2 – 3 minutos para melhorar a taxa de recuperação de ácido nucleico. A amostra de ácido nucleico eluída deve ser armazenada em temperatura baixa o mais rápido possível para evitar degradação.

5. Detalhes Operacionais e Preparação de Consumíveis

Pré – aqueça a pipeta com antecedência para evitar aspiração imprecisa do líquido pela pipeta em baixas temperaturas. Usar enzima – tubos de centrífuga livres e pontas de pipeta para evitar a perda de ácidos nucleicos adsorvidos na superfície dos consumíveis em um baixo – ambiente de temperatura. Opere com cuidado para reduzir a volatilização dos reagentes e a contaminação da amostra.

Fornecedor

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