المهنية في صناعة الخرز المغناطيسي الحيوي
كيفية تحسين نتائج 260/230 الحساب باستخدام طريقة الخرزة المغناطيسية لاستخلاص الكواشف？
عند استخلاص الأحماض النووية بطريقة الخرزة المغناطيسية, منخفض 260/230 نسبة (عادة < 1.8) يشير إلى وجود المركبات العضوية(مثل أملاح الجوانيدين, الفينول, الإيثانول, إدتا) أو الأملاح المتبقية في العينة, والتي يمكن أن تؤثر على تجارب المصب (مثل PCR, التسلسل).
هنا خطة التحسين المنهجي:
- تحسين خطوات الاستخراج
أ. تحلل العينة كاملة
مشكلة: يؤدي التحلل غير الكامل إلى إطلاق غير كامل للشوائب.
تحسين: زيادة وقت التحلل (على سبيل المثال, تمتد إلى 30 دقائق) أو درجة الحرارة (56درجه مئوية).
أضف خطوة طحن أو هضم بروتيناز K إضافي للعينات المعقدة (مثل النباتات, البراز).
ب. اغسل الخرز المغناطيسي جيدًا
الخطوة الرئيسية: الغسل غير المكتمل هو السبب الرئيسي 260/230 قليل.
تحسين: زيادة عدد الغسلات: 2 مرات → 3 مرات (خاصة بالنسبة للعينات ذات الشوائب العالية).
صيغة محلول الغسيل: تأكد من استخدام الطازجة 80% الإيثانول (تجنب المحتوى المائي الزائد أو التلوث).
عملية الغسيل: دوامة أو هز لخلط الخرز المغناطيسي في كل مرة, تجنب تشكيل كتل الخرز.
دقة نضح طاف (يمكن الطرد المركزي لفترة وجيزة لإزالة السائل المتبقي).
ج. التجفيف الكامل للخرز المغناطيسي
مشكلة: يمكن أن يقلل الإيثانول المتبقي بشكل كبير 260/230.
تحسين: افتح الغطاء واتركه حتى يجف 5-10 دقائق (في درجة حرارة الغرفة أو 37 درجة مئوية), حتى لا توجد رائحة الإيثانول. تجنب التجفيف المفرط (خلاف ذلك, فإنه سيتم تقليل كفاءة شطف الحمض النووي).
د. تحسين ظروف الشطف
استخدام العازلة شطف مسخن (مثل 65 درجة مئوية TE العازلة أو الماء المعقم), والسماح لها بالوقوف 5 دقائق قبل التجميع.
تجنب استخدام حجم شطف صغير جداً (يوصي ≥ 50 ميكرولتر لتقليل تركيز الملح).
Ⅱ.ضبط الجودة من الكواشف والمواد الاستهلاكية
أ. استبدل بالكواشف الطازجة:
تحقق مما إذا كان الإيثانول ومحلول الغسيل ملوثين (إذا تم تخزينها لفترة طويلة دون الختم).
تجنب استخدام الكواشف حبة مغناطيسية منتهية الصلاحية (قد يؤدي تدهور الخرزة المغناطيسية إلى امتصاص الشوائب).
ب. اختيار المواد الاستهلاكية:
استخدام أنابيب الطرد المركزي والماصات دون نوكلياز أو البيروجين (لتجنب التدخل من المضافات البلاستيكية).
Ⅲ.المعالجة المسبقة للعينة
- عينات معقدة (مثل التربة والنباتات):
زيادة المعالجة CTAB أو SDS لإزالة السكريات والبوليفينول.
- لعينات الدم:
قم أولاً بإزالة الهيموجلوبين باستخدام محلول تحلل كريات الدم الحمراء.
- عينات غنية بالمثبطات (مثل البراز وسوائل الجسم):
تمييع العينات أو استخدام مخازن تحلل مخصصة (مثل تلك التي تحتوي على الحمض النووي الريبي الناقل).
Ⅳ.التحقق والتدابير العلاجية
أ. الرحلان الكهربائي أو التحقق من الكيوبت:
تحقق من التدهور (ظاهرة المخلفات) باستخدام هلام الاغاروز الكهربائي.
قارن النتائج مع نتائج Nanodrop باستخدام مقياس التألق (كوبيت) للقضاء على التدخل من امتصاص الشوائب.
ب. علاج التنقية:
إذا كانت نسبة 260/230 يبقى منخفضا, تنقية الحمض النووي باستخدام عمود السيليكا أو عن طريق ترسيب الإيثانول مرة أخرى.
V. تجربة التحكم
لكل استخراج, عينة قياسية معروفة (مثل DNA أو الخلايا المزروعة) تم إعداده للتأكد من استقرار الكواشف.
إذا 260/230 نسبة العينة الضابطة طبيعية, قد تكمن المشكلة في العينة التي يتم اختبارها نفسها.
قائمة التحقق من استكشاف الأخطاء وإصلاحها للمشاكل الشائعة
| ظاهرة | السبب المحتمل | حل |
| 260/230 منخفضة ولكن 260/280 أمر طبيعي | تلوث البروتين أو الفينول | تعزيز خطوات الغسيل والتجفيف |
| كلاهما 260/230 و 260/280 منخفضة | تلوث البروتين أو الفينول | تحسين التحلل, استبدال الحل تحلل |
| فقط 230 الذروة عالية | التلوث بالمذيبات العضوية | التحقق من نقاء الإيثانول أو العازلة |
من خلال اتباع هذه الخطوات, نسبة 260/230 يمكن زيادتها بشكل ملحوظ (هدف > 1.8). إذا استمرت المشكلة, لا تتردد في الاتصال بشانغهاي Lingjun للتكنولوجيا الحيوية على 18103799069.
مزود
شركة شنغهاي لينغجون للتكنولوجيا الحيوية, المحدودة.تأسست في 2016 وهي شركة متخصصة في تصنيع المواد المغناطيسية الحيوية وكواشف استخلاص الحمض النووي.
لدينا خبرة غنية في استخراج وتنقية الحمض النووي, تنقية البروتين, فصل الخلايا, التألق الكيميائي, وغيرها من المجالات التقنية.
منتجاتنا تستخدم على نطاق واسع في العديد من المجالات, مثل الفحوصات الطبية, الاختبارات الجينية, البحوث الجامعية, التكاثر الوراثي, وهكذا. نحن لا نقدم المنتجات فحسب، بل يمكننا أيضًا إجراء تصنيع المعدات الأصلية, أوديإم, وغيرها من الاحتياجات. إذا كان لديك حاجة ذات صلة, لا تتردد في الاتصال بنا .
