Profesjonell produsent av biomagnetiske perler
Hvordan forbedre resultatene av 260/230 beregning ved hjelp av den magnetiske perlemetoden for å trekke ut reagenser?
Ved ekstrahering av nukleinsyrer ved hjelp av den magnetiske perlemetoden, en lav 260/230 forhold (vanligvis < 1.8) indikerer tilstedeværelsen av organiske forbindelser(slik som guanidinsalter, fenol, etanol, EDTA) eller restsalter i prøven, som kan påvirke nedstrøms eksperimenter (slik som PCR, sekvensering).
Her er en systematisk optimaliseringsplan:
- Optimalisering av utvinningstrinn
en. Fullstendig prøvelysering
Problem: Ufullstendig lysering fører til ufullstendig frigjøring av urenheter.
Forbedring: Øk lyseringstiden (f.eks., utvide til 30 minutter) eller temperatur (56℃).
Legg til et slipetrinn eller ytterligere proteinase K-fordøyelse for komplekse prøver (som planter, avføring).
b. Vask de magnetiske perlene grundig
Nøkkeltrinn: Ufullstendig vask er hovedårsaken til 260/230 lav.
Forbedring: Øk antall vask: 2 ganger → 3 ganger (spesielt for prøver med høye urenheter).
Formel for vaskeløsning: Sørg for å bruke nylaget 80% etanol (unngå for høyt vanninnhold eller forurensning).
Vaskeoperasjon: Vortex eller rist for å blande de magnetiske perlene hver gang, unngå dannelse av perleklumper.
Aspirer supernatanten grundig (kan sentrifugere kort for å fjerne væskerester).
c. Fullstendig tørking av magnetiske perler
Problem: Resterende etanol kan redusere betydelig 260/230.
Forbedring: Åpne lokket og la det tørke 5-10 minutter (ved romtemperatur eller 37°C), til det ikke lukter etanol. Unngå overdreven tørking (noe annet, det vil redusere effektiviteten av nukleinsyreeluering).
d. Optimaliser elueringsforholdene
Bruk forvarmet elueringsbuffer (slik som 65°C TE-buffer eller sterilt vann), og la det stå for 5 minutter før samling.
Unngå å bruke for lite elueringsvolum (anbefaler ≥ 50 μL for å redusere saltkonsentrasjonen).
Ⅱ.Kvalitetskontroll av reagenser og forbruksvarer
en. Bytt ut med ferske reagenser:
Sjekk om etanol og vaskeløsning er forurenset (hvis lagret over lengre tid uten forsegling).
Unngå å bruke utløpte magnetiske perlereagenser (magnetisk perlenedbrytning kan adsorbere urenheter).
b. Valg av forbruksvarer:
Bruk sentrifugerør og pipetter uten nuklease eller pyrogen (for å unngå forstyrrelser fra plasttilsetningsstoffer).
Ⅲ.Prøveforbehandling
- Komplekse prøver (som jord og planter):
Øk CTAB- eller SDS-forbehandlingen for å fjerne polysakkarider og polyfenoler.
- For blodprøver:
Fjern først hemoglobin ved å bruke erytrocyttlyseløsning.
- Inhibitor-anrikede prøver (som avføring og kroppsvæsker):
Fortynn prøvene eller bruk dedikerte lyseringsbuffere (slik som de som inneholder bærer-RNA).
Ⅳ.Verifikasjon og utbedringstiltak
en. Elektroforese eller Qubit-verifisering:
Se etter degradering (tailing-fenomen) ved bruk av agarosegelelektroforese.
Sammenlign resultatene med resultatene fra Nanodrop ved hjelp av en fluorescensmåler (Qubit) for å eliminere interferens fra urenhetsabsorbans.
b. Rensingssanering:
Hvis forholdet mellom 260/230 forblir lav, rens nukleinsyren ved å bruke en silikakolonne eller med etanolutfelling igjen.
V. Kontrolleksperiment
For hver ekstraksjon, en kjent standardprøve (slik som λDNA eller dyrkede celler) er satt opp for å bekrefte stabiliteten til reagensene.
Hvis 260/230 forholdet mellom kontrollprøven er normalt, problemet kan ligge i prøven som testes selv.
Sjekkliste for vanlig problem feilsøking
| Fenomen | Mulig årsak | Løsning |
| 260/230 er lav men 260/280 er normalt | Protein- eller fenolforurensning | Styrk vaske- og tørketrinnene |
| Både 260/230 og 260/280 er lave | Protein- eller fenolforurensning | Optimaliser lyseringen, erstatte lysisløsningen |
| Bare den 230 toppen er høy | Organisk løsemiddelforurensning | Sjekk renheten til etanol eller buffer |
Ved å følge disse trinnene, forholdet mellom 260/230 kan økes betydelig (mål > 1.8). Hvis problemet vedvarer, Ta gjerne kontakt med Shanghai Lingjun Biotechnology på 18103799069.
Leverandør
Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ble etablert i 2016 som er en profesjonell produsent av biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraksjonsreagenser.
Vi har rik erfaring innen utvinning og rensing av nukleinsyre, proteinrensing, celleseparasjon, kjemiluminescens, og andre tekniske felt.
Våre produkter er mye brukt på mange felt, som medisinsk testing, genetisk testing, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke bare produkter, men kan også påta oss OEM, ODM, og andre behov. Hvis du har et relatert behov, ta gjerne kontakt med oss .
