Hvordan man kan forbedre resultaterne af 260/230 beregning ved hjælp af den magnetiske perlemetode til ekstraktion af reagenser?

Ved ekstraktion af nukleinsyrer ved hjælp af den magnetiske perlemetode, en lav 260/230 forhold (som regel < 1.8) indikerer tilstedeværelsen af ​​organiske forbindelser(såsom guanidinsalte, phenol, ethanol, EDTA) eller restsalte i prøven, som kan påvirke downstream-eksperimenter (såsom PCR, sekventering).

 Her er en systematisk optimeringsplan:

1. Optimering af ekstraktionstrin

-en. Fuldstændig prøvelysering

Problem: Ufuldstændig lysis fører til ufuldstændig frigivelse af urenheder.

Forbedring: Øg lyseringstiden (f.eks., strække sig til 30 minutter) eller temperatur (56℃).

Tilføj et formalingstrin eller yderligere proteinase K-fordøjelse til komplekse prøver (såsom planter, afføring).

b. Vask de magnetiske perler grundigt

Nøgletrin: Ufuldstændig vask er hovedårsagen til 260/230 lav.

Forbedring: Øg antallet af vaske: 2 gange → 3 gange (især til prøver med høje urenheder).

Formel for vaskeopløsning: Sørg for at bruge frisklavet 80% ethanol (undgå for højt vandindhold eller forurening).

Vaskeoperation: Vortex eller ryst for at blande de magnetiske perler hver gang, undgå dannelsen af ​​perler klumper.

Aspirer supernatanten grundigt (kan kortvarigt centrifugere for at fjerne resterende væske).

c. Fuldstændig tørring af magnetiske perler

Problem: Resterende ethanol kan reducere betydeligt 260/230.

Forbedring: Åbn låget og lad det tørre til 5-10 minutter (ved stuetemperatur eller 37°C), indtil der ikke lugter ethanol. Undgå overdreven tørring (ellers, det vil reducere effektiviteten af ​​nukleinsyreeluering).

 d. Optimer elueringsbetingelserne

Brug forvarmet elueringsbuffer (såsom 65°C TE-buffer eller sterilt vand), og lad det stå til 5 minutter før afhentning.

Undgå at bruge for lille elueringsvolumen (anbefale ≥ 50 μL for at reducere saltkoncentrationen).

Ⅱ.Kvalitetskontrol af reagenser og forbrugsstoffer

-en. Udskift med friske reagenser:

Tjek om ethanol og vaskeopløsning er blevet forurenet (hvis den opbevares i længere tid uden forsegling).

Undgå at bruge udløbne magnetiske perlereagenser (magnetisk perlenedbrydning kan adsorbere urenheder).

b. Valg af forbrugsstoffer:

Brug centrifugerør og pipetter uden nuklease eller pyrogen (for at undgå interferens fra plasttilsætningsstoffer).

Ⅲ.Prøveforbehandling

1. Komplekse prøver (såsom jord og planter):

Øg CTAB- eller SDS-forbehandlingen for at fjerne polysaccharider og polyphenoler.

• Til blodprøver:

 Fjern først hæmoglobin ved hjælp af erytrocytlyseopløsning.

• Inhibitorberigede prøver (såsom afføring og kropsvæsker):

Fortynd prøverne eller brug dedikerede lyseringsbuffere (såsom dem, der indeholder bærer-RNA).

Ⅳ.Verifikation og afhjælpende foranstaltninger

-en. Elektroforese eller Qubit-verifikation:

Tjek for nedbrydning (halefænomen) ved anvendelse af agarosegelelektroforese.

Sammenlign resultaterne med dem fra Nanodrop ved hjælp af en fluorescensmåler (Qubit) for at eliminere interferens fra urenhedsabsorbans.

b. Rensningssanering:

Hvis forholdet mellem 260/230 forbliver lav, oprens nukleinsyren ved hjælp af en silicasøjle eller ved ethanolfældning igen.

V. Kontroleksperiment

For hver ekstraktion, en kendt standardprøve (såsom λDNA eller dyrkede celler) er sat op til at bekræfte stabiliteten af ​​reagenserne.

Hvis 260/230 forholdet mellem kontrolprøven er normalt, problemet kan ligge i selve prøven, der testes.

Tjekliste til almindeligt problem Fejlfinding

Fænomen	Mulig årsag	Løsning
260/230 er lav men 260/280 er normalt	Protein- eller phenolforurening	Styrk vaske- og tørretrinene
Begge 260/230 og 260/280 er lave	Protein- eller phenolforurening	Optimer lyseringen, udskift lysisopløsningen
Kun den 230 toppen er høj	Forurening med organisk opløsningsmiddel	Kontroller renheden af ​​ethanol eller buffer

Ved at følge disse trin, forholdet mellem 260/230 kan øges betydeligt (mål > 1.8). Hvis problemet fortsætter, Du er velkommen til at kontakte Shanghai Lingjun Biotechnology på 18103799069.

Leverandør

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.blev etableret i 2016 som er en professionel producent af biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraktionsreagenser.

Vi har stor erfaring med udvinding og oprensning af nukleinsyre, proteinoprensning, celleadskillelse, kemiluminescens, og andre tekniske områder.

Vores produkter er meget udbredt inden for mange områder, såsom medicinsk test, genetisk testning, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke kun produkter, men kan også påtage os OEM, ODM, og andre behov. Hvis du har et relateret behov, er du velkommen til at kontakte os .