Professionel producent af biomagnetiske perler
Hvordan kan den hæmmende effekt af magnetiske perler på PCR afbødes?
Med fremrykningen af
præcisionsmedicin og reduktionen i NGS-sekventeringsomkostninger,magnetisk perle-baseret nukleinsyreekstraktion er blevet standardpraksis i molekylære diagnostiske laboratorier. For at opnå højere genvindingsrater og undgå fejl forårsaget af ufuldstændig eluering, et stigende antal forskere vælger at tilføje magnetiske perler, der fanger nukleinsyrer direkte ind i PCR-systemet til amplifikation.
Imidlertid
Mens dette “PCR med magnetiske perler” tilgang strømliner arbejdsgange, det har introduceret lumske frustrationer for mange udøvere: PCR amplifikationsfejl, forhøjede Ct-værdier, eller endda fraværende amplifikationskurver. Synderen bag disse problemer er ofte selve de magnetiske perler, som hæmmer PCR-systemet.
Mange antager intuitivt, at magnetiske perler blot er inerte faste bærere, der ikke bør forstyrre forstærkningen. Alligevel demonstrerer eksperimentelle data konsekvent udbredt perle-induceret PCR-hæmning.
Foreløbige eksperimenter med vores magnetiske perleprodukter 160011, 160013, og 220015 for bead-in-PCR afsløret:
| Ingen. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| MB | 160011（50mg/ml） | 160013（50mg/ml） | 220015（50mg/ml） | ||||||
| Tilfreds | 0.5mg | 0.75mg | 1mg | 0.5mg | 0.75mg | 1mg | 0.5mg | 0.75mg | 1mg |
Resultat som følger：
Baseret på elektroforeseresultater, amplifikationseffektivitet ved en magnetisk perlekoncentration på 0.5 mg: 220015 < 160013 < 160011; I betragtning af de kendte magnetiske perlepartikelstørrelser: 220015 < 160013 < 160011, og i betragtning af deres specifikke overfladearealer: 160011 < 160013 < 220015, bindingsstederne pr. perle under identiske betingelser er således: 160011＜160013＜220015; Dette kan forklare, hvorfor PCR-hæmning bliver mere udtalt, når koncentrationen af magnetiske perler stiger.
Følgelig
En speciel komponent - en forstærker - er påkrævet i dette PCR-system. Almindelige forstærkere inkluderer betain, trehalose, DMSO (dimethylsulfoxid), glycerol, og BSA (bovint serumalbumin). Blandt disse, BSA fungerer som et offersubstrat, fortrinsvis binding til magnetiske perler for at beskytte polymerasen mod inhibitorinterferens.
Så vi søgte at bestemme, om koncentrationen af magnetiske perler blev reduceret (0.025 mg-0,075 mg) suppleret med 100 μg/ml BSA som PCR-forstærker ville give mere gunstige resultater.
| Ingen. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| MB | 160011（50mg/ml） | 160013（50mg/ml） | 220015（10mg/ml） | ||||||
| Tilfreds | 0.025mg | 0.05mg | 0.075mg | 0.025mg | 0.05mg | 0.075mg | 0.005mg | 0.01mg | 0.015mg |
Resultat som følger：
Det kan konstateres, at kl 0.025 mg, 160011 og 160013 udviser ingen forskel fra kontrollen, hvorimod kl 0.05 mg og 0.075 af, deres effektivitet aftager gradvist. 220015, i overensstemmelse med tidligere analyser, udviser ikke kun fremragende suspensionsegenskaber, men har også et stort specifikt overfladeareal med talrige bindingssteder. Dette muliggør effektiv adsorption af Taq-polymerase, derved hæmmer amplifikation. Når den magnetiske perlekoncentration blev reduceret til 0.005 mg, båndintensiteten nåede kun halvdelen af kontrollen.
Efter den grundlæggende optimering under disse forhold, vores 220013 produktet skal udvælges til effektvalidering.：
| Ingen. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| MB | 220013（10mg/ml） | 220015（10mg/ml） | ||||||
| Tilfreds | 0.003mg | 0.005mg | 0.007mg | 0.01mg | 0.003mg | 0.005mg | 0.007mg | 0.01mg |
Resultat som følger：
Det kan konstateres, at præstationsresultaterne af 220013 og 22015 er ikke til at skelne.
De førnævnte magnetiske perler 160011, 160013, 220013, og 220015 kan alle opnå optimale resultater i PCR gennem systemoptimering. De er velegnede til anvendelse i POCT-hurtigtest, påvisning af patogene mikroorganismer, automatiseret udvinding, og lignende scenarier.
Leverandør
Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.blev etableret i 2016 som er en professionel producent af biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraktionsreagenser.
Vi har stor erfaring med udvinding og oprensning af nukleinsyre, proteinoprensning, celleadskillelse, kemiluminescens, og andre tekniske områder.
Vores produkter er meget udbredt inden for mange områder, såsom medicinsk test, genetisk testning, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke kun produkter, men kan også påtage os OEM, ODM, og andre behov. Hvis du har et relateret behov, er du velkommen til at kontakte os .
