Comment atténuer l’effet inhibiteur des billes magnétiques sur la PCR?

Avec l'avancement de

médecine de précision et réduction des coûts de séquençage NGS,L'extraction d'acide nucléique à base de billes magnétiques est devenue une pratique courante dans les laboratoires de diagnostic moléculaire. Pour obtenir des taux de récupération plus élevés et éviter les erreurs causées par une élution incomplète, un nombre croissant de chercheurs choisissent d'ajouter des billes magnétiques capturant les acides nucléiques directement dans le système PCR pour amplification.

Cependant

Pendant que cela “PCR avec billes magnétiques” cette approche rationalise les flux de travail, cela a introduit des frustrations insidieuses pour de nombreux praticiens: Échecs de l’amplification PCR, valeurs Ct élevées, voire des courbes d'amplification absentes. La cause de ces problèmes est souvent les billes magnétiques elles-mêmes., qui inhibent le système PCR.

Beaucoup supposent intuitivement que les billes magnétiques sont simplement des supports solides inertes qui ne devraient pas interférer avec l'amplification.. Pourtant, les données expérimentales démontrent systématiquement une inhibition généralisée de la PCR induite par les billes..

Expériences préliminaires utilisant nos produits à billes magnétiques 160011, 160013, et 220015 pour la PCR en billes révélée:

Non.	1	2	3	4	5	6	7	8	9
Mo	160011（50 mg/ml）			160013（50 mg/ml）			220015（50 mg/ml）
Contenu	0.5mg	0.75mg	1mg	0.5mg	0.75mg	1mg	0.5mg	0.75mg	1mg

Résultat comme suit：

Basé sur les résultats de l'électrophorèse, efficacité d'amplification à une concentration de billes magnétiques de 0.5 mg: 220015 < 160013 < 160011; Compte tenu des tailles connues des particules de billes magnétiques: 220015 < 160013 < 160011, et compte tenu de leurs surfaces spécifiques: 160011 < 160013 < 220015, les sites de liaison par bille dans des conditions identiques sont ainsi: 160011＜160013＜220015; Cela peut expliquer pourquoi l'inhibition de la PCR devient plus prononcée à mesure que la concentration de billes magnétiques augmente..

Par conséquent

Un composant spécial, un activateur, est requis dans ce système PCR. Les exhausteurs courants incluent la bétaïne, tréhalose, DMSO (diméthylsulfoxyde), glycérol, et BSA (albumine sérique bovine). Parmi ceux-ci, BSA agit comme un substrat sacrificiel, se liant préférentiellement aux billes magnétiques pour protéger la polymérase des interférences des inhibiteurs.

Nous avons donc cherché à déterminer si la réduction de la concentration des billes magnétiques (0.025 mg–0,075 mg) complété par 100 μg/ml de BSA en tant qu’amplificateur de PCR donnerait des résultats plus favorables.

Non.	1	2	3	4	5	6	7	8	9
Mo	160011（50 mg/ml）			160013（50 mg/ml）			220015（10 mg/ml）
Contenu	0.025mg	0.05mg	0.075mg	0.025mg	0.05mg	0.075mg	0.005mg	0.01mg	0.015mg

Résultat comme suit：

On peut observer qu'à 0.025 mg, 160011 et 160013 ne présente aucune différence par rapport au contrôle, alors qu'à 0.05 mg et 0.075 de, leur efficacité diminue progressivement. 220015, cohérent avec les analyses précédentes, présente non seulement d'excellentes propriétés de suspension, mais possède également une grande surface spécifique avec de nombreux sites de liaison. Cela permet une adsorption efficace de la Taq polymérase, inhibant ainsi l'amplification. Lorsque la concentration des billes magnétiques a été réduite à 0.005 mg, l'intensité de la bande n'a atteint que la moitié de celle du contrôle.

Suite à l'optimisation fondamentale dans ces conditions, notre 220013 le produit doit être sélectionné pour la validation de son efficacité.：

Non.	1	2	3	4	5	6	7	8
Mo	220013（10 mg/ml）				220015（10 mg/ml）
Contenu	0.003mg	0.005mg	0.007mg	0.01mg	0.003mg	0.005mg	0.007mg	0.01mg

Résultat comme suit：

On peut observer que les résultats de performance de 220013 et 22015 sont indiscernables.

Les billes magnétiques susmentionnées 160011, 160013, 220013, et 220015 peuvent tous obtenir des résultats optimaux en PCR grâce à l’optimisation du système. Ils conviennent pour une application dans les tests rapides POCT, détection de micro-organismes pathogènes, extraction automatisée, et scénarios similaires.

Fournisseur

Société de biotechnologie Shanghai Lingjun., Ltd.a été établi en 2016 qui est un fabricant professionnel de matériaux biomagnétiques et de réactifs d'extraction d'acide nucléique.

Nous avons une riche expérience dans l'extraction et la purification des acides nucléiques, purification des protéines, séparation cellulaire, chimiluminescence, et autres domaines techniques.

Nos produits sont largement utilisés dans de nombreux domaines, comme les tests médicaux, tests génétiques, recherche universitaire, sélection génétique, et ainsi de suite. Nous fournissons non seulement des produits, mais pouvons également entreprendre des OEM, ODM, et autres besoins. Si vous avez un besoin connexe, n'hésitez pas à nous contacter .