Bagaimanakah kesan perencatan manik magnetik pada PCR dapat dikurangkan?

Dengan kemajuan

perubatan ketepatan dan pengurangan kos penjujukan NGS,pengekstrakan asid nukleik berasaskan manik magnet telah menjadi amalan standard dalam makmal diagnostik molekul. Untuk mencapai kadar pemulihan yang lebih tinggi dan mengelakkan ralat yang disebabkan oleh elusi yang tidak lengkap, semakin ramai penyelidik memilih untuk menambah manik magnet yang menangkap asid nukleik terus ke dalam sistem PCR untuk penguatan.

Namun begitu

Sedangkan ini “PCR dengan manik magnetik” pendekatan memperkemas aliran kerja, ia telah memperkenalkan kekecewaan yang berbahaya bagi ramai pengamal: Kegagalan penguatan PCR, nilai Ct yang dinaikkan, atau keluk penguatan yang tiada. Penyebab di sebalik isu ini selalunya adalah manik magnet itu sendiri, yang menghalang sistem PCR.

Ramai secara intuitif menganggap manik magnet hanyalah pembawa pepejal lengai yang tidak boleh mengganggu amplifikasi. Namun data eksperimen secara konsisten menunjukkan perencatan PCR yang disebabkan oleh manik yang meluas.

Percubaan awal menggunakan produk manik magnet kami 160011, 160013, dan 220015 untuk manik-dalam-PCR didedahkan:

Tidak.	1	2	3	4	5	6	7	8	9
MB	160011（50mg/ml）			160013（50mg/ml）			220015（50mg/ml）
kandungan	0.5mg	0.75mg	1mg	0.5mg	0.75mg	1mg	0.5mg	0.75mg	1mg

Keputusan seperti berikut：

Berdasarkan keputusan elektroforesis, kecekapan amplifikasi pada kepekatan manik magnet sebanyak 0.5 mg: 220015 < 160013 < 160011; Memandangkan saiz zarah manik magnet yang diketahui: 220015 < 160013 < 160011, dan mempertimbangkan kawasan permukaan khusus mereka: 160011 < 160013 < 220015, tapak mengikat setiap manik di bawah keadaan yang sama adalah demikian: 160011＜160013＜220015; Ini mungkin menjelaskan mengapa perencatan PCR menjadi lebih ketara apabila kepekatan manik magnet meningkat.

Akibatnya

Komponen khas—penambah—diperlukan dalam sistem PCR ini. Penambah biasa termasuk betaine, trehalose, DMSO (dimetil sulfoksida), gliserol, dan BSA (albumin serum lembu). Antaranya, BSA bertindak sebagai substrat pengorbanan, lebih disukai mengikat manik magnet untuk melindungi polimerase daripada gangguan perencat.

Oleh itu, kami berusaha untuk menentukan sama ada mengurangkan kepekatan manik magnetik (0.025 mg–0.075 mg) ditambah dengan 100 μg/ml BSA sebagai penambah PCR akan menghasilkan hasil yang lebih baik.

Tidak.	1	2	3	4	5	6	7	8	9
MB	160011（50mg/ml）			160013（50mg/ml）			220015（10mg/ml）
kandungan	0.025mg	0.05mg	0.075mg	0.025mg	0.05mg	0.075mg	0.005mg	0.01mg	0.015mg

Keputusan seperti berikut：

Ia boleh diperhatikan bahawa pada 0.025 mg, 160011 dan 160013 tidak menunjukkan perbezaan daripada kawalan, sedangkan pada 0.05 mg dan 0.075 daripada, keberkesanannya semakin berkurangan. 220015, konsisten dengan analisis sebelumnya, bukan sahaja mempamerkan sifat penggantungan yang sangat baik tetapi juga mempunyai luas permukaan khusus yang besar dengan banyak tapak pengikat. Ini membolehkan penjerapan berkesan polimerase Taq, dengan itu menghalang amplifikasi. Apabila kepekatan manik magnet dikurangkan kepada 0.005 mg, keamatan jalur hanya mencapai separuh daripada kawalan.

Mengikuti pengoptimuman asas di bawah syarat ini, kami 220013 produk hendaklah dipilih untuk pengesahan keberkesanan.：

Tidak.	1	2	3	4	5	6	7	8
MB	220013（10mg/ml）				220015（10mg/ml）
kandungan	0.003mg	0.005mg	0.007mg	0.01mg	0.003mg	0.005mg	0.007mg	0.01mg

Keputusan seperti berikut：

Dapat diperhatikan bahawa hasil prestasi daripada 220013 dan 22015 tidak dapat dibezakan.

Manik magnet yang disebutkan di atas 160011, 160013, 220013, dan 220015 semua boleh mencapai hasil yang optimum dalam PCR melalui pengoptimuman sistem. Mereka sesuai untuk aplikasi dalam ujian pantas POCT, pengesanan mikroorganisma patogen, pengekstrakan automatik, dan senario yang serupa.

Pembekal

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ditubuhkan pada 2016 yang merupakan pengilang profesional bahan biomagnet dan reagen pengekstrakan asid nukleik.

Kami mempunyai pengalaman yang kaya dalam pengekstrakan dan penulenan asid nukleik, penulenan protein, pemisahan sel, chemiluminescence, dan bidang teknikal yang lain.

Produk kami digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang, seperti ujian perubatan, ujian genetik, penyelidikan universiti, pembiakan genetik, dan seterusnya. Kami bukan sahaja menyediakan produk tetapi juga boleh menjalankan OEM, ODM, dan keperluan lain. Jika anda mempunyai keperluan yang berkaitan, sila hubungi kami .