Как можно смягчить ингибирующее влияние магнитных шариков на ПЦР??

С продвижением

прецизионная медицина и снижение затрат на секвенирование NGS,экстракция нуклеиновых кислот с помощью магнитных шариков стала стандартной практикой в ​​лабораториях молекулярной диагностики.. Для достижения более высоких скоростей восстановления и предотвращения ошибок, вызванных неполным элюированием., все большее число исследователей предпочитают добавлять магнитные шарики, захватывающие нуклеиновые кислоты, непосредственно в систему ПЦР для амплификации..

Однако

Хотя это “ПЦР с магнитными шариками” подход оптимизирует рабочие процессы, это вызвало коварное разочарование у многих практикующих: Сбои ПЦР-амплификации, повышенные значения Ct, или даже отсутствуют кривые усиления. Причиной этих проблем часто являются сами магнитные шарики., которые ингибируют систему ПЦР.

Многие интуитивно полагают, что магнитные шарики — это просто инертные твердые носители, которые не должны мешать усилению.. Тем не менее, экспериментальные данные последовательно демонстрируют широко распространенное ингибирование ПЦР, индуцированное шариками..

Предварительные эксперименты с использованием наших магнитных шариков. 160011, 160013, и 220015 для ПЦР с шариками выявлено:

Нет.	1	2	3	4	5	6	7	8	9
МБ	160011(50 мг/мл)			160013(50 мг/мл)			220015(50 мг/мл)
Содержание	0.5мг	0.75мг	1мг	0.5мг	0.75мг	1мг	0.5мг	0.75мг	1мг

Результат следующий：

По результатам электрофореза, эффективность усиления при концентрации магнитных шариков 0.5 мг: 220015 < 160013 < 160011; Учитывая известные размеры частиц магнитных шариков: 220015 < 160013 < 160011, и учитывая их удельную площадь поверхности: 160011 < 160013 < 220015, таким образом, сайты связывания на шарик в идентичных условиях: 160011&lt;160013&lt;220015; Это может объяснить, почему ингибирование ПЦР становится более выраженным по мере увеличения концентрации магнитных частиц..

Следовательно

В этой системе ПЦР требуется специальный компонент — энхансер.. Общие усилители включают бетаин., трегалоза, ДМСО (диметилсульфоксид), глицерин, и БСА (бычий сывороточный альбумин). Среди них, БСА действует как жертвенный субстрат., преимущественно связывается с магнитными шариками, чтобы защитить полимеразу от вмешательства ингибитора.

Поэтому мы попытались определить, можно ли уменьшить концентрацию магнитных шариков. (0.025 мг–0,075 мг) дополнено 100 мкг/мл БСА в качестве усилителя ПЦР даст более благоприятные результаты..

Нет.	1	2	3	4	5	6	7	8	9
МБ	160011(50 мг/мл)			160013(50 мг/мл)			220015(10 мг/мл)
Содержание	0.025мг	0.05мг	0.075мг	0.025мг	0.05мг	0.075мг	0.005мг	0.01мг	0.015мг

Результат следующий：

Можно заметить, что при 0.025 мг, 160011 и 160013 не имеют отличий от контроля, тогда как в 0.05 мг и 0.075 из, их эффективность постепенно снижается. 220015, соответствует предыдущим анализам, не только демонстрирует превосходные свойства суспензии, но также обладает большой удельной поверхностью с многочисленными местами связывания.. Это обеспечивает эффективную адсорбцию Taq-полимеразы., тем самым подавляя амплификацию. Когда концентрация магнитных шариков была уменьшена до 0.005 мг, интенсивность полос достигала лишь половины от контроля.

После фундаментальной оптимизации в этих условиях, наш 220013 Продукт должен быть выбран для проверки эффективности.：

Нет.	1	2	3	4	5	6	7	8
МБ	220013(10 мг/мл)				220015(10 мг/мл)
Содержание	0.003мг	0.005мг	0.007мг	0.01мг	0.003мг	0.005мг	0.007мг	0.01мг

Результат следующий：

Можно заметить, что результаты деятельности 220013 и 22015 неотличимы.

Вышеупомянутые магнитные бусины 160011, 160013, 220013, и 220015 все могут достичь оптимальных результатов в ПЦР за счет оптимизации системы. Они подходят для применения в экспресс-тестировании POCT., обнаружение патогенных микроорганизмов, автоматическое извлечение, и подобные сценарии.

Поставщик

Шанхайская биотехнологическая компания Линцзюнь., ОООбыл создан в 2016 который является профессиональным производителем биомагнитных материалов и реагентов для экстракции нуклеиновых кислот..

Мы имеем богатый опыт в экстракции и очистке нуклеиновых кислот., очистка белка, разделение клеток, хемилюминесценция, и другие технические области.

Наша продукция широко используется во многих областях., например, медицинское тестирование, генетическое тестирование, университетские исследования, генетическое разведение, и так далее. Мы не только поставляем продукцию, но и можем взять на себя OEM, ОДМ, и другие потребности. Если у вас есть соответствующая потребность, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам .