Professionelle Hiersteller vu biomagnetesche Perlen
Wéi kann den inhibitoreschen Effekt vu magnetesche Perlen op PCR reduzéiert ginn?
Mam Fortschrëtt vun
Präzisiounsmedizin an d'Reduktioun vun den NGS Sequenzéierungskäschte,magnetesch Perle-baséiert Nukleinsäure Extraktioun ass Standard Praxis an molekulare Diagnostik Laboratoiren ginn. Fir méi héich Erhuelungsraten z'erreechen an Feeler ze vermeiden, déi duerch onvollstänneg Elutioun verursaacht ginn, eng ëmmer méi Unzuel vu Fuerscher entscheede fir magnetesch Perlen ze addéieren déi Nukleinsäuren direkt an de PCR System erfaassen fir d'Verstäerkung.
Allerdéngs
Während dëser “PCR mat magnetesche Perlen” Approche streamlines Workflows, et huet süchteg Frustratiounen fir vill Praktiker agefouert: PCR Amplifikatioun Feeler, erhéicht Ct Wäerter, oder souguer absent Verstäerkungskurven. De Täter hannert dësen Themen ass dacks d'magnetesch Perlen selwer, déi de PCR System hemmen.
Vill intuitiv huelen un datt magnetesch Perlen nëmmen inert zolidd Träger sinn, déi net mat der Verstäerkung solle stéieren. Awer experimentell Daten weisen konsequent verbreet Perlen-induzéiert PCR Hemmung.
Virleefeg Experimenter mat eise magnetesche Kugelprodukter 160011, 160013, an 220015 fir Bead-an-PCR opgedeckt:
| Nee. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| MB | 160011（50mg/ml） | 160013（50mg/ml） | 220015（50mg/ml） | ||||||
| Inhalt | 0.5mg | 0.75mg | 1mg | 0.5mg | 0.75mg | 1mg | 0.5mg | 0.75mg | 1mg |
Resultat wéi folgend：
Baséierend op Elektrophoreseresultater, amplification Effizienz bei engem Magnéitfeld Perle Konzentratioun vun 0.5 mg: 220015 < 160013 < 160011; Gitt de bekannte magnetesche Perlepartikelgréissten: 220015 < 160013 < 160011, a betruecht hir spezifesch Uewerfläch Beräicher: 160011 < 160013 < 220015, d'Bindungsplazen pro Kugel ënner identesche Bedéngungen sinn also: 160011＜160013–220015; Dëst kann erkläre firwat PCR Hemmung méi ausgeschwat gëtt wéi d'magnetesch Perlekonzentratioun eropgeet.
Konsequent
E spezielle Bestanddeel - en Enhancer - ass an dësem PCR System erfuerderlech. Gemeinsam Enhancerer enthalen Betain, trehalose, DMSO (dimethylsulfoxid), glycerol, an BSA (Bovine Serum Albumin). Ënnert dësen, BSA handelt als Opfersubstrat, Präferenz bindend un magnetesche Perlen fir d'Polymerase vun Inhibitorinterferenz ze schützen.
Also hu mir probéiert ze bestëmmen ob d'magnetesch Perlekonzentratioun reduzéiert gëtt (0.025 mg - 0,075 mg) ergänzt mat 100 μg / ml BSA als PCR Enhancer géif méi gënschteg Resultater bréngen.
| Nee. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| MB | 160011（50mg/ml） | 160013（50mg/ml） | 220015(10mg/ml) | ||||||
| Inhalt | 0.025mg | 0.05mg | 0.075mg | 0.025mg | 0.05mg | 0.075mg | 0.005mg | 0.01mg | 0.015mg |
Resultat wéi folgend：
Et kann festgestallt ginn, datt um 0.025 mg, 160011 an 160013 weisen keen Ënnerscheed aus der Kontroll, wou am 0.05 mg an 0.075 vun, hir Efficacitéit reduzéiert progressiv. 220015, konsequent mat virdrun Analysen, weist net nëmmen exzellent Suspensionseigenschaften, awer besëtzt och eng grouss spezifesch Uewerfläch mat ville Bindungsplazen. Dëst erméiglecht effektiv Adsorptioun vun Taq Polymerase, doduerch d'Verstäerkung hemmt. Wann d'magnetesch Perlekonzentratioun reduzéiert gouf op 0.005 mg, d'Bandintensitéit erreecht nëmmen d'Halschent vun der Kontroll.
No der Fundamentaloptimiséierung ënner dëse Bedéngungen, eis 220013 Produkt soll fir d'Effizienz Validatioun ausgewielt ginn.：
| Nee. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| MB | 220013(10mg/ml) | 220015(10mg/ml) | ||||||
| Inhalt | 0.003mg | 0.005mg | 0.007mg | 0.01mg | 0.003mg | 0.005mg | 0.007mg | 0.01mg |
Resultat wéi folgend：
Et kann observéiert ginn, datt d'Leeschtungsresultater vun 220013 an 22015 sinn net z'ënnerscheeden.
Déi uewe genannte magnetesch Perlen 160011, 160013, 220013, an 220015 kënnen all optimal Resultater am PCR duerch Systemoptimiséierung erreechen. Si si gëeegent fir Uwendung am POCT Rapid Testen, pathogene Mikroorganismus Detektioun, automatiséiert Extraktioun, an ähnlech Szenarie.
Fournisseur
Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd., Ltd.gouf etabléiert an 2016 deen e professionnelle Hiersteller vu biomagnetesche Materialien an Nukleinsäure Extraktiounsreagenz ass.
Mir hu räich Erfahrung an Nukleinsäure Extraktioun an Offäll, Protein Reinigung, Zell Trennung, Chemilumineszenz, an aner technesch Beräicher.
Eis Produkter gi wäit a ville Beräicher benotzt, wéi medizinesch Tester, genetesch Tester, Universitéit Fuerschung, genetesch Zucht, an esou weider. Mir bidden net nëmmen Produkter, awer och kënnen OEM ënnerhuelen, ODM, an aner Besoinen. Wann Dir e verbonne Besoin hutt, weg fillen gratis eis ze kontaktéieren .
