Digital PCR Technologie:Prinzipien, Operatiounen, an Uwendungen

1. Experimentell Prinzip vun Digital PCR

Digital PCR (dPCR) ass eng fortgeschratt Nukleinsäuremolekül absolut Quantifizéierungstechnik. Säin Kär läit an der Dispersioun vun der Probe an eng grouss Zuel vun onofhängege Mikroreaktiounsunitéiten fir PCR Amplifikatioun. All Mikro-Reaktioun Eenheet kann een oder null Zilmoleküle enthalen. No PCR Amplifikatioun, Fluoreszenz Signaler ginn an all Eenheet festgestallt. Schlussendlech, déi absolut Zuel vun Zilmoleküle gëtt op Basis vum Poisson Verdeelungsprinzip berechent. Verglach mat traditionell Echtzäit fluoreszent quantitative PCR (qPCR), digital PCR vertrauen net op d'Standardkurve a kann direkt absolute Quantifizéierung ausféieren.

2. Operationell Schrëtt vun Digital PCR

Prouf Virbereedung: Éischten, Nukleinsäuren wéi genomesch DNA (gDNA) oder mRNA ginn aus Zilgewebe oder Proben extrahéiert, an mRNA gëtt an cDNA ëmgewandelt.

Reaktioun System Virbereedung: Mix déi extrahéiert Nukleinsäuren mat der Mastermix, Zil-spezifesch primers, an Sonden. Fir Droplet Digital PCR (ddPCR), Drëps Generatioun Ueleg ass och erfuerderlech.

Droplet Generatioun: Déi préparéiert Reaktiounsmëschung gëtt duerch en Drëpsgenerator veraarbecht fir Dausende vun Nanoliter-Gréisst Drëpsen ze kreéieren. All Tropfen kann een oder null Zilmoleküle enthalen.

PCR Amplifikatioun: Déi dropletiséierter Reaktiounsplack gëtt an engem PCR-Instrument fir Amplifikatioun plazéiert. Wärend der Verstäerkung, Zilmoleküle ginn amplifizéiert, a Fluoreszenz Signaler schéngen no an no.

Droplet Detektioun: No der Verstäerkung, d'Reaktiounsplack gëtt an engem Drëps Lieser plazéiert fir d'Fluoreszenzsignale vun all Drëpsen z'entdecken.

Daten Analyse: D'Software analyséiert automatesch d'Fluoreszenz Signaler vun all Tropfen a berechent d'absolut Zuel vun Zilmoleküle baséiert op den Undeel vu positive Drëpsen a Poisson Verdeelung.

3. Resultat Analyse vun Digital PCR

An digitale PCR Experimenter, Resultat Analyse baséiert haaptsächlech op d'Detektioun vu Fluoreszenzsignaler aus Drëpsen. D'Fluoreszenz Signaler vun all Tropfen ginn als positiv kategoriséiert (Zilmoleküle presentéieren) oder negativ (Zilmoleküle feelen). Duerch d'Zuel vun de positiven Drëpsen ze zielen an d'Poisson Verdeelungsformel ze benotzen, déi absolut Kopie Zuel vun Zil Molekülle an der Prouf kann berechent ginn. Zousätzlech, digital PCR Technologie ass héich sensibel a spezifesch, fäeg fir niddereg-Heefegkeet Zilmoleküle z'entdecken, an ass net vun der Verstäerkungseffizienz beaflosst.

4. Uwendungen vun Digital PCR

Digital PCR Technologie huet eng breet Palette vun Uwendungen a verschiddene Beräicher.

Gene Mutatioun Detektioun: Et kann niddereg-Heefegkeet Mutatiounen entdecken, gëeegent fir fréi Kriibs Duerchmusterung an Iwwerwaachung.

Kopie Zuel Variatioun Detectioun: Benotzt fir Kopie Zuel Variatiounen am Genom ze analyséieren, wéi chromosomal Abnormalitéiten.

Virus a Mikroorganismen Detektioun: Et kann viral Lasten a mikrobiellen Zuelen präzis erkennen, déi gëeegent ass fir d'Diagnostik an d'Iwwerwaachung vun ustiechend Krankheeten.

Genetesch modifizéiert Liewensmëttel Detektioun: Benotzt fir d'Präsenz vu genetesch modifizéierten Komponenten a Liewensmëttel z'entdecken.

Single-Zell Fuerschung: Et kann Genausdrock a Proteinniveauen aus eenzel Zellen entdecken.

Next-Generation Sequencing (NGS) Validatioun: Benotzt fir d'Genauegkeet an Zouverlässegkeet vun NGS Sequenzéierungsresultater z'iwwerpréiwen.

Am Resumé, digital PCR Technologie, mat senger héijer Empfindlechkeet, Genauegkeet, an absolute Quantifizéierungsvirdeeler, huet e grousst Potenzial an der biomedizinescher Fuerschung a klinescher Diagnostik gewisen. Wéi d'Technologie entwéckelt a Käschten erofgoen, digital PCR gëtt erwaart wäit a méi Felder applizéiert ze ginn.

Fournisseur

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd., Ltd.gouf etabléiert an 2016 deen e professionnelle Hiersteller vu biomagnetesche Materialien an Nukleinsäure Extraktiounsreagenz ass.

Mir hu räich Erfahrung an Nukleinsäure Extraktioun an Offäll, Protein Reinigung, Zell Trennung, Chemilumineszenz, an aner technesch Beräicher.

Eis Produkter gi wäit a ville Beräicher benotzt, wéi medizinesch Tester, genetesch Tester, Universitéit Fuerschung, genetesch Zucht, an esou weider. Mir bidden net nëmmen Produkter, awer och kënnen OEM ënnerhuelen, ODM, an aner Besoinen. Wann Dir e verbonne Besoin hutt, weg fillen gratis eis ze kontaktéieren umsales01@lingjunbio.com.