المهنية في صناعة الخرز المغناطيسي الحيوي
تقنية PCR الرقمية:مبادئ, العمليات, والتطبيقات
1. المبدأ التجريبي للPCR الرقمي
PCR الرقمي (dPCR) هي تقنية متقدمة للقياس الكمي المطلق لجزيء الحمض النووي. يكمن جوهرها في تشتيت العينة إلى عدد كبير من وحدات التفاعل الجزئي المستقلة لتضخيم PCR. قد تحتوي كل وحدة تفاعل دقيق على جزيء مستهدف واحد أو صفر. بعد تضخيم PCR, يتم الكشف عن إشارات مضان في كل وحدة. أخيرًا, يتم حساب العدد المطلق للجزيئات المستهدفة بناءً على مبدأ توزيع بواسون. بالمقارنة مع التقليدية في الوقت الحقيقي الفلورسنت الكمي PCR (qPCR), لا يعتمد PCR الرقمي على المنحنى القياسي ويمكنه إجراء القياس الكمي المطلق مباشرة.
2. الخطوات التشغيلية لـ PCR الرقمي
تحضير العينة: أولاً, الأحماض النووية مثل الحمض النووي الجينومي (الجدنا) أو يتم استخراج mRNA من الأنسجة أو العينات المستهدفة, ويتم تحويل مرنا إلى [كدنا]..
تحضير نظام التفاعل: امزج الأحماض النووية المستخرجة مع المزيج الرئيسي, الاشعال محددة الهدف, وتحقيقات. للقطرة الرقمية PCR (ddPCR), مطلوب أيضًا زيت توليد القطرات.
جيل القطرات: تتم معالجة خليط التفاعل المحضر من خلال مولد قطيرات لتكوين آلاف القطرات بحجم النانوليتر. قد تحتوي كل قطرة على جزيء مستهدف واحد أو صفر.
تضخيم PCR: يتم وضع لوحة التفاعل المقطرة في أداة PCR للتضخيم. أثناء التضخيم, يتم تضخيم الجزيئات المستهدفة, وتظهر إشارات مضان تدريجيا.
كشف القطرات: بعد التضخيم, يتم وضع لوحة التفاعل في قارئ القطرات للكشف عن إشارات الفلورسنت لكل قطرة.
تحليل البيانات: يقوم البرنامج تلقائيًا بتحليل إشارات التألق لكل قطرة ويحسب العدد المطلق للجزيئات المستهدفة بناءً على نسبة القطرات الموجبة وتوزيع بواسون.
3. تحليل نتائج PCR الرقمي
في تجارب PCR الرقمية, يعتمد تحليل النتائج بشكل أساسي على اكتشاف إشارات التألق من القطرات. يتم تصنيف إشارات الفلورسنت لكل قطرة على أنها إيجابية (الجزيئات المستهدفة موجودة) أو سلبي (الجزيئات المستهدفة غائبة). عن طريق حساب عدد القطرات الموجبة واستخدام صيغة توزيع بواسون, يمكن حساب عدد النسخ المطلق للجزيئات المستهدفة في العينة. بالإضافة إلى ذلك, تعتبر تقنية PCR الرقمية حساسة ومحددة للغاية, قادرة على اكتشاف الجزيئات المستهدفة منخفضة الوفرة, ولا يتأثر بكفاءة التضخيم.
4. تطبيقات PCR الرقمي
تتمتع تقنية PCR الرقمية بمجموعة واسعة من التطبيقات في مختلف المجالات.
كشف الطفرة الجينية: يمكنه اكتشاف الطفرات منخفضة الوفرة, مناسبة لفحص ورصد السرطان المبكر.
كشف تباين رقم النسخ: يستخدم لتحليل اختلافات أرقام النسخ في الجينوم, مثل تشوهات الكروموسومات.
الكشف عن الفيروسات والكائنات الحية الدقيقة: يمكنه الكشف بدقة عن الأحمال الفيروسية والأعداد الميكروبية, وهو مناسب لتشخيص ومراقبة الأمراض المعدية.
الكشف عن الأغذية المعدلة وراثيا: يستخدم للكشف عن وجود مكونات معدلة وراثيا في الغذاء.
أبحاث الخلية الواحدة: يمكنه اكتشاف التعبير الجيني ومستويات البروتين من الخلايا المفردة.
تسلسل الجيل القادم (خ ع) تصديق: يستخدم للتحقق من دقة وموثوقية نتائج تسلسل NGS.
في ملخص, تقنية PCR الرقمية, مع حساسيته العالية, دقة, ومزايا القياس الكمي المطلق, أظهرت إمكانات كبيرة في البحوث الطبية الحيوية والتشخيص السريري. مع تطور التكنولوجيا وانخفاض التكاليف, ومن المتوقع أن يتم تطبيق تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي على نطاق واسع في المزيد من المجالات.
مزود
شركة شنغهاي لينغجون للتكنولوجيا الحيوية, المحدودة.تأسست في 2016 وهي شركة متخصصة في تصنيع المواد المغناطيسية الحيوية وكواشف استخلاص الحمض النووي.
لدينا خبرة غنية في استخراج وتنقية الحمض النووي, تنقية البروتين, فصل الخلايا, التألق الكيميائي, وغيرها من المجالات التقنية.
منتجاتنا تستخدم على نطاق واسع في العديد من المجالات, مثل الفحوصات الطبية, الاختبارات الجينية, البحوث الجامعية, التكاثر الوراثي, وهكذا. نحن لا نقدم المنتجات فحسب، بل يمكننا أيضًا إجراء تصنيع المعدات الأصلية, أوديإم, وغيرها من الاحتياجات. إذا كان لديك حاجة ذات صلة, لا تتردد في الاتصال بنا علىsales01@lingjunbio.com.
