Технология цифровой ПЦР:Принципы, Операции, и приложения

1. Экспериментальный принцип цифровой ПЦР

Цифровая ПЦР (дПЦР) представляет собой усовершенствованный метод абсолютного количественного определения молекул нуклеиновой кислоты.. Его суть заключается в распределении образца на большое количество независимых микрореакционных единиц для ПЦР-амплификации.. Каждая микрореакционная единица может содержать одну или ноль целевых молекул.. После ПЦР-амплификации, сигналы флуоресценции обнаруживаются в каждом блоке. В конечном счете, абсолютное количество целевых молекул рассчитывается на основе принципа распределения Пуассона. По сравнению с традиционным флуоресцентная количественная ПЦР в реальном времени (кПЦР), цифровая ПЦР не полагается на стандартную кривую и может напрямую выполнять абсолютную количественную оценку.

2. Операционные этапы цифровой ПЦР

Подготовка проб: Первый, нуклеиновые кислоты, такие как геномная ДНК (гДНК) или мРНК извлекаются из тканей-мишеней или образцов, и мРНК превращается в кДНК.

Подготовка реакционной системы: Смешайте экстрагированные нуклеиновые кислоты с мастер-миксом., целенаправленные праймеры, и зонды. Для капельной цифровой ПЦР (ддПЦР), также требуется масло для генерации капель.

Генерация капель: Приготовленная реакционная смесь обрабатывается генератором капель для создания тысяч капель размером в нанолитр.. Каждая капля может содержать одну или ноль целевых молекул..

ПЦР-амплификация: Реакционную пластинку с каплями помещают в прибор для ПЦР для амплификации.. Во время усиления, молекулы-мишени амплифицируются, и сигналы флуоресценции постепенно появляются.

Обнаружение капель: После усиления, реакционную пластинку помещают в устройство для считывания капель для обнаружения сигналов флуоресценции каждой капли..

Анализ данных: Программное обеспечение автоматически анализирует сигналы флуоресценции каждой капли и рассчитывает абсолютное количество целевых молекул на основе доли положительных капель и распределения Пуассона..

3. Анализ результатов цифровой ПЦР

В экспериментах цифровой ПЦР, анализ результатов в основном основан на обнаружении сигналов флуоресценции капель.. Сигналы флуоресценции каждой капли классифицируются как положительные. (присутствуют целевые молекулы) или отрицательный (целевые молекулы отсутствуют). Подсчитав количество положительных капель и используя формулу распределения Пуассона, можно рассчитать абсолютное число копий целевых молекул в образце. Кроме того, технология цифровой ПЦР отличается высокой чувствительностью и специфичностью., способен обнаруживать целевые молекулы с низким содержанием, и на него не влияет эффективность усиления.

4. Применение цифровой ПЦР

Технология цифровой ПЦР имеет широкий спектр применения в различных областях..

Обнаружение мутаций генов: Он может обнаруживать мутации с низкой распространенностью, подходит для раннего скрининга и мониторинга рака.

Обнаружение изменения номера копии: Используется для анализа изменений количества копий в геноме., например, хромосомные аномалии.

Обнаружение вирусов и микроорганизмов: Он может точно определять вирусную нагрузку и количество микробов., который подходит для диагностики и мониторинга инфекционных заболеваний.

Обнаружение генетически модифицированных продуктов питания: Используется для обнаружения наличия генетически модифицированных компонентов в продуктах питания..

Одноклеточные исследования: Он может определять экспрессию генов и уровни белка в отдельных клетках..

Секвенирование нового поколения (НГС) Валидация: Используется для проверки точности и надежности результатов секвенирования NGS..

В итоге, цифровая технология ПЦР, с его высокой чувствительностью, точность, и абсолютные количественные преимущества, продемонстрировал большой потенциал в биомедицинских исследованиях и клинической диагностике.. По мере развития технологий и снижения затрат, Ожидается, что цифровая ПЦР будет широко применяться во многих областях..

Поставщик

Шанхайская биотехнологическая компания Линцзюнь., ОООбыл создан в 2016 который является профессиональным производителем биомагнитных материалов и реагентов для экстракции нуклеиновых кислот..

Мы имеем богатый опыт в экстракции и очистке нуклеиновых кислот., очистка белка, разделение клеток, хемилюминесценция, и другие технические области.

Наша продукция широко используется во многих областях., например, медицинское тестирование, генетическое тестирование, университетские исследования, генетическое разведение, и так далее. Мы не только поставляем продукцию, но и можем взять на себя OEM, ОДМ, и другие потребности. Если у вас есть соответствующая потребность, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам по адресуsales01@lingjunbio.com.