ডিজিটাল পিসিআর প্রযুক্তি:নীতিমালা, অপারেশন, এবং অ্যাপ্লিকেশন

1. ডিজিটাল পিসিআর এর পরীক্ষামূলক নীতি

ডিজিটাল পিসিআর (ডিপিসিআর) একটি উন্নত নিউক্লিক অ্যাসিড অণু পরম পরিমাণ নির্ধারণের কৌশল. পিসিআর পরিবর্ধনের জন্য নমুনাটিকে বিপুল সংখ্যক স্বাধীন মাইক্রো-রিঅ্যাকশন ইউনিটে ছড়িয়ে দেওয়ার মধ্যে এর মূল নিহিত রয়েছে।. প্রতিটি মাইক্রো-প্রতিক্রিয়া ইউনিটে এক বা শূন্য লক্ষ্য অণু থাকতে পারে. পিসিআর পরিবর্ধনের পরে, প্রতিটি ইউনিটে ফ্লুরোসেন্স সংকেত সনাক্ত করা হয়. শেষ পর্যন্ত, পয়সন বন্টন নীতির উপর ভিত্তি করে লক্ষ্য অণুর পরম সংখ্যা গণনা করা হয়. ঐতিহ্যগত তুলনায় রিয়েল-টাইম ফ্লুরোসেন্ট পরিমাণগত পিসিআর (qPCR), ডিজিটাল পিসিআর স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখার উপর নির্ভর করে না এবং সরাসরি পরম পরিমাণ নির্ধারণ করতে পারে.

2. ডিজিটাল পিসিআর এর অপারেশনাল ধাপ

নমুনা প্রস্তুতি: প্রথম, নিউক্লিক অ্যাসিড যেমন জিনোমিক ডিএনএ (জিডিএনএ) অথবা mRNA টার্গেট টিস্যু বা নমুনা থেকে বের করা হয়, এবং mRNA সিডিএনএতে রূপান্তরিত হয়.

প্রতিক্রিয়া সিস্টেম প্রস্তুতি: নিষ্কাশিত নিউক্লিক অ্যাসিডগুলি মাস্টার মিক্সের সাথে মিশ্রিত করুন, লক্ষ্য-নির্দিষ্ট প্রাইমার, এবং প্রোব. ড্রপলেট ডিজিটাল পিসিআরের জন্য (ddPCR), ফোঁটা প্রজন্মের তেলও প্রয়োজন.

ফোঁটা প্রজন্ম: প্রস্তুত প্রতিক্রিয়া মিশ্রণটি হাজার হাজার ন্যানোলিটার আকারের ফোঁটা তৈরি করতে একটি ড্রপলেট জেনারেটরের মাধ্যমে প্রক্রিয়া করা হয়. প্রতিটি ফোঁটাতে এক বা শূন্য লক্ষ্য অণু থাকতে পারে.

পিসিআর পরিবর্ধন: ড্রপলেটাইজড রিঅ্যাকশন প্লেটটি পরিবর্ধনের জন্য একটি পিসিআর যন্ত্রে স্থাপন করা হয়. পরিবর্ধনের সময়, লক্ষ্য অণু প্রশস্ত করা হয়, এবং ফ্লুরোসেন্স সংকেত ধীরে ধীরে প্রদর্শিত হয়.

ফোঁটা সনাক্তকরণ: পরিবর্ধনের পর, প্রতিটি ফোঁটার ফ্লুরোসেন্স সংকেত সনাক্ত করতে প্রতিক্রিয়া প্লেটটি একটি ড্রপলেট রিডারে স্থাপন করা হয়.

ডেটা বিশ্লেষণ: The software automatically analyzes the fluorescence signals of each droplet and calculates the absolute number of target molecules based on the proportion of positive droplets and Poisson distribution.

3. Result Analysis of Digital PCR

In digital PCR experiments, result analysis mainly relies on the detection of fluorescence signals from droplets. The fluorescence signals of each droplet are categorized as positive (target molecules present) or negative (target molecules absent). By counting the number of positive droplets and using the Poisson distribution formula, the absolute copy number of target molecules in the sample can be calculated. উপরন্তু, digital PCR technology is highly sensitive and specific, capable of detecting low-abundance target molecules, and is unaffected by amplification efficiency.

4. Applications of Digital PCR

ডিজিটাল পিসিআর প্রযুক্তির বিভিন্ন ক্ষেত্রে বিস্তৃত অ্যাপ্লিকেশন রয়েছে.

জিন মিউটেশন সনাক্তকরণ: এটি কম-প্রচুর মিউটেশন সনাক্ত করতে পারে, প্রাথমিক ক্যান্সার স্ক্রীনিং এবং পর্যবেক্ষণের জন্য উপযুক্ত.

কপি নম্বর বৈচিত্র্য সনাক্তকরণ: জিনোমে অনুলিপি সংখ্যার বৈচিত্র বিশ্লেষণ করতে ব্যবহৃত হয়, যেমন ক্রোমোসোমাল অস্বাভাবিকতা.

ভাইরাস এবং অণুজীব সনাক্তকরণ: এটি ভাইরাল লোড এবং মাইক্রোবিয়াল সংখ্যা সঠিকভাবে সনাক্ত করতে পারে, যা সংক্রামক রোগ নির্ণয় এবং পর্যবেক্ষণের জন্য উপযুক্ত.

জেনেটিকালি মডিফাইড ফুড ডিটেকশন: খাদ্যে জেনেটিকালি পরিবর্তিত উপাদানের উপস্থিতি সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়.

একক-কোষ গবেষণা: এটি একক কোষ থেকে জিনের প্রকাশ এবং প্রোটিনের মাত্রা সনাক্ত করতে পারে.

পরবর্তী প্রজন্মের সিকোয়েন্সিং (এনজিএস) বৈধতা: NGS সিকোয়েন্সিং ফলাফলের নির্ভুলতা এবং নির্ভরযোগ্যতা যাচাই করতে ব্যবহৃত হয়.

সংক্ষেপে, ডিজিটাল পিসিআর প্রযুক্তি, এর উচ্চ সংবেদনশীলতা সহ, নির্ভুলতা, and absolute quantification advantages, has shown great potential in biomedical research and clinical diagnostics. As technology develops and costs decrease, digital PCR is expected to be widely applied in more fields.

সরবরাহকারী

সাংহাই লিংজুন বায়োটেকনোলজি কো., লিমিটেডসালে প্রতিষ্ঠিত হয় 2016 যা বায়োম্যাগনেটিক উপকরণ এবং নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন বিকারকগুলির একটি পেশাদার প্রস্তুতকারক.

আমাদের নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন এবং পরিশোধন সমৃদ্ধ অভিজ্ঞতা আছে, প্রোটিন পরিশোধন, কোষ বিচ্ছেদ, কেমিলুমিনেসেন্স, এবং অন্যান্য প্রযুক্তিগত ক্ষেত্র.

আমাদের পণ্য ব্যাপকভাবে অনেক ক্ষেত্রে ব্যবহৃত হয়, যেমন মেডিকেল টেস্টিং, জেনেটিক পরীক্ষা, বিশ্ববিদ্যালয় গবেষণা, জেনেটিক প্রজনন, এবং তাই. আমরা কেবল পণ্য সরবরাহ করি না তবে OEM গ্রহণ করতে পারি, ওডিএম, এবং অন্যান্য প্রয়োজন. আপনি যদি একটি সম্পর্কিত প্রয়োজন আছে, এ আমাদের সাথে যোগাযোগ বিনা দ্বিধায় দয়া করেsales01@lingjunbio.com.