디지털 PCR 기술:원칙, 운영, 및 응용

1. 디지털 PCR의 실험 원리

디지털 PCR (dPCR) 첨단 핵산분자 절대정량 기술입니다.. 그 핵심은 PCR 증폭을 위해 샘플을 다수의 독립적인 미세 반응 단위로 분산시키는 것입니다.. 각 미세 반응 단위에는 1개 또는 0개의 표적 분자가 포함될 수 있습니다.. PCR 증폭 후, 각 장치에서 형광 신호가 감지됩니다.. 궁극적으로, 포아송 분포 원리에 따라 표적 분자의 절대 개수를 계산합니다.. 기존에 비해 실시간 형광 정량 PCR (qPCR), 디지털 PCR은 표준 곡선에 의존하지 않고 직접 절대 정량을 수행할 수 있습니다..

2. 디지털 PCR의 작동 단계

샘플 준비: 첫 번째, 게놈 DNA와 같은 핵산 (gDNA) 또는 표적 조직이나 샘플에서 mRNA를 추출합니다., 그리고 mRNA는 cDNA로 변환됩니다..

반응 시스템 준비: 추출된 핵산을 마스터 믹스와 혼합합니다., 표적 특이적 프라이머, 그리고 프로브. 액적 디지털 PCR용 (ddPCR), 액적 생성 오일도 필요합니다.

액적 생성: 준비된 반응 혼합물은 액적 생성기를 통해 처리되어 수천 개의 나노리터 크기의 액적을 생성합니다.. 각 액적에는 표적 분자가 1개 또는 0개 포함될 수 있습니다..

PCR 증폭: 액적화된 반응 플레이트는 증폭을 위해 PCR 장비에 배치됩니다.. 증폭 중, 표적 분자가 증폭됩니다., 형광 신호가 점차적으로 나타납니다..

물방울 감지: 증폭 후, 반응 플레이트를 액적 판독기에 배치하여 각 액적의 형광 신호를 감지합니다..

데이터 분석: 소프트웨어는 각 액적의 형광 신호를 자동으로 분석하고 양성 액적의 비율과 포아송 분포를 기반으로 표적 분자의 절대 수를 계산합니다..

3. 디지털 PCR 결과 분석

디지털 PCR 실험에서, 결과 분석은 주로 액적의 형광 신호 감지에 의존합니다.. 각 액적의 형광 신호는 양성으로 분류됩니다. (존재하는 표적 분자) 또는 부정적인 (표적 분자가 없음). 양성 액적의 수를 계산하고 포아송 분포 공식을 사용하여, 샘플 내 표적 분자의 절대 카피 수를 계산할 수 있습니다.. 추가적으로, 디지털 PCR 기술은 매우 민감하고 특이적입니다., 소량의 표적분자를 검출할 수 있는 능력, 증폭 효율에 영향을 받지 않습니다..

4. 디지털 PCR의 응용

디지털 PCR 기술은 다양한 분야에서 폭넓게 활용되고 있습니다..

유전자 돌연변이 검출: 소량의 돌연변이를 검출할 수 있습니다., 암 조기 검진 및 모니터링에 적합.

사본 번호 변형 감지: 게놈의 복제수 변이를 분석하는 데 사용됩니다., 염색체 이상과 같은.

바이러스 및 미생물 검출: 바이러스 양과 미생물 수를 정확하게 감지할 수 있습니다., 감염성 질환의 진단 및 모니터링에 적합한 제품입니다..

유전자 변형 식품 감지: 식품에서 유전자 변형 성분의 존재를 감지하는 데 사용됩니다..

단일 세포 연구: 단일 세포에서 유전자 발현과 단백질 수준을 검출할 수 있습니다..

차세대 시퀀싱 (NGS) 확인: NGS 시퀀싱 결과의 정확성과 신뢰성을 검증하는 데 사용됩니다..

요약하면, 디지털 PCR 기술, 높은 감도로, 정확성, 절대적인 정량화의 장점, 생물 의학 연구 및 임상 진단 분야에서 큰 잠재력을 보여주었습니다.. 기술이 발전하고 비용이 낮아지면서, 디지털 PCR은 더 많은 분야에 폭넓게 적용될 것으로 예상됩니다..

공급자

상하이 링쥔 생명공학 유한회사, 주식회사에 설립되었습니다 2016 생체자성재료 및 핵산추출시약 전문제조업체입니다..

핵산 추출 및 정제 분야에서 풍부한 경험을 보유하고 있습니다., 단백질 정제, 세포 분리, 화학발광, 및 기타 기술 분야.

우리의 제품은 많은 분야에서 널리 사용됩니다., 의료 테스트와 같은, 유전자 검사, 대학 연구, 유전자 육종, 등. 우리는 제품을 제공할 뿐만 아니라 OEM도 수행할 수 있습니다., ODM, 그리고 다른 필요. 관련된 필요사항이 있는 경우, 언제든지 저희에게 연락해주세요.sales01@lingjunbio.com.