डिजिटल पीसीआर प्रौद्योगिकी:सिद्धांत, संचालन, और अनुप्रयोग

1. डिजिटल पीसीआर का प्रायोगिक सिद्धांत

डिजिटल पीसीआर (डीपीसीआर) एक उन्नत न्यूक्लिक एसिड अणु पूर्ण परिमाणीकरण तकनीक है. इसका मूल पीसीआर प्रवर्धन के लिए नमूने को बड़ी संख्या में स्वतंत्र सूक्ष्म-प्रतिक्रिया इकाइयों में फैलाने में निहित है. प्रत्येक सूक्ष्म-प्रतिक्रिया इकाई में एक या शून्य लक्ष्य अणु हो सकते हैं. पीसीआर प्रवर्धन के बाद, प्रत्येक इकाई में प्रतिदीप्ति संकेतों का पता लगाया जाता है. अंत में, लक्ष्य अणुओं की पूर्ण संख्या की गणना पॉइसन वितरण सिद्धांत के आधार पर की जाती है. पारंपरिक की तुलना में वास्तविक समय फ्लोरोसेंट मात्रात्मक पीसीआर (क्यूपीसीआर), डिजिटल पीसीआर मानक वक्र पर निर्भर नहीं है और सीधे पूर्ण परिमाणीकरण कर सकता है.

2. डिजिटल पीसीआर के परिचालन चरण

नमूना तैयार करना: पहला, न्यूक्लिक एसिड जैसे जीनोमिक डीएनए (जीडीएनए) या एमआरएनए लक्ष्य ऊतकों या नमूनों से निकाले जाते हैं, और एमआरएनए सीडीएनए में परिवर्तित हो जाता है.

प्रतिक्रिया प्रणाली की तैयारी: निकाले गए न्यूक्लिक एसिड को मास्टर मिश्रण के साथ मिलाएं, लक्ष्य-विशिष्ट प्राइमर, और जांच. छोटी बूंद डिजिटल पीसीआर के लिए (ddपीसीआर), बूंद उत्पादन तेल की भी आवश्यकता होती है.

बूंद पीढ़ी: तैयार प्रतिक्रिया मिश्रण को हजारों नैनोलीटर आकार की बूंदें बनाने के लिए एक बूंद जनरेटर के माध्यम से संसाधित किया जाता है. प्रत्येक बूंद में एक या शून्य लक्ष्य अणु हो सकते हैं.

पीसीआर प्रवर्धन: प्रवर्धन के लिए ड्रॉपलेटाइज्ड रिएक्शन प्लेट को पीसीआर उपकरण में रखा जाता है. प्रवर्धन के दौरान, लक्ष्य अणु प्रवर्धित होते हैं, और प्रतिदीप्ति संकेत धीरे-धीरे प्रकट होते हैं.

बूंद का पता लगाना: प्रवर्धन के बाद, प्रत्येक बूंद के प्रतिदीप्ति संकेतों का पता लगाने के लिए प्रतिक्रिया प्लेट को एक बूंद रीडर में रखा जाता है.

डेटा विश्लेषण: सॉफ्टवेयर स्वचालित रूप से प्रत्येक बूंद के प्रतिदीप्ति संकेतों का विश्लेषण करता है और सकारात्मक बूंदों और पॉइसन वितरण के अनुपात के आधार पर लक्ष्य अणुओं की पूर्ण संख्या की गणना करता है।.

3. डिजिटल पीसीआर का परिणाम विश्लेषण

डिजिटल पीसीआर प्रयोगों में, परिणाम विश्लेषण मुख्य रूप से बूंदों से प्रतिदीप्ति संकेतों का पता लगाने पर निर्भर करता है. प्रत्येक बूंद के प्रतिदीप्ति संकेतों को सकारात्मक के रूप में वर्गीकृत किया गया है (लक्ष्य अणु मौजूद हैं) या नकारात्मक (लक्ष्य अणु अनुपस्थित). सकारात्मक बूंदों की संख्या की गणना करके और पॉइसन वितरण सूत्र का उपयोग करके, नमूने में लक्ष्य अणुओं की पूर्ण प्रतिलिपि संख्या की गणना की जा सकती है. इसके अतिरिक्त, डिजिटल पीसीआर तकनीक अत्यधिक संवेदनशील और विशिष्ट है, कम-बहुतायत वाले लक्ष्य अणुओं का पता लगाने में सक्षम, और प्रवर्धन दक्षता से अप्रभावित है.

4. डिजिटल पीसीआर के अनुप्रयोग

डिजिटल पीसीआर तकनीक के विभिन्न क्षेत्रों में व्यापक अनुप्रयोग हैं.

जीन उत्परिवर्तन का पता लगाना: यह कम बहुतायत उत्परिवर्तन का पता लगा सकता है, प्रारंभिक कैंसर जांच और निगरानी के लिए उपयुक्त.

प्रतिलिपि संख्या भिन्नता का पता लगाना: जीनोम में प्रतिलिपि संख्या भिन्नताओं का विश्लेषण करने के लिए उपयोग किया जाता है, जैसे क्रोमोसोमल असामान्यताएं.

वायरस और सूक्ष्मजीव का पता लगाना: यह वायरल लोड और माइक्रोबियल संख्या का सटीक पता लगा सकता है, जो संक्रामक रोगों के निदान और निगरानी के लिए उपयुक्त है.

आनुवंशिक रूप से संशोधित भोजन का पता लगाना: भोजन में आनुवंशिक रूप से संशोधित घटकों की उपस्थिति का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है.

एकल-कोशिका अनुसंधान: यह एकल कोशिकाओं से जीन अभिव्यक्ति और प्रोटीन स्तर का पता लगा सकता है.

अगली पीढ़ी का अनुक्रमण (एनजीएस) मान्यकरण: एनजीएस अनुक्रमण परिणामों की सटीकता और विश्वसनीयता को सत्यापित करने के लिए उपयोग किया जाता है.

सारांश, डिजिटल पीसीआर तकनीक, इसकी उच्च संवेदनशीलता के साथ, शुद्धता, और पूर्ण परिमाणीकरण लाभ, बायोमेडिकल रिसर्च और क्लिनिकल डायग्नोस्टिक्स में काफी संभावनाएं दिखाई गई हैं. जैसे-जैसे तकनीक विकसित होती है और लागत कम होती जाती है, डिजिटल पीसीआर को अधिक क्षेत्रों में व्यापक रूप से लागू किए जाने की उम्मीद है.

देने वाला

शंघाई लिंगजुन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी, लिमिटेडमें स्थापित किया गया था 2016 जो बायोमैग्नेटिक सामग्रियों और न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण अभिकर्मकों का एक पेशेवर निर्माता है.

हमारे पास न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण में समृद्ध अनुभव है, प्रोटीन शुद्धि, कोशिका पृथक्करण, chemiluminescence, और अन्य तकनीकी क्षेत्र.

हमारे उत्पाद कई क्षेत्रों में व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं, जैसे चिकित्सा परीक्षण, आनुवंशिक परीक्षण, विश्वविद्यालय अनुसंधान, आनुवंशिक प्रजनन, और इसी तरह. हम न केवल उत्पाद उपलब्ध कराते हैं बल्कि ओईएम का कार्य भी कर सकते हैं, ओडीएम, और अन्य जरूरतें. यदि आपको इससे संबंधित कोई आवश्यकता है, कृपया बेझिझक हमसे संपर्क करेंsales01@lingjunbio.com.