デジタル PCR 技術:原則, 運営, とアプリケーション

1. デジタル PCR の実験原理

デジタル PCR (dPCR) 高度な核酸分子の絶対定量技術です. その核心は、PCR 増幅のためにサンプルを多数の独立したマイクロ反応ユニットに分散させることにあります。. 各マイクロ反応ユニットには、ターゲット分子が 1 つ含まれていても、含まれていない場合もあります。. PCR増幅後, 各ユニットで蛍光シグナルを検出. 結局のところ, ターゲット分子の絶対数はポアソン分布原理に基づいて計算されます。. 従来のものと比較して リアルタイム蛍光定量PCR (qPCR), デジタル PCR は標準曲線に依存せず、絶対定量を直接実行できます。.

2. デジタル PCR の操作手順

サンプルの準備: 初め, ゲノムDNAなどの核酸 (gDNA) または mRNA が標的組織またはサンプルから抽出される, そしてmRNAはcDNAに変換されます.

反応系の準備: 抽出した核酸をマスターミックスと混合する, 標的特異的プライマー, とプローブ. ドロップレットデジタル PCR 用 (ddPCR), ドロップレット生成オイルも必要.

ドロップレットの生成: 準備された反応混合物は液滴生成器を通して処理され、数千のナノリットルサイズの液滴が生成されます。. 各液滴には、ターゲット分子が 1 つ含まれていても、含まれていない場合もあります。.

PCR増幅: 液滴化された反応プレートは増幅のために PCR 装置に配置されます。. 増幅中, 標的分子が増幅される, 徐々に蛍光シグナルが現れます.

液滴の検出: 増幅後, 反応プレートを液滴リーダーに置き、各液滴の蛍光シグナルを検出します。.

データ分析: ソフトウェアは各液滴の蛍光シグナルを自動的に分析し、陽性液滴の割合とポアソン分布に基づいてターゲット分子の絶対数を計算します。.

3. デジタル PCR の結果解析

デジタル PCR 実験では, 結果分析は主に液滴からの蛍光シグナルの検出に依存します。. 各液滴の蛍光シグナルは陽性として分類されます。 (標的分子が存在する) または否定的な (標的分子が存在しない). 陽性の液滴の数を数え、ポアソン分布の公式を使用することによって, サンプル中の標的分子の絶対コピ​​ー数を計算できます. さらに, デジタル PCR テクノロジーは高感度かつ特異的です, 少量の標的分子を検出可能, 増幅効率の影響を受けません.

4. デジタル PCR の応用

デジタル PCR 技術はさまざまな分野で幅広い応用が可能です.

遺伝子変異の検出: 少量の突然変異を検出できる, 早期がんのスクリーニングとモニタリングに適しています.

コピー数変異の検出: ゲノム内のコピー数の変異を分析するために使用されます, 染色体異常など.

ウイルスおよび微生物の検出: ウイルス量と微生物数を正確に検出できます, 感染症の診断やモニタリングに適しています.

遺伝子組み換え食品の検出: 食品中の遺伝子組み換え成分の存在を検出するために使用されます。.

単細胞研究: 単一細胞から遺伝子発現とタンパク質レベルを検出できます.

次世代シーケンス (NGS) 検証: NGS シーケンス結果の精度と信頼性を検証するために使用されます。.

要約すれば, デジタル PCR 技術, 高い感度で, 正確さ, 絶対的な定量化の利点, 生物医学研究と臨床診断において大きな可能性を示しています. テクノロジーが発展し、コストが下がるにつれて, デジタルPCRはより多くの分野で広く応用されることが期待されています.

サプライヤー

上海霊軍生物技術有限公司, 株式会社に設立されました 2016 生体磁性材料と核酸抽出試薬の専門メーカーです.

核酸抽出・精製の経験が豊富です。, タンパク質の精製, 細胞分離, 化学発光, その他の技術分野.

当社の製品はさまざまな分野で広く使用されています, 医療検査など, 遺伝子検査, 大学の研究, 遺伝子育種, 等々. 製品のご提供だけでなくOEMも承ります, ODM, その他のニーズ. 関連するニーズがある場合, お気軽にお問い合わせください。sales01@lingjunbio.com.