Wie kann die hemmende Wirkung von Magnetkügelchen auf die PCR gemildert werden??

Mit der Weiterentwicklung von

Präzisionsmedizin und die Reduzierung der NGS-Sequenzierungskosten,Die auf Magnetkügelchen basierende Nukleinsäureextraktion ist in molekulardiagnostischen Labors zur Standardpraxis geworden. Um höhere Wiederfindungsraten zu erreichen und Fehler durch unvollständige Elution zu vermeiden, Immer mehr Forscher entscheiden sich dafür, magnetische Kügelchen, die Nukleinsäuren einfangen, direkt in das PCR-System zur Amplifikation einzuführen.

Jedoch

Während dies “PCR mit Magnetkügelchen” Ansatz rationalisiert Arbeitsabläufe, es hat bei vielen Praktizierenden zu heimtückischer Frustration geführt: PCR-Amplifikationsfehler, erhöhte Ct-Werte, oder sogar fehlende Verstärkungskurven. Die Ursache dieser Probleme sind oft die Magnetperlen selbst, die das PCR-System hemmen.

Viele gehen instinktiv davon aus, dass Magnetkügelchen lediglich inerte feste Träger sind, die die Verstärkung nicht beeinträchtigen sollten. Experimentelle Daten belegen jedoch durchgängig eine weitverbreitete Bead-induzierte PCR-Hemmung.

Vorversuche mit unseren Magnetperlenprodukten 160011, 160013, Und 220015 für Bead-in-PCR aufgedeckt:

NEIN.	1	2	3	4	5	6	7	8	9
MB	160011(50 mg/ml)			160013(50 mg/ml)			220015(50 mg/ml)
Inhalt	0.5mg	0.75mg	1mg	0.5mg	0.75mg	1mg	0.5mg	0.75mg	1mg

Ergebnis wie folgt：

Basierend auf Elektrophoreseergebnissen, Verstärkungseffizienz bei einer Magnetkügelchenkonzentration von 0.5 mg: 220015 < 160013 < 160011; Angesichts der bekannten Partikelgrößen der Magnetkügelchen: 220015 < 160013 < 160011, und unter Berücksichtigung ihrer spezifischen Oberflächen: 160011 < 160013 < 220015, Die Bindungsstellen pro Bead unter identischen Bedingungen betragen somit: 160011&lt;160013&lt;220015; Dies könnte erklären, warum die PCR-Hemmung mit zunehmender Konzentration der Magnetkügelchen stärker wird.

Folglich

In diesem PCR-System ist eine spezielle Komponente – ein Enhancer – erforderlich. Zu den üblichen Verstärkern gehört Betain, Trehalose, DMSO (Dimethylsulfoxid), Glycerin, und BSA (Rinderserumalbumin). Unter diesen, BSA fungiert als Opfersubstrat, Sie binden bevorzugt an Magnetkügelchen, um die Polymerase vor Störungen durch Inhibitoren zu schützen.

Daher wollten wir herausfinden, ob sich die Konzentration magnetischer Kügelchen verringert (0.025 mg–0,075 mg) ergänzt mit 100 μg/ml BSA als PCR-Enhancer würde zu günstigeren Ergebnissen führen.

NEIN.	1	2	3	4	5	6	7	8	9
MB	160011(50 mg/ml)			160013(50 mg/ml)			220015(10 mg/ml)
Inhalt	0.025mg	0.05mg	0.075mg	0.025mg	0.05mg	0.075mg	0.005mg	0.01mg	0.015mg

Ergebnis wie folgt：

Es ist zu beobachten, dass bei 0.025 mg, 160011 Und 160013 keinen Unterschied zur Kontrolle aufweisen, wohingegen bei 0.05 mg und 0.075 von, Ihre Wirksamkeit nimmt zunehmend ab. 220015, im Einklang mit früheren Analysen, weist nicht nur hervorragende Suspensionseigenschaften auf, sondern verfügt auch über eine große spezifische Oberfläche mit zahlreichen Bindungsstellen. Dies ermöglicht eine effektive Adsorption der Taq-Polymerase, Dadurch wird die Verstärkung gehemmt. Als die Konzentration der Magnetkügelchen auf reduziert wurde 0.005 mg, die Bandenintensität erreichte nur die Hälfte der Kontrolle.

Nachfolgend die grundlegende Optimierung unter diesen Bedingungen, unser 220013 Das Produkt soll für die Wirksamkeitsvalidierung ausgewählt werden.：

NEIN.	1	2	3	4	5	6	7	8
MB	220013(10 mg/ml)				220015(10 mg/ml)
Inhalt	0.003mg	0.005mg	0.007mg	0.01mg	0.003mg	0.005mg	0.007mg	0.01mg

Ergebnis wie folgt：

Es ist zu beobachten, dass die Leistungsergebnisse von 220013 Und 22015 sind nicht zu unterscheiden.

Die oben genannten Magnetperlen 160011, 160013, 220013, Und 220015 Alle können durch Systemoptimierung optimale PCR-Ergebnisse erzielen. Sie eignen sich für den Einsatz in POCT-Schnelltests, Nachweis pathogener Mikroorganismen, automatisierte Extraktion, und ähnliche Szenarien.

Anbieter

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.wurde gegründet in 2016 Das ist ein professioneller Hersteller von biomagnetischen Materialien und Nukleinsäure-Extraktionsreagenzien.

Wir verfügen über umfangreiche Erfahrung in der Extraktion und Reinigung von Nukleinsäuren, Proteinreinigung, Zelltrennung, Chemilumineszenz, und anderen technischen Bereichen.

Unsere Produkte werden in vielen Bereichen weit verbreitet eingesetzt, wie zum Beispiel medizinische Tests, Gentests, universitäre Forschung, genetische Zucht, und so weiter. Wir liefern nicht nur Produkte, sondern können auch OEM übernehmen, ODM, und andere Bedürfnisse. Wenn Sie einen entsprechenden Bedarf haben, Nehmen Sie gerne Kontakt zu uns auf .