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PCR에 대한 자기 비드의 억제 효과를 어떻게 완화할 수 있습니까??
발전과 함께
정밀 의학 및 NGS 시퀀싱 비용 절감,자기 비드 기반 핵산 추출은 분자 진단 실험실에서 표준 관행이 되었습니다.. 더 높은 회수율을 달성하고 불완전한 용출로 인한 오류를 방지하기 위해, 점점 더 많은 연구자들이 증폭을 위해 핵산을 직접 캡처하는 자기 비드를 PCR 시스템에 추가하는 것을 선택하고 있습니다..
하지만
이 동안 “마그네틱 비드를 이용한 PCR” 접근 방식은 워크플로를 간소화합니다., 이는 많은 실무자들에게 교활한 좌절감을 안겨주었습니다.: PCR 증폭 실패, 상승된 Ct 값, 또는 증폭 곡선이 없는 경우도 있습니다.. 이러한 문제의 원인은 종종 자기 비드 자체입니다., PCR 시스템을 억제하는.
많은 사람들은 자기 비드가 증폭을 방해해서는 안 되는 단순한 불활성 고체 캐리어일 뿐이라고 직관적으로 가정합니다.. 그러나 실험 데이터는 광범위한 비드 유도 PCR 억제를 일관되게 보여줍니다..
당사의 Magnetic Bead 제품을 활용한 예비 실험 160011, 160013, 그리고 220015 비드인PCR(bead-in-PCR)에 대한 공개:
| 아니요. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| MB | 160011(50mg/ml) | 160013(50mg/ml) | 220015(50mg/ml) | ||||||
| 콘텐츠 | 0.5mg | 0.75mg | 1mg | 0.5mg | 0.75mg | 1mg | 0.5mg | 0.75mg | 1mg |
결과는 다음과 같습니다：
전기영동 결과를 바탕으로, 자기 비드 농도에서의 증폭 효율 0.5 mg: 220015 < 160013 < 160011; 알려진 자기 비드 입자 크기를 고려하면: 220015 < 160013 < 160011, 그리고 그들의 비표면적을 고려하여: 160011 < 160013 < 220015, 따라서 동일한 조건에서 비드당 결합 사이트는 다음과 같습니다.: 160011<160013<220015; 이는 자기 비드 농도가 증가함에 따라 PCR 억제가 더욱 두드러지는 이유를 설명할 수 있습니다..
따라서
이 PCR 시스템에는 특별한 구성요소인 인핸서(enhancer)가 필요합니다.. 일반적인 강화제에는 베타인이 포함됩니다., 트레할로스, DMSO (디메틸설폭사이드), 글리세린, 및 BSA (소 혈청 알부민). 이들 중, BSA는 희생 기질로 작용합니다., 억제제 간섭으로부터 폴리머라제를 보호하기 위해 자성 비드에 우선적으로 결합.
그래서 우리는 자성비드 농도를 감소시키는지 여부를 판단하고자 했습니다. (0.025 mg~0.075mg) 보충 100 PCR 강화제인 μg/ml BSA는 더 유리한 결과를 얻을 수 있습니다..
| 아니요. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| MB | 160011(50mg/ml) | 160013(50mg/ml) | 220015(10mg/ml) | ||||||
| 콘텐츠 | 0.025mg | 0.05mg | 0.075mg | 0.025mg | 0.05mg | 0.075mg | 0.005mg | 0.01mg | 0.015mg |
결과는 다음과 같습니다：
에서 다음을 관찰할 수 있다. 0.025 mg, 160011 그리고 160013 대조군과 차이가 없음을 나타냄, 반면에 0.05 mg 및 0.075 ~의, 그 효능은 점차 감소한다.. 220015, 이전 분석과 일치, 뛰어난 현탁 특성을 나타낼 뿐만 아니라 결합 부위가 많아 비표면적이 넓습니다.. 이는 Taq 중합효소의 효과적인 흡착을 가능하게 합니다., 증폭을 억제하여. 자기비드 농도가 감소했을 때 0.005 mg, 밴드 강도는 대조군의 절반에 불과했습니다..
이러한 조건에서 기본 최적화에 따라, 우리의 220013 유효성 검증을 위해 제품을 선택해야 합니다.：
| 아니요. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| MB | 220013(10mg/ml) | 220015(10mg/ml) | ||||||
| 콘텐츠 | 0.003mg | 0.005mg | 0.007mg | 0.01mg | 0.003mg | 0.005mg | 0.007mg | 0.01mg |
결과는 다음과 같습니다：
의 실적 성과를 확인할 수 있다. 220013 그리고 22015 구별할 수 없다.
앞서 언급한 자기구슬 160011, 160013, 220013, 그리고 220015 시스템 최적화를 통해 PCR에서 최적의 결과를 얻을 수 있습니다.. POCT 신속 테스트에 적용하기에 적합합니다., 병원성 미생물 검출, 자동 추출, 그리고 유사한 시나리오.
공급자
상하이 링쥔 생명공학 유한회사, 주식회사에 설립되었습니다 2016 생체자성재료 및 핵산추출시약 전문제조업체입니다..
핵산 추출 및 정제 분야에서 풍부한 경험을 보유하고 있습니다., 단백질 정제, 세포 분리, 화학발광, 및 기타 기술 분야.
우리의 제품은 많은 분야에서 널리 사용됩니다., 의료 테스트와 같은, 유전자 검사, 대학 연구, 유전자 육종, 등. 우리는 제품을 제공할 뿐만 아니라 OEM도 수행할 수 있습니다., ODM, 그리고 다른 필요. 관련된 필요사항이 있는 경우, 저희에게 연락하게 자유롭게 느끼십시오 .
