Profesjonell produsent av biomagnetiske perler
Hvordan kan den hemmende effekten av magnetiske perler på PCR dempes?
Med fremme av
presisjonsmedisin og reduksjonen i NGS-sekvenseringskostnader,magnetisk perlebasert nukleinsyreekstraksjon har blitt standard praksis i molekylære diagnostiske laboratorier. For å oppnå høyere utvinningsgrad og unngå feil forårsaket av ufullstendig eluering, et økende antall forskere velger å legge til magnetiske perler som fanger nukleinsyrer direkte inn i PCR-systemet for amplifikasjon.
Imidlertid
Mens dette “PCR med magnetiske perler” tilnærming effektiviserer arbeidsflyter, det har introdusert lumske frustrasjoner for mange utøvere: PCR-amplifikasjonsfeil, forhøyede Ct-verdier, eller til og med fraværende amplifikasjonskurver. Den skyldige bak disse problemene er ofte de magnetiske perlene i seg selv, som hemmer PCR-systemet.
Mange antar intuitivt at magnetiske perler bare er inerte solide bærere som ikke skal forstyrre forsterkning. Likevel demonstrerer eksperimentelle data konsekvent utbredt perle-indusert PCR-hemming.
Foreløpige eksperimenter med våre magnetiske perleprodukter 160011, 160013, og 220015 for perle-i-PCR avslørt:
| Ingen. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| MB | 160011（50mg/ml） | 160013（50mg/ml） | 220015（50mg/ml） | ||||||
| Innhold | 0.5mg | 0.75mg | 1mg | 0.5mg | 0.75mg | 1mg | 0.5mg | 0.75mg | 1mg |
Resultat som følger：
Basert på elektroforeseresultater, amplifikasjonseffektivitet ved en magnetisk perlekonsentrasjon på 0.5 mg: 220015 < 160013 < 160011; Gitt de kjente magnetiske perlepartikkelstørrelsene: 220015 < 160013 < 160011, og vurderer deres spesifikke overflatearealer: 160011 < 160013 < 220015, bindingssetene pr. kule under identiske betingelser er således: 160011＜160013＜220015; Dette kan forklare hvorfor PCR-hemming blir mer uttalt når konsentrasjonen av magnetiske perler øker.
Følgelig
En spesiell komponent – en forsterker – kreves i dette PCR-systemet. Vanlige forsterkere inkluderer betain, trehalose, DMSO (dimetylsulfoksid), glyserol, og BSA (bovine serum albumin). Blant disse, BSA fungerer som et offersubstrat, fortrinnsvis binding til magnetiske kuler for å beskytte polymerasen mot inhibitorinterferens.
Så vi prøvde å finne ut om å redusere magnetisk perlekonsentrasjon (0.025 mg–0,075 mg) supplert med 100 μg/ml BSA som PCR-forsterker ville gi gunstigere resultater.
| Ingen. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| MB | 160011（50mg/ml） | 160013（50mg/ml） | 220015（10mg/ml） | ||||||
| Innhold | 0.025mg | 0.05mg | 0.075mg | 0.025mg | 0.05mg | 0.075mg | 0.005mg | 0.01mg | 0.015mg |
Resultat som følger：
Det kan observeres at kl 0.025 mg, 160011 og 160013 viser ingen forskjell fra kontrollen, mens kl 0.05 mg og 0.075 av, deres effektivitet avtar gradvis. 220015, samsvarer med tidligere analyser, ikke bare viser utmerkede suspensjonsegenskaper, men har også et stort spesifikt overflateareal med mange bindingssteder. Dette muliggjør effektiv adsorpsjon av Taq-polymerase, og dermed hemme amplifikasjon. Når den magnetiske perlekonsentrasjonen ble redusert til 0.005 mg, båndintensiteten nådde bare halvparten av kontrollen.
Etter den grunnleggende optimaliseringen under disse forholdene, vår 220013 produktet skal velges for effektvalidering.：
| Ingen. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| MB | 220013（10mg/ml） | 220015（10mg/ml） | ||||||
| Innhold | 0.003mg | 0.005mg | 0.007mg | 0.01mg | 0.003mg | 0.005mg | 0.007mg | 0.01mg |
Resultat som følger：
Det kan observeres at ytelsesresultatene av 220013 og 22015 er umulig å skille.
De nevnte magnetiske perlene 160011, 160013, 220013, og 220015 kan alle oppnå optimale resultater i PCR gjennom systemoptimalisering. De er egnet for bruk i POCT-hurtigtesting, påvisning av patogene mikroorganismer, automatisert utvinning, og lignende scenarier.
Leverandør
Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ble etablert i 2016 som er en profesjonell produsent av biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraksjonsreagenser.
Vi har rik erfaring innen utvinning og rensing av nukleinsyre, proteinrensing, celleseparasjon, kjemiluminescens, og andre tekniske felt.
Våre produkter er mye brukt på mange felt, som medisinsk testing, genetisk testing, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke bare produkter, men kan også påta oss OEM, ODM, og andre behov. Hvis du har et relatert behov, ta gjerne kontakt med oss .
