المهنية في صناعة الخرز المغناطيسي الحيوي
كيف يمكن التخفيف من التأثير المثبط للخرزات المغناطيسية على تفاعل البوليميراز المتسلسل?
ومع تقدم
الطب الدقيق وخفض تكاليف تسلسل NGS,أصبح استخراج الحمض النووي القائم على الخرز المغناطيسي ممارسة قياسية في مختبرات التشخيص الجزيئي. لتحقيق معدلات استرداد أعلى وتجنب الأخطاء الناجمة عن الشطف غير الكامل, يختار عدد متزايد من الباحثين إضافة حبات مغناطيسية تلتقط الأحماض النووية مباشرة إلى نظام PCR للتضخيم.
لكن
بينما هذا “PCR مع الخرز المغناطيسي” النهج يبسط سير العمل, لقد تسبب في إحباطات خبيثة للعديد من الممارسين: فشل تضخيم PCR, ارتفاع قيم Ct, أو حتى منحنيات التضخيم غائبة. غالبًا ما يكون السبب وراء هذه المشكلات هو الخرز المغناطيسي نفسه, التي تمنع نظام PCR.
يفترض الكثير بشكل بديهي أن الخرزات المغناطيسية هي مجرد ناقلات صلبة خاملة لا ينبغي أن تتداخل مع التضخيم. ومع ذلك، تظهر البيانات التجريبية باستمرار تثبيط PCR الناجم عن الخرز على نطاق واسع.
التجارب الأولية التي تستخدم منتجاتنا من الخرز المغناطيسي 160011, 160013, و 220015 لكشف حبة في PCR:
| لا. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| ميغابايت | 160011(50مجم/مل) | 160013(50مجم/مل) | 220015(50مجم/مل) | ||||||
| محتوى | 0.5ملغ | 0.75ملغ | 1ملغ | 0.5ملغ | 0.75ملغ | 1ملغ | 0.5ملغ | 0.75ملغ | 1ملغ |
النتيجة على النحو التالي：
بناء على نتائج الكهربائي, كفاءة التضخيم عند تركيز حبة مغناطيسية 0.5 ملغ: 220015 < 160013 < 160011; نظرا لأحجام جسيمات الخرزة المغناطيسية المعروفة: 220015 < 160013 < 160011, والنظر في مساحات سطحها المحددة: 160011 < 160013 < 220015, مواقع الربط لكل حبة في ظل ظروف مماثلة هي بالتالي: 160011220015; قد يفسر هذا لماذا يصبح تثبيط PCR أكثر وضوحًا مع زيادة تركيز الخرزة المغناطيسية.
بالتالي
مطلوب مكون خاص - محسن - في نظام PCR هذا. وتشمل المعززات الشائعة البيتين, تريهالوز, [دمس] (ثنائي ميثيل سلفوكسيد), الجلسرين, وجيش صرب البوسنة (ألبومين المصل البقري). من بين هؤلاء, BSA بمثابة الركيزة المضحية, يرتبط بشكل تفضيلي بالخرز المغناطيسي لحماية البوليميراز من تداخل المثبط.
لذلك سعينا لتحديد ما إذا كان تقليل تركيز الخرزة المغناطيسية (0.025 مجم – 0.075 مجم) تستكمل مع 100 ميكروغرام / مل BSA كمحسن PCR من شأنه أن يؤدي إلى نتائج أكثر إيجابية.
| لا. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| ميغابايت | 160011(50مجم/مل) | 160013(50مجم/مل) | 220015(10مجم/مل) | ||||||
| محتوى | 0.025ملغ | 0.05ملغ | 0.075ملغ | 0.025ملغ | 0.05ملغ | 0.075ملغ | 0.005ملغ | 0.01ملغ | 0.015ملغ |
النتيجة على النحو التالي：
ويمكن ملاحظة ذلك عند 0.025 ملغ, 160011 و 160013 لا تظهر أي اختلاف عن السيطرة, بينما في 0.05 ملغ و 0.075 ل, فعاليتها تتضاءل تدريجيا. 220015, يتفق مع التحليلات السابقة, لا يعرض خصائص تعليق ممتازة فحسب، بل يمتلك أيضًا مساحة سطحية كبيرة محددة مع العديد من مواقع الربط. وهذا يتيح الامتزاز الفعال لبوليميراز طق, وبالتالي منع التضخيم. عندما تم تقليل تركيز الخرزة المغناطيسية إلى 0.005 ملغ, وصلت شدة النطاق إلى نصف شدة التحكم فقط.
بعد التحسين التأسيسي في ظل هذه الظروف, ملكنا 220013 يجب اختيار المنتج للتحقق من فعاليته.：
| لا. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| ميغابايت | 220013(10مجم/مل) | 220015(10مجم/مل) | ||||||
| محتوى | 0.003ملغ | 0.005ملغ | 0.007ملغ | 0.01ملغ | 0.003ملغ | 0.005ملغ | 0.007ملغ | 0.01ملغ |
النتيجة على النحو التالي：
ويمكن ملاحظة أن نتائج الأداء 220013 و 22015 لا يمكن تمييزها.
الخرز المغناطيسي المذكور آنفاً 160011, 160013, 220013, و 220015 يمكن للجميع تحقيق النتائج المثلى في PCR من خلال تحسين النظام. وهي مناسبة للتطبيق في الاختبارات السريعة في نقطة الرعاية, الكشف عن الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض, الاستخراج الآلي, وسيناريوهات مماثلة.
مزود
شركة شنغهاي لينغجون للتكنولوجيا الحيوية, المحدودة.تأسست في 2016 وهي شركة متخصصة في تصنيع المواد المغناطيسية الحيوية وكواشف استخلاص الحمض النووي.
لدينا خبرة غنية في استخراج وتنقية الحمض النووي, تنقية البروتين, فصل الخلايا, التألق الكيميائي, وغيرها من المجالات التقنية.
منتجاتنا تستخدم على نطاق واسع في العديد من المجالات, مثل الفحوصات الطبية, الاختبارات الجينية, البحوث الجامعية, التكاثر الوراثي, وهكذا. نحن لا نقدم المنتجات فحسب، بل يمكننا أيضًا إجراء تصنيع المعدات الأصلية, أوديإم, وغيرها من الاحتياجات. إذا كان لديك حاجة ذات صلة, لا تتردد في الاتصال بنا .
