Panduan untuk pengekstrakan RNA yang cekap: Dari prinsip kepada amalan, memastikan pengasingan RNA berkualiti tinggi

Pengenalan kepada Pengekstrakan RNA

Pengekstrakan RNA adalah langkah asas dalam biologi molekul dan penyelidikan ekspresi gen. Tujuannya adalah untuk mengasingkan secara utuh, RNA tidak terdegradasi (asid ribonukleik) daripada sampel sel atau tisu. RNA mengambil bahagian dalam pelbagai proses biologi, seperti transkripsi maklumat genetik dan sintesis protein dalam sel. Oleh itu, mendapatkan RNA berkualiti tinggi adalah penting untuk analisis biologi molekul seterusnya, seperti RT-PCR, Blot Utara, Penjujukan RNA, dll.

Prinsip Pengekstrakan RNA

Denaturan memecah sel atau tisu, dan kemudian RNA diekstrak oleh pelarut organik seperti kloroform dan kemudian dimendakan, dibasuh, dikeringkan, dan akhirnya terlarut.

Namun begitu, kerana enzim RNA ada di mana-mana dan boleh merendahkan RNA pada bila-bila masa, terdapat banyak tempat yang perlu diberi perhatian dalam eksperimen. Sebarang kecuaian akan gagal.

Elakkan lencongan dalam pengekstrakan RNA

Bagaimana untuk memilih reagen pengekstrakan RNA yang paling sesuai untuk bahan yang berbeza.

Banyak kaedah pengasingan RNA sedia ada mungkin menyukarkan untuk dipilih. Pada masa ini, kaedah yang paling mudah dan selamat ialah pemisahan lajur, seperti RNApure, yang popular kerana operasinya yang mudah, masa yang singkat dan kesucian yang tinggi. RNApure tidak memerlukan DNase untuk mencerna DNA, yang menjimatkan masa dan mengelakkan degradasi RNA, seterusnya meningkatkan hasil; berbanding dengan pemisahan bukan lajur (seperti TRIzol), ia menghilangkan protein dan kekotoran lain dengan bersih, meningkatkan kesucian, dan sangat sesuai untuk sel, tisu, dan tumbuhan am. Pengekstrakan RNA tumbuhan lebih sukar untuk dipilih. Pengekstrakan RNA tumbuhan dipengaruhi oleh kandungan fenol, polisakarida, kekotoran protein, dan metabolit sekunder. Secara amnya, ketulenan pengekstrakan TRIzol tidak tinggi, dan banyak tumbuhan tidak boleh diekstrak dengan TRIzol.

Pada masa ini, anda boleh memilih kit pengekstrakan total RNA tumbuhan polisakarida dan polifenol (daffodil, lada, lobak merah, jagung, bunga lili, gandum, buah tomato, kembang kol, biji sesawi, dll.) dan kit pengekstrakan RNA tumbuhan universal (sesuai untuk kebanyakan pengekstrakan tumbuhan, termasuk pelbagai ubat herba Cina, benih tanaman, buah epal, buah anggur, strawberi, pisang, memanjangkan, litchi, tumbuhan rumput, pokok pain, untuk pokok, pokok birch, kon pain ungu, coleus, poinsettia, oleander, ara, ungu, mawar, dahlia, kemuliaan pagi, dll.); Perlu disebutkan bahawa pengekstrakan RNA daripada darah (termasuk serum, plasma, cecair serebrospinal, pelbagai swab atau sampel lain dengan kandungan cecair yang tinggi) menggunakan TRIzol dan kaedah lisis sel darah merah tidak berkesan kerana penimbal lisis sel darah merah tidak mengandungi perencat RNase, dan RNA mudah terdegradasi dalam proses ini. Adalah disyorkan untuk menggunakan TRIpure LS (RP1101) atau kit pengekstrakan RNA jumlah darah (RP4001). Kaedah ini sesuai untuk pengekstrakan RNA dalam eksperimen cip profil ekspresi dan telah menjadi kaedah yang disyorkan secara nasional.

Bagaimana untuk menyimpan RNA yang diekstrak?

Jika ia hanya untuk simpanan jangka pendek, RNA yang digantung semula hendaklah diletakkan pada -20°C; jika ia untuk simpanan jangka panjang, ia hendaklah diletakkan pada -80°C. Apabila menyimpan RNA, sejumlah kecil perencat RNase (RP5601) boleh ditambah untuk mengelakkan degradasi RNA, dan RNA boleh digunakan terus untuk eksperimen hiliran. Jika RNA hendak disimpan lama, RNAlong boleh ditambah. Kami mengesyorkan agar larutan RNA dibahagikan kepada beberapa tiub. Ini akan mengelakkan pembekuan dan pencairan berulang untuk merosakkan RNA dan mengelakkan pencemaran RNase secara tidak sengaja.

Pembekal

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd. ditubuhkan pada 2016 yang merupakan pengilang profesional bahan biomagnet dan reagen pengekstrakan asid nukleik.

Kami mempunyai pengalaman yang kaya dalam pengekstrakan dan penulenan asid nukleik, penulenan protein, pemisahan sel, chemiluminescence dan bidang teknikal lain.

Produk kami digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang, seperti ujian perubatan, ujian genetik, penyelidikan universiti, pembiakan genetik, dan seterusnya. Kami bukan sahaja menyediakan produk tetapi juga boleh menjalankan OEM, ODM, dan keperluan lain.Jika anda mempunyai keperluan yang berkaitan, sila hubungi kami di sales01@lingjunbio.com.