Guide pour une extraction efficace de l’ARN: Des principes à la pratique, assurer un isolement d’ARN de haute qualité

Présentation de Extraction d'ARN

L’extraction d’ARN est une étape fondamentale dans la recherche en biologie moléculaire et en expression génétique. Son but est d'isoler intact, ARN non dégradé (acide ribonucléique) à partir d'échantillons de cellules ou de tissus. L'ARN participe à divers processus biologiques, comme la transcription de l'information génétique et la synthèse des protéines dans les cellules. Donc, l’obtention d’un ARN de haute qualité est cruciale pour une analyse biologique moléculaire ultérieure, comme la RT-PCR, Tache du Nord, Séquençage de l'ARN, etc..

Principe de l'extraction de l'ARN

Les dénaturants brisent les cellules ou les tissus, puis l'ARN est extrait par des solvants organiques tels que le chloroforme puis précipité, lavé, séché, et finalement dissous.

Cependant, puisque les enzymes ARN sont partout et peuvent dégrader l’ARN à tout moment, il y a de nombreux endroits auxquels il faut prêter attention dans l'expérience. Toute négligence échouera.

Évitez les détours dans l’extraction d’ARN

Comment choisir le réactif d'extraction d'ARN le plus adapté à différents matériaux.

Les nombreuses méthodes d’isolement d’ARN existantes peuvent rendre le choix difficile. À l'heure actuelle, la méthode la plus simple et la plus sûre est la séparation des colonnes, comme RNApure, qui est populaire en raison de sa simplicité d'utilisation, temps court et grande pureté. RNApure n'a pas besoin de DNase pour digérer l'ADN, ce qui permet de gagner du temps et d'éviter la dégradation de l'ARN, augmentant ainsi le rendement; par rapport à la séparation sans colonne (comme TRIzol), il élimine proprement les protéines et autres impuretés, améliore la pureté, et convient très bien aux cellules, tissus, et installations générales. L’extraction de l’ARN végétal est plus difficile à choisir. L'extraction de l'ARN végétal est affectée par la teneur en phénol, polysaccharides, impuretés protéiques, et métabolites secondaires. En général, la pureté de l'extraction du TRIzol n'est pas élevée, et de nombreuses plantes ne peuvent pas être extraites avec TRIzol.

A cette époque, vous pouvez choisir le kit d'extraction d'ARN total de plantes polysaccharides et polyphénols (jonquilles, poivrons, carottes, maïs, lys, blé, tomates, chou-fleur, colza, etc.) et kit universel d'extraction d'ARN végétal (convient à la plupart des extractions de plantes, y compris diverses plantes médicinales chinoises, planter des graines, pommes, raisins, fraises, bananes, rallongement, litchi, plantes à gazon, pins, pour les arbres, bouleaux, pommes de pin violettes, coléus, poinsettia, laurier-rose, figue, violet, rose, dahlia, gloire du matin, etc.); Il convient de mentionner que l'extraction de l'ARN du sang (y compris le sérum, plasma, liquide céphalo-rachidien, divers écouvillons ou autres échantillons à haute teneur en liquide) l'utilisation du TRIzol et des méthodes de lyse des globules rouges ne sont pas efficaces car le tampon de lyse des globules rouges ne contient pas d'inhibiteurs de la RNase, et l'ARN est facilement dégradé dans ce processus. Il est recommandé d'utiliser TRIpure LS (RP1101) ou un kit d'extraction d'ARN total sanguin (RP4001). Cette méthode convient à l’extraction d’ARN dans les expériences sur puces à profil d’expression et est devenue une méthode recommandée au niveau national..

Comment stocker l'ARN extrait?

Si c'est uniquement pour un stockage à court terme, l'ARN remis en suspension doit être placé à -20°C; si c'est pour un stockage à long terme, il doit être placé à -80°C. Lors du stockage de l'ARN, une petite quantité d'inhibiteur de RNase (RP5601) peut être ajouté pour éviter la dégradation de l’ARN, et l'ARN peut être directement utilisé pour des expériences en aval. Si l’ARN doit être stocké pendant une longue période, RNAlong peut être ajouté. Nous recommandons de diviser la solution d'ARN en plusieurs tubes. Cela évitera les congélations et décongélations répétées susceptibles d’endommager l’ARN et d’éviter toute contamination accidentelle par la RNase..

Fournisseur

Société de biotechnologie Shanghai Lingjun., Ltée. a été établi en 2016 qui est un fabricant professionnel de matériaux biomagnétiques et de réactifs d'extraction d'acide nucléique.

Nous avons une riche expérience dans l'extraction et la purification des acides nucléiques, purification des protéines, séparation cellulaire, chimiluminescence et autres domaines techniques.

Nos produits sont largement utilisés dans de nombreux domaines, comme les tests médicaux, tests génétiques, recherche universitaire, sélection génétique, et ainsi de suite. Nous fournissons non seulement des produits, mais pouvons également entreprendre des OEM, ODM, Et d'autres besoins. Si vous avez un besoin connexe, n'hésitez pas à nous contacter au sales01@lingjunbio.com.