திறமையான RNA பிரித்தெடுப்பதற்கான வழிகாட்டி: கொள்கைகள் முதல் நடைமுறை வரை, உயர்தர RNA தனிமைப்படுத்தலை உறுதி செய்கிறது

அறிமுகம் ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல்

ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் என்பது மூலக்கூறு உயிரியல் மற்றும் மரபணு வெளிப்பாடு ஆராய்ச்சியில் ஒரு அடிப்படை படியாகும். அதன் நோக்கம் அப்படியே தனிமைப்படுத்துவதாகும், சிதைக்கப்படாத ஆர்.என்.ஏ (ரிபோநியூக்ளிக் அமிலம்) செல் அல்லது திசு மாதிரிகளிலிருந்து. ஆர்என்ஏ பல்வேறு உயிரியல் செயல்முறைகளில் பங்கேற்கிறது, மரபணு தகவல்களின் படியெடுத்தல் மற்றும் உயிரணுக்களில் புரத தொகுப்பு போன்றவை. எனவே, உயர்தர RNA ஐப் பெறுவது அடுத்தடுத்த மூலக்கூறு உயிரியல் பகுப்பாய்விற்கு முக்கியமானது, RT-PCR போன்றவை, வடக்கு பிளாட், ஆர்என்ஏ வரிசைமுறை, முதலியன.

ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் கொள்கை

Denaturants செல்கள் அல்லது திசுக்களை உடைக்கிறது, பின்னர் ஆர்.என்.ஏ குளோரோஃபார்ம் போன்ற கரிம கரைப்பான்களால் பிரித்தெடுக்கப்பட்டு பின்னர் வீழ்படிவு செய்யப்படுகிறது, கழுவப்பட்டது, உலர்ந்த, இறுதியாக கலைக்கப்பட்டது.

எனினும், ஆர்என்ஏ என்சைம்கள் எல்லா இடங்களிலும் இருப்பதால் எந்த நேரத்திலும் ஆர்என்ஏவை சிதைக்கலாம், சோதனையில் கவனம் செலுத்த பல இடங்கள் உள்ளன. எந்த அலட்சியமும் தோல்வியடையும்.

ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கும் போது மாற்றுப்பாதைகளைத் தவிர்க்கவும்

வெவ்வேறு பொருட்களுக்கு மிகவும் பொருத்தமான ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கும் மறுஉருவாக்கத்தை எவ்வாறு தேர்வு செய்வது.

தற்போதுள்ள ஏராளமான ஆர்என்ஏ தனிமைப்படுத்தும் முறைகள் தேர்வு செய்வதை கடினமாக்கலாம். தற்போது, எளிய மற்றும் பாதுகாப்பான முறை நெடுவரிசை பிரிப்பு ஆகும், RNApure போன்றவை, எளிமையான செயல்பாட்டின் காரணமாக பிரபலமானது, குறுகிய நேரம் மற்றும் அதிக தூய்மை. டிஎன்ஏவை ஜீரணிக்க RNApure க்கு DNase தேவையில்லை, இது நேரத்தை மிச்சப்படுத்துகிறது மற்றும் ஆர்என்ஏ சிதைவைத் தவிர்க்கிறது, அதன் மூலம் விளைச்சல் அதிகரிக்கும்; நெடுவரிசை அல்லாத பிரிப்புடன் ஒப்பிடப்படுகிறது (TRIzol போன்றவை), இது புரதங்கள் மற்றும் பிற அசுத்தங்களை சுத்தமாக நீக்குகிறது, தூய்மையை மேம்படுத்துகிறது, மற்றும் செல்களுக்கு மிகவும் ஏற்றது, திசுக்கள், மற்றும் பொது தாவரங்கள். தாவர RNA பிரித்தெடுத்தல் தேர்வு செய்வது மிகவும் கடினம். தாவர ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் பீனாலின் உள்ளடக்கத்தால் பாதிக்கப்படுகிறது, பாலிசாக்கரைடுகள், புரத அசுத்தங்கள், மற்றும் இரண்டாம் நிலை வளர்சிதை மாற்றங்கள். பொதுவாக, TRIzol பிரித்தெடுத்தலின் தூய்மை அதிகமாக இல்லை, மற்றும் பல தாவரங்களை TRIzol மூலம் பிரித்தெடுக்க முடியாது.

இந்த நேரத்தில், நீங்கள் பாலிசாக்கரைடு மற்றும் பாலிபினால் ஆலை மொத்த ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கும் கருவியை தேர்வு செய்யலாம் (டாஃபோடில்ஸ், மிளகுத்தூள், கேரட், சோளம், அல்லிகள், கோதுமை, தக்காளி, காலிஃபிளவர், பலாப்பழம், முதலியன) மற்றும் உலகளாவிய ஆலை RNA பிரித்தெடுத்தல் கிட் (பெரும்பாலான தாவர பிரித்தெடுக்க ஏற்றது, பல்வேறு சீன மூலிகை மருந்துகள் உட்பட, ஆலை விதைகள், ஆப்பிள்கள், திராட்சை, ஸ்ட்ராபெர்ரிகள், வாழைப்பழங்கள், நீளம், லிச்சி, புல்வெளி தாவரங்கள், பைன் மரங்கள், மரங்களுக்கு, பிர்ச் மரங்கள், ஊதா பைன் கூம்புகள், கோலியஸ், பாயின்செட்டியா, ஒலியாண்டர், அத்தி, ஊதா, உயர்ந்தது, டேலியா, காலை மகிமை, முதலியன); ரத்தத்தில் இருந்து ஆர்.என்.ஏ பிரித்தெடுக்கப்படுவது குறிப்பிடத் தக்கது (சீரம் உட்பட, பிளாஸ்மா, செரிப்ரோஸ்பைனல் திரவம், பல்வேறு ஸ்வாப்கள் அல்லது அதிக திரவ உள்ளடக்கம் கொண்ட மற்ற மாதிரிகள்) TRIzol மற்றும் இரத்த சிவப்பணு சிதைவு முறைகளைப் பயன்படுத்துவது பயனுள்ளதாக இல்லை, ஏனெனில் சிவப்பு இரத்த அணு சிதைவு தாங்கலில் RNase தடுப்பான்கள் இல்லை., மேலும் இந்த செயல்பாட்டில் RNA எளிதில் சிதைக்கப்படுகிறது. TRIpure LS ஐப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது (RP1101) அல்லது இரத்தத்தின் மொத்த RNA பிரித்தெடுக்கும் கருவி (RP4001). இந்த முறை எக்ஸ்பிரஷன் சுயவிவர சிப் சோதனைகளில் ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்கு ஏற்றது மற்றும் தேசிய அளவில் பரிந்துரைக்கப்பட்ட முறையாக மாறியுள்ளது.

பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏவை எவ்வாறு சேமிப்பது?

இது குறுகிய கால சேமிப்பிற்காக மட்டுமே இருந்தால், மீண்டும் இணைக்கப்பட்ட RNA -20°C இல் வைக்கப்பட வேண்டும்; நீண்ட கால சேமிப்பிற்காக இருந்தால், இது -80 ° C இல் வைக்கப்பட வேண்டும். ஆர்என்ஏவை சேமிக்கும் போது, ஒரு சிறிய அளவு RNase தடுப்பான் (RP5601) ஆர்என்ஏ சிதைவைத் தவிர்க்க சேர்க்கலாம், மற்றும் ஆர்என்ஏ நேரடியாக கீழ்நிலை பரிசோதனைகளுக்கு பயன்படுத்தப்படலாம். ஆர்.என்.ஏ.வை நீண்ட நேரம் சேமித்து வைக்க வேண்டும் என்றால், RNAlong ஐ சேர்க்கலாம். ஆர்என்ஏ கரைசலை பல குழாய்களாக பிரிக்க பரிந்துரைக்கிறோம். இது ஆர்என்ஏவை சேதப்படுத்த மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் உருகுவதை தவிர்க்கும் மற்றும் தற்செயலான RNase மாசுபடுவதை தடுக்கும்.

சப்ளையர்

ஷாங்காய் லிங்ஜுன் பயோடெக்னாலஜி கோ., லிமிடெட். இல் நிறுவப்பட்டது 2016 உயிர் காந்த பொருட்கள் மற்றும் நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் உலைகளின் தொழில்முறை உற்பத்தியாளர்.

நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் சுத்திகரிப்பு ஆகியவற்றில் எங்களுக்கு சிறந்த அனுபவம் உள்ளது, புரத சுத்திகரிப்பு, செல் பிரிப்பு, வேதியியல் மற்றும் பிற தொழில்நுட்ப துறைகள்.

எங்கள் தயாரிப்புகள் பல துறைகளில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, மருத்துவ பரிசோதனை போன்றவை, மரபணு சோதனை, பல்கலைக்கழக ஆராய்ச்சி, மரபணு இனப்பெருக்கம், மற்றும் பல. நாங்கள் தயாரிப்புகளை வழங்குவது மட்டுமல்லாமல் OEM ஐயும் மேற்கொள்ள முடியும், ODM, மற்றும் பிற தேவைகள். உங்களுக்கு தொடர்புடைய தேவை இருந்தால், தயவு செய்து எங்களை தொடர்பு கொள்ளவும் sales01@lingjunbio.com.