Guide til effektiv RNA-ekstraktion: Fra principper til praksis, sikring af RNA-isolering af høj kvalitet

Introduktion af RNA-ekstraktion

RNA-ekstraktion er et grundlæggende trin i molekylærbiologi og genekspressionsforskning. Dens formål er at isolere intakt, ikke-nedbrudt RNA (ribonukleinsyre) fra celle- eller vævsprøver. RNA deltager i en række biologiske processer, såsom transskription af genetisk information og proteinsyntese i celler. Derfor, opnåelse af RNA af høj kvalitet er afgørende for efterfølgende molekylærbiologisk analyse, såsom RT-PCR, Northern Blot, RNA-sekventering, osv.

Princip for RNA-ekstraktion

Denaturanter bryder celler eller væv, og derefter ekstraheres RNA med organiske opløsningsmidler såsom chloroform og udfældes derefter, vasket, tørret, og til sidst opløst.

Imidlertid, da RNA-enzymer er overalt og kan nedbryde RNA til enhver tid, der er mange steder at være opmærksom på i forsøget. Enhver uagtsomhed vil mislykkes.

Undgå omveje ved RNA-ekstraktion

Hvordan man vælger det bedst egnede RNA-ekstraktionsreagens til forskellige materialer.

De mange eksisterende RNA-isoleringsmetoder kan gøre det vanskeligt at vælge. På nuværende tidspunkt, den enkleste og sikreste metode er kolonneadskillelse, såsom RNApure, som er populær på grund af dens enkle betjening, kort tid og høj renhed. RNApure kræver ikke DNase for at fordøje DNA, hvilket sparer tid og undgår RNA-nedbrydning, og derved øge udbyttet; sammenlignet med ikke-søjleadskillelse (såsom TRIzol), det fjerner proteiner og andre urenheder rent, forbedrer renheden, og er meget velegnet til celler, væv, og generelle planter. Ekstraktion af plante-RNA er sværere at vælge. Plante-RNA-ekstraktion påvirkes af indholdet af phenol, polysaccharider, protein urenheder, og sekundære metabolitter. Generelt, renheden af ​​TRIzol-ekstraktion er ikke høj, og mange planter kan ikke udvindes med TRIzol.

På dette tidspunkt, du kan vælge polysaccharid og polyphenol plante total RNA ekstraktion kit (påskeliljer, peberfrugt, gulerødder, majs, liljer, hvede, tomater, blomkål, raps, osv.) og universelt plante-RNA-ekstraktionssæt (velegnet til de fleste planteudtræk, herunder forskellige kinesiske naturlægemidler, plante frø, æbler, druer, jordbær, bananer, forlængelse, litchi, græsplæne planter, fyrretræer, for træer, birketræer, lilla fyrrekogler, coleus, julestjerne, oleander, fig, violet, rose, dahlia, morgen herlighed, osv.); Det er værd at nævne, at udvindingen af ​​RNA fra blod (inklusive serum, plasma, cerebrospinalvæske, forskellige vatpinde eller andre prøver med højt væskeindhold) brug af TRIzol og lyseringsmetoder for røde blodlegemer er ikke effektive, fordi lyseringsbuffer for røde blodlegemer ikke indeholder RNase-hæmmere, og RNA nedbrydes let i denne proces. Det anbefales at bruge TRIpure LS (RP1101) eller et totalt blod-RNA-ekstraktionssæt (RP4001). Denne metode er velegnet til RNA-ekstraktion i ekspressionsprofilchipforsøg og er blevet en nationalt anbefalet metode.

Sådan opbevares ekstraheret RNA?

Hvis det kun er til korttidsopbevaring, det resuspenderede RNA skal placeres ved -20°C; hvis det er til langtidsopbevaring, den skal placeres ved -80°C. Ved opbevaring af RNA, en lille mængde RNase-hæmmer (RP5601) kan tilsættes for at undgå RNA-nedbrydning, og RNA kan anvendes direkte til nedstrøms eksperimenter. Hvis RNA skal opbevares i lang tid, RNAlong kan tilføjes. Vi anbefaler, at RNA-opløsningen deles i flere rør. Dette vil undgå gentagen frysning og optøning for at beskadige RNA'et og forhindre utilsigtet RNase-kontamination.

Leverandør

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd. blev etableret i 2016 som er en professionel producent af biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraktionsreagenser.

Vi har stor erfaring med udvinding og oprensning af nukleinsyre, proteinoprensning, celleadskillelse, kemiluminescens og andre tekniske områder.

Vores produkter er meget udbredt inden for mange områder, såsom medicinsk test, genetisk testning, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke kun produkter, men kan også påtage os OEM, ODM, og andre behov.Hvis du har et relateret behov, er du velkommen til at kontakte os på sales01@lingjunbio.com.