Hvorfor nedbrydes RNA lettere end DNA under nukleinsyreekstraktion?

Grunden til, at RNA (ribonukleinsyre) nedbrydes lettere end DNA (deoxyribonukleinsyre) under udvinding er hovedsageligt relateret til deres forskellige kemiske strukturer og ukorrekt drift under ekstraktion.

jeg. Forskelle i kemisk struktur:

1. RNA er en enkeltstrenget struktur, som er mere ustabil end den dobbeltstrengede struktur af DNA.

2. Hydroxyl ved 2′ position: Ribosen i RNA-molekyler indeholder en hydroxylgruppe (-Åh) ved 2′ position, mens deoxyribosen i DNA har et hydrogenatom i denne position. Denne ekstra hydroxylgruppe gør RNA-molekylet mere ustabilt, fordi det kan fremme spontane hydrolysereaktioner, resulterer i RNA-kædebrud.

II. Påvirkningen af ​​RNAse i ekstraktionssystemet:

1. Endogen RNAse: Det findes i celler og kan fortsætte med at nedbryde RNA selv efter cellelyse.

2. Eksogen RNAse: Det er meget til stede i miljøet, såsom luft, hud, og laboratorieartikler (handsker, reagensglas, osv.).

III. Forkert eksperimentel drift:

1. De anvendte reagenser og instrumenter er ikke blevet behandlet med DEPC (diethylpyrocarbonat) og kan ikke effektivt inaktivere RNA-enzymer.

2. Hæmmeren er ineffektiv, eller doseringen er utilstrækkelig, og aktiviteten af ​​RNA-enzymer kan ikke effektivt hæmmes.

3. Flere eksperimentelle prøver eller højere homogeniseringstemperaturer fører til øget RNA-enzymaktivitet.

4. Ændringer i pH og temperatur, især under alkaliske forhold, kan nemt få RNA-baser til at blive deamineret, resulterer i kædebrud; høje temperaturer kan også forårsage delvis eller fuldstændig nedbrydning af RNA-molekyler.

IV. Hvad skal der gøres for at reducere RNA-nedbrydning?

For at reducere RNA-nedbrydning under ekstraktion, der skal træffes en række foranstaltninger, herunder brug af RNAse-fri laboratorieforsyninger, arbejder ved lave temperaturer, ved hjælp af RNA-stabilisatorer, ved hjælp af færdige sæt, osv. Disse metoder reducerer effektivt risikoen for RNA-nedbrydning og sikrer, at der opnås RNA-prøver af høj kvalitet til downstream-analyse.

Leverandørintroduktion

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.blev etableret i 2016 som er en professionel producent af biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraktionsreagenser.

Vi har stor erfaring med udvinding og oprensning af nukleinsyre, proteinoprensning, celleadskillelse, kemiluminescens og andre tekniske områder.

Vores produkter er meget udbredt inden for mange områder, såsom medicinsk test, genetisk testning, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke kun produkter, men kan også påtage os OEM, ODM, og andre behov. Hvis du har relaterede behov, er du velkommen til at kontakte os på sales01@lingjunbio.com.