Hvorfor brytes RNA lettere ned enn DNA under nukleinsyreekstraksjon?

Grunnen til at RNA (ribonukleinsyre) nedbrytes lettere enn DNA (deoksyribonukleinsyre) i løpet av utvinning er hovedsakelig relatert til deres forskjellige kjemiske strukturer og feil drift under utvinning.

jeg. Forskjeller i kjemisk struktur:

1. RNA er en enkelttrådet struktur, som er mer ustabil enn den dobbelttrådete strukturen til DNA.

2. Hydroksyl ved 2′ posisjon: Ribosen i RNA-molekyler inneholder en hydroksylgruppe (-Åh) på 2′ posisjon, mens deoksyribosen i DNA har et hydrogenatom i denne posisjonen. Denne ekstra hydroksylgruppen gjør RNA-molekylet mer ustabilt fordi det kan fremme spontane hydrolysereaksjoner, resulterer i RNA-kjedebrudd.

II. Påvirkningen av RNAse i ekstraksjonssystemet:

1. Endogen RNAse: Det finnes i celler og kan fortsette å bryte ned RNA selv etter cellelyse.

2. Eksogen RNAse: Det er mye tilstede i miljøet, som luft, hud, og laboratorieutstyr (hansker, prøverør, osv.).

III. Feil eksperimentell drift:

1. Reagensene og instrumentene som brukes har ikke blitt behandlet med DEPC (dietylpyrokarbonat) og kan ikke effektivt inaktivere RNA-enzymer.

2. Inhibitoren er ineffektiv, eller doseringen er utilstrekkelig, og aktiviteten til RNA-enzymer kan ikke effektivt hemmes.

3. Flere eksperimentelle prøver eller høyere homogeniseringstemperaturer fører til økt RNA-enzymaktivitet.

4. Endringer i pH og temperatur, spesielt under alkaliske forhold, kan lett føre til at RNA-baser blir deaminert, resulterer i kjedebrudd; høye temperaturer kan også forårsake delvis eller fullstendig nedbrytning av RNA-molekyler.

IV. Hva bør gjøres for å redusere RNA-nedbrytning?

For å redusere RNA-nedbrytning under ekstraksjon, en rekke tiltak må iverksettes, inkludert bruk av RNAse-frie laboratorieutstyr, opererer ved lave temperaturer, ved bruk av RNA-stabilisatorer, ved hjelp av ferdige sett, osv. Disse metodene reduserer effektivt risikoen for RNA-nedbrytning og sikrer at RNA-prøver av høy kvalitet oppnås for nedstrømsanalyse.

Leverandørintroduksjon

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ble etablert i 2016 som er en profesjonell produsent av biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraksjonsreagenser.

Vi har rik erfaring innen utvinning og rensing av nukleinsyre, proteinrensing, celleseparasjon, kjemiluminescens og andre tekniske felt.

Våre produkter er mye brukt på mange felt, som medisinsk testing, genetisk testing, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke bare produkter, men kan også påta oss OEM, ODM, og andre behov. Hvis du har relaterte behov, ta gjerne kontakt med oss ​​på sales01@lingjunbio.com.