Perché l'RNA si degrada più facilmente del DNA durante l'estrazione dell'acido nucleico?

Il motivo per cui l'RNA (acido ribonucleico) si degrada più facilmente del DNA (acido desossiribonucleico) durante estrazione è principalmente legato alle loro diverse strutture chimiche e al funzionamento improprio durante l'estrazione.

IO. Differenze nella struttura chimica:

1. L'RNA è una struttura a filamento singolo, che è più instabile della struttura a doppio filamento del DNA.

2. Idrossile al 2′ posizione: Il ribosio nelle molecole di RNA contiene un gruppo ossidrile (-OH) alle 2′ posizione, mentre il desossiribosio nel DNA ha un atomo di idrogeno in questa posizione. Questo gruppo ossidrilico extra rende la molecola di RNA più instabile perché può promuovere reazioni di idrolisi spontanee, con conseguente rottura della catena dell’RNA.

II. L'influenza della RNAsi nel sistema di estrazione:

1. RNAsi endogena: Esiste nelle cellule e può continuare a degradare l'RNA anche dopo la lisi cellulare.

2. RNAsi esogena: È ampiamente presente nell'ambiente, come l'aria, pelle, e forniture di laboratorio (guanti, provette, ecc.).

III. Operazione sperimentale impropria:

1. I reagenti e gli strumenti utilizzati non sono stati trattati con DEPC (dietilpirocarbonato) e non possono inattivare efficacemente gli enzimi RNA.

2. L'inibitore è inefficace, oppure il dosaggio è insufficiente, e l'attività degli enzimi RNA non può essere inibita efficacemente.

3. Un maggior numero di campioni sperimentali o temperature di omogeneizzazione più elevate portano ad un aumento dell'attività dell'enzima RNA.

4. Cambiamenti nel pH e nella temperatura, soprattutto in condizioni alcaline, può facilmente causare la deamminazione delle basi dell'RNA, con conseguenti rotture della catena; le alte temperature possono anche causare la degradazione parziale o completa delle molecole di RNA.

IV. Cosa si dovrebbe fare per ridurre la degradazione dell’RNA?

Al fine di ridurre la degradazione dell'RNA durante l'estrazione, è necessario adottare una serie di misure, compreso l’uso di forniture di laboratorio prive di RNAsi, operante a basse temperature, utilizzando stabilizzatori dell'RNA, utilizzando kit finiti, ecc. Questi metodi riducono efficacemente il rischio di degradazione dell'RNA e garantiscono l'ottenimento di campioni di RNA di alta qualità per l'analisi a valle.

Introduzione del fornitore

Shanghai Lingjun Biotecnologia Co., Ltd.è stato fondato nel 2016 che è un produttore professionale di materiali biomagnetici e reagenti per l'estrazione degli acidi nucleici.

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