Warum wird RNA bei der Nukleinsäureextraktion leichter abgebaut als DNA??

Der Grund, warum RNA (Ribonukleinsäure) wird leichter abgebaut als DNA (Desoxyribonukleinsäure) während Extraktion hängt hauptsächlich mit der unterschiedlichen chemischen Struktur und der unsachgemäßen Vorgehensweise bei der Extraktion zusammen.

ICH. Unterschiede in der chemischen Struktur:

1. RNA ist eine einzelsträngige Struktur, die instabiler ist als die doppelsträngige Struktur der DNA.

2. Hydroxyl am 2′ Position: Die Ribose in RNA-Molekülen enthält eine Hydroxylgruppe (-OH) am 2′ Position, während die Desoxyribose in der DNA an dieser Position ein Wasserstoffatom hat. Diese zusätzliche Hydroxylgruppe macht das RNA-Molekül instabiler, da sie spontane Hydrolysereaktionen fördern kann, Dies führt zu RNA-Kettenbrüchen.

II. Der Einfluss von RNAse im Extraktionssystem:

1. Endogene RNAse: Es kommt in Zellen vor und kann auch nach der Zelllyse weiterhin RNA abbauen.

2. Exogene RNAse: Es ist in der Umwelt weit verbreitet, wie Luft, Haut, und Laborbedarf (Handschuhe, Reagenzgläser, usw.).

III. Unsachgemäßer Versuchsbetrieb:

1. Die verwendeten Reagenzien und Instrumente wurden nicht mit DEPC behandelt (Diethylpyrocarbonat) und kann RNA-Enzyme nicht wirksam inaktivieren.

2. Der Inhibitor ist unwirksam, oder die Dosierung ist unzureichend, und die Aktivität von RNA-Enzymen kann nicht wirksam gehemmt werden.

3. Mehr experimentelle Proben oder höhere Homogenisierungstemperaturen führen zu einer erhöhten RNA-Enzymaktivität.

4. Änderungen des pH-Werts und der Temperatur, insbesondere unter alkalischen Bedingungen, kann leicht zur Desaminierung von RNA-Basen führen, was zu Kettenbrüchen führt; Hohe Temperaturen können auch zu einem teilweisen oder vollständigen Abbau von RNA-Molekülen führen.

IV. Was sollte getan werden, um den RNA-Abbau zu reduzieren?

Um den RNA-Abbau während der Extraktion zu reduzieren, Es müssen eine Reihe von Maßnahmen ergriffen werden, einschließlich der Verwendung von RNAse-freien Labormaterialien, Betrieb bei niedrigen Temperaturen, unter Verwendung von RNA-Stabilisatoren, Verwendung fertiger Bausätze, usw. Diese Methoden reduzieren wirksam das Risiko des RNA-Abbaus und stellen sicher, dass qualitativ hochwertige RNA-Proben für die nachgelagerte Analyse gewonnen werden.

Lieferantenvorstellung

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.wurde gegründet in 2016 Das ist ein professioneller Hersteller von biomagnetischen Materialien und Nukleinsäure-Extraktionsreagenzien.

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