Por que o RNA é mais facilmente degradado do que o DNA durante a extração de ácido nucleico?

A razão pela qual o RNA (ácido ribonucleico) é mais facilmente degradado que o DNA (ácido desoxirribonucléico) durante extração está principalmente relacionado às suas diferentes estruturas químicas e operação inadequada durante a extração.

EU. Diferenças na estrutura química:

1. O RNA é uma estrutura de fita simples, que é mais instável que a estrutura de fita dupla do DNA.

2. Hidroxila no 2′ posição: A ribose nas moléculas de RNA contém um grupo hidroxila (-OH) no 2′ posição, enquanto a desoxirribose no DNA tem um átomo de hidrogênio nesta posição. Este grupo hidroxila extra torna a molécula de RNA mais instável porque pode promover reações espontâneas de hidrólise, resultando em quebras de cadeia de RNA.

II. A influência da RNAse no sistema de extração:

1. RNAse endógena: Existe nas células e pode continuar a degradar o RNA mesmo após a lise celular.

2. RNAse exógena: Está amplamente presente no meio ambiente, como o ar, pele, e suprimentos de laboratório (luvas, tubos de ensaio, etc.).

III. Operação experimental inadequada:

1. Os reagentes e instrumentos utilizados não foram tratados com DEPC (dietilpirocarbonato) e não pode efetivamente inativar enzimas de RNA.

2. O inibidor é ineficaz, ou a dosagem é insuficiente, e a atividade das enzimas de RNA não pode ser efetivamente inibida.

3. Mais amostras experimentais ou temperaturas de homogeneização mais altas levam ao aumento da atividade da enzima RNA.

4. Mudanças no pH e temperatura, especialmente sob condições alcalinas, pode facilmente fazer com que as bases do RNA sejam desaminadas, resultando em quebras de corrente; altas temperaturas também podem causar degradação parcial ou completa das moléculas de RNA.

4. O que deve ser feito para reduzir a degradação do RNA？

Para reduzir a degradação do RNA durante a extração, uma série de medidas precisam ser tomadas, incluindo o uso de suprimentos de laboratório livres de RNAse, operando em baixas temperaturas, usando estabilizadores de RNA, usando kits prontos, etc.. Esses métodos reduzem efetivamente o risco de degradação do RNA e garantem que amostras de RNA de alta qualidade sejam obtidas para análise posterior.

Introdução ao fornecedor

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