Produttore professionale di perline biomagnetiche
Perché l'identificazione tramite PCR richiede modelli di DNA di alta qualità?
Il metodo della perla magnetica per ottenere modelli di DNA di alta qualità dai tessuti vegetali è fondamentale per la successiva identificazione tramite PCR e può essere considerato la pietra angolare del successo dell'identificazione molecolare. La sua importanza si riflette principalmente nei seguenti aspetti:
1.Rimozione efficace degli inibitori della PCR.
I tessuti vegetali sono ricchi di polisaccaridi, polifenoli, pigmenti, acido tannico, e metaboliti secondari, che sono noti per essere potenti inibitori della PCR. Il metodo con microsfere magnetiche rimuove efficacemente queste impurità attraverso i seguenti meccanismi: legame selettivo: in specifiche condizioni tampone, le sfere magnetiche si legano specificamente al DNA, mentre gli inibitori rimangono nel surnatante e vengono scartati.
Lavaggio efficiente: Attraverso molteplici lavaggi, i residui inibitori adsorbiti sulle biglie magnetiche possono essere completamente rimossi.
Significato: La rimozione incompleta dell'inibitore sopprimerà gravemente l'attività della Taq DNA polimerasi, portando al fallimento della PCR (falso negativo), bassa resa del prodotto, bande deboli o non specifiche, e risultati completamente inaffidabili.
2.Ottenere DNA di elevata purezza e intatto di elevata purezza:
Il rapporto A260/A280 del DNA ottenuto con il metodo delle sfere magnetiche è generalmente vicino a 1.8, e il rapporto A260/A230 è maggiore di 2.0, indicando residui minimi di proteine, ioni di sale, e solventi organici. Il DNA ad elevata purezza è un prerequisito per lo svolgimento efficiente delle reazioni enzimatiche (per esempio., PCR).
Integrità moderata: Per l'identificazione mediante PCR (tipicamente frammenti di amplificazione <3 kb), la lunghezza del frammento di DNA (tipicamente> 20 kb) fornito dal metodo della perla magnetica soddisfa pienamente i requisiti, evitando variazioni di lotto causate dal taglio meccanico di lunghe catene di DNA.
3.Stabilità e riproducibilità migliorate delle reazioni PCR:
Il metodo della perla magnetica presenta un'elevata automazione, errori operativi umani minimi, e qualità del DNA coerente tra diversi lotti.
Precisione quantitativa: Il DNA ad elevata purezza può essere quantificato con precisione utilizzando spettrofotometri o fluorometri. Ciò consente l'aggiunta di quantità di modello di DNA accurate e coerenti durante l'impostazione della reazione PCR, che è fondamentale per ottenere risultati PCR riproducibili e affidabili. Se il DNA contiene impurità, i suoi valori di assorbanza saranno imprecisi, portando ad un'aggiunta impropria del modello.
4.Adatto per produttività elevata e automatizzato
Per attività di identificazione che richiedono l'elaborazione di grandi volumi di campioni (per esempio., screening del germoplasma, rilevamento transgenico), il metodo con microsfere magnetiche può ottenere in modo efficiente un'estrazione ad alta produttività in piastre da 96 pozzetti ed è compatibile con stazioni di lavoro automatizzate per la gestione dei liquidi.
L’importanza si riflette nel fatto che l’efficienza e il livello di standardizzazione del lavoro di valutazione sono notevolmente migliorati con la premessa di garantire un’elevata qualità.
5.Migliorare la sensibilità e la specificità della PCR Alta sensibilità:
I modelli di DNA di alta qualità consentono fattori di diluizione più elevati, riducendo così la concentrazione degli inibitori residui e consentendo in alcuni casi il rilevamento di tracce di DNA bersaglio.
Alta specificità: Il modello puro e la concentrazione precisa facilitano l'ottimizzazione delle condizioni della PCR, consentendo ai primer di legarsi specificamente al modello, riducendo così l'amplificazione non specifica e la formazione di dimeri di primer, risultando in bande di amplificazione chiare e singole.
6.Confronto dei vantaggi con i metodi tradizionali:
Rispetto ai metodi convenzionali CTAB e SDS, il metodo della perla magnetica dimostra vantaggi significativi in termini di velocità, sicurezza (evitando reagenti organici dannosi), semplicità operativa, compatibilità con l'automazione, ed efficienza di rimozione degli inibitori. È particolarmente adatto per campioni vegetali impegnativi con elevato contenuto di polisaccaridi e polifenoli (per esempio., foglie di tè, aghi di pino, fragole, tuberi, ecc.).
Riepilogo: L'importanza fondamentale di ottenere DNA genomico vegetale di alta qualità attraverso il metodo delle sfere magnetiche per l'identificazione della PCR risiede nella seguente catena: DNA di alta qualità (metodo delle perle magnetiche) → elevata purezza/privo di inibitori → quantificazione accurata del modello + ambiente ottimale per l'attività enzimatica → efficiente, stabile, e reazioni PCR riproducibili → accurate, affidabile, e risultati di identificazione credibili.
7.Casi sperimentali
L’estrazione del DNA genomico è stata eseguita utilizzando il reagente di estrazione del DNA genomico dei tessuti vegetali della nostra azienda (metodo delle perle magnetiche) su più campioni di tessuti giovani freschi. I risultati sono i seguenti:
| NO. | Campione | Assunzione | A260/A280 | A260/A230 | Concentrato(ng/μL) |
| 1 | Bok Choi | 5mg | 1.956 | 2.035 | 359.9 |
| 2 | Cipolla | 1.922 | 2.108 | 305.9 | |
| 3 | Spinaci | 1.95 | 1.894 | 495.85 | |
| 4 | Shanghai verde | 1.979 | 2.069 | 658.7 | |
| 5 | Brassica rapa | 1.924 | 1.973 | 318.8 | |
| 6 | Cumino | 1.975 | 2.152 | 756.3 | |
| 7 | Lattuga | 1.896 | 1.84 | 122.55 |
Lo schema dell'elettroforesi è il seguente:
Perciò, prima di condurre l'identificazione molecolare della pianta (per esempio., genotipizzazione, identificazione delle specie, rilevamento transgenico, rilevamento degli agenti patogeni), l'ottimizzazione e l'utilizzo di metodi affidabili come la tecnologia delle microsfere magnetiche per ottenere DNA genomico di alta qualità rappresenta un investimento fondamentale che produce il doppio del risultato con la metà dello sforzo, determinando direttamente il successo o il fallimento dell’intero progetto di identificazione. In pratica, per campioni con ripetuti fallimenti della PCR, la qualità del modello di DNA dovrebbe prima essere rivalutata e purificata.
Fornitore
Shanghai Lingjun Biotecnologia Co., Ltd.è stato fondato nel 2016 che è un produttore professionale di materiali biomagnetici e reagenti per l'estrazione degli acidi nucleici.
Abbiamo una ricca esperienza nell'estrazione e purificazione degli acidi nucleici, purificazione delle proteine, separazione cellulare, chemiluminescenza, e altri campi tecnici.
I nostri prodotti sono ampiamente utilizzati in molti campi, come i test medici, test genetici, ricerca universitaria, allevamento genetico, e così via. Non solo forniamo prodotti, ma possiamo anche intraprendere l'OEM, ODM, e altre esigenze. Se hai un'esigenza correlata, non esitate a contattarci .
