पीसीआर पहचान के लिए उच्च गुणवत्ता वाले डीएनए टेम्पलेट की आवश्यकता क्यों है??

प्राप्त करने के लिए चुंबकीय मनका विधि उच्च गुणवत्ता वाले डीएनए टेम्पलेट पौधों के ऊतकों से प्राप्त अनुवर्ती पीसीआर पहचान के लिए महत्वपूर्ण है और इसे सफल आणविक पहचान की आधारशिला माना जा सकता है. इसका महत्व मुख्य रूप से निम्नलिखित पहलुओं में परिलक्षित होता है:

1.पीसीआर अवरोधकों का प्रभावी निष्कासन. 

पौधों के ऊतक पॉलीसेकेराइड से भरपूर होते हैं, polyphenols, पिगमेंट, टैनिक एसिड, और द्वितीयक मेटाबोलाइट्स, जो शक्तिशाली पीसीआर अवरोधक माने जाते हैं. चुंबकीय मनका विधि निम्नलिखित तंत्रों के माध्यम से इन अशुद्धियों को कुशलतापूर्वक हटा देती है: चयनात्मक बंधन: विशिष्ट बफ़र शर्तों के तहत, चुंबकीय मोती विशेष रूप से डीएनए से जुड़ते हैं, जबकि अवरोधक सतह पर तैरनेवाला में रहते हैं और त्याग दिए जाते हैं.

कुशल धुलाई: एकाधिक धुलाई के माध्यम से, चुंबकीय मोतियों पर अधिशोषित अवरोधक अवशेषों को पूरी तरह से हटाया जा सकता है.

महत्व: अवरोधक का अधूरा निष्कासन टाक डीएनए पोलीमरेज़ की गतिविधि को गंभीर रूप से दबा देगा, पीसीआर विफलता के कारण (झूठा नकारात्मक), कम उत्पाद उपज, कमजोर या गैर विशिष्ट बैंड, और परिणाम पूरी तरह से अविश्वसनीय हैं.

2.उच्च-शुद्धता और अक्षुण्ण डीएनए उच्च-शुद्धता प्राप्त करना:

 चुंबकीय मनका विधि द्वारा प्राप्त डीएनए का A260/A280 अनुपात आमतौर पर करीब होता है 1.8, और A260/A230 अनुपात इससे अधिक है 2.0, प्रोटीन के न्यूनतम अवशेषों का संकेत, नमक आयन, और कार्बनिक विलायक. उच्च शुद्धता वाला डीएनए एंजाइमेटिक प्रतिक्रियाओं के कुशल संचालन के लिए एक शर्त है (जैसे, पीसीआर).

मध्यम अखंडता: पीसीआर पहचान के लिए (आम तौर पर प्रवर्धन टुकड़े <3 केबी), डीएनए टुकड़े की लंबाई (आम तौर पर> 20 केबी) चुंबकीय मनका विधि द्वारा प्रदान की गई आवश्यकताओं को पूरी तरह से पूरा करती है, लंबी डीएनए श्रृंखलाओं के यांत्रिक कतरन के कारण होने वाले बैच भिन्नताओं से बचते हुए.

3.पीसीआर प्रतिक्रियाओं की बढ़ी हुई स्थिरता और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता:

चुंबकीय मनका विधि उच्च स्वचालन प्रदर्शित करती है, न्यूनतम मानवीय परिचालन त्रुटियाँ, और विभिन्न बैचों में सुसंगत डीएनए गुणवत्ता.

मात्रात्मक सटीकता: उच्च शुद्धता वाले डीएनए को स्पेक्ट्रोफोटोमीटर या फ्लोरोमीटर का उपयोग करके सटीक रूप से निर्धारित किया जा सकता है. यह पीसीआर प्रतिक्रिया सेटअप के दौरान सटीक और सुसंगत डीएनए टेम्पलेट मात्रा को जोड़ने में सक्षम बनाता है, जो प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और विश्वसनीय पीसीआर परिणाम प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है. यदि DNA में अशुद्धियाँ हैं, इसके अवशोषण मान गलत होंगे, जिससे टेम्प्लेट अनुचित रूप से जोड़ा गया.

4.उच्च-थ्रूपुट और स्वचालित के लिए उपयुक्त

पहचान कार्यों के लिए बड़ी नमूना मात्रा के प्रसंस्करण की आवश्यकता होती है (जैसे, जर्मप्लाज्म स्क्रीनिंग, ट्रांसजेनिक पहचान), चुंबकीय मनका विधि 96-अच्छी तरह से प्लेटों में उच्च-थ्रूपुट निष्कर्षण को कुशलतापूर्वक प्राप्त कर सकती है और स्वचालित तरल हैंडलिंग वर्कस्टेशन के साथ संगत है.

महत्व इस बात से परिलक्षित होता है कि उच्च गुणवत्ता सुनिश्चित करने के आधार पर मूल्यांकन कार्य की दक्षता और मानकीकरण स्तर में काफी सुधार हुआ है.

5.पीसीआर उच्च संवेदनशीलता की संवेदनशीलता और विशिष्टता को बढ़ाना:

उच्च गुणवत्ता वाले डीएनए टेम्पलेट उच्च कमजोर पड़ने वाले कारकों की अनुमति देते हैं, जिससे अवशिष्ट अवरोधकों की सांद्रता कम हो जाती है और कुछ मामलों में लक्ष्य डीएनए की ट्रेस मात्रा का पता लगाना संभव हो जाता है.

उच्च विशिष्टता: शुद्ध टेम्पलेट और सटीक एकाग्रता पीसीआर स्थितियों के अनुकूलन की सुविधा प्रदान करती है, प्राइमरों को विशेष रूप से टेम्पलेट से जुड़ने में सक्षम बनाना, जिससे गैर-विशिष्ट प्रवर्धन और प्राइमर डिमर गठन कम हो जाता है, जिसके परिणामस्वरूप स्पष्ट और एकल प्रवर्धन बैंड प्राप्त होते हैं.

6.पारंपरिक तरीकों से फायदों की तुलना:

पारंपरिक सीटीएबी और एसडीएस तरीकों की तुलना में, चुंबकीय मनका विधि गति के संदर्भ में महत्वपूर्ण लाभ दर्शाती है, सुरक्षा (हानिकारक कार्बनिक अभिकर्मकों से बचना), संचालनात्मक सरलता, स्वचालन अनुकूलता, और अवरोधक हटाने की दक्षता. यह उच्च पॉलीसेकेराइड और पॉलीफेनॉल सामग्री वाले चुनौतीपूर्ण पौधों के नमूनों के लिए विशेष रूप से उपयुक्त है (जैसे, चाय की पत्तियां, नुकीली सुइयां, स्ट्रॉबेरी, कंद, वगैरह।).

सारांश: पीसीआर पहचान के लिए चुंबकीय मनका विधि के माध्यम से उच्च गुणवत्ता वाले पौधे जीनोमिक डीएनए प्राप्त करने का मुख्य महत्व निम्नलिखित श्रृंखला में निहित है: उच्च गुणवत्ता वाला डीएनए (चुंबकीय मनका विधि) → उच्च शुद्धता/अवरोधक-मुक्त → सटीक टेम्पलेट मात्रा निर्धारण + इष्टतम एंजाइम गतिविधि वातावरण → कुशल, स्थिर, और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य पीसीआर प्रतिक्रियाएं → सटीक, भरोसेमंद, और विश्वसनीय पहचान परिणाम.

7.प्रायोगिक मामले

जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण हमारी कंपनी के प्लांट टिशू जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण अभिकर्मक का उपयोग करके किया गया था (चुंबकीय मनका विधि) कई ताज़ा युवा ऊतक के नमूनों पर. परिणाम इस प्रकार हैं:

नहीं.	नमूना	प्रवेश	ए260/ए280	ए260/ए230	संक्षिप्त.(एनजी/μL)
1	बोक चॉय	5एमजी	1.956	2.035	359.9
2	प्याज		1.922	2.108	305.9
3	पालक		1.95	1.894	495.85
4	शंघाई ग्रीन		1.979	2.069	658.7
5	ब्रैसिका रैपा		1.924	1.973	318.8
6	जीरा		1.975	2.152	756.3
7	सलाद		1.896	1.84	122.55

वैद्युतकणसंचलन आरेख इस प्रकार है:

इसलिए, पौधे की आणविक पहचान करने से पहले (जैसे, जीनोटाइपिंग, प्रजाति की पहचान, ट्रांसजेनिक पहचान, रोगज़नक़ का पता लगाना), उच्च गुणवत्ता वाले जीनोमिक डीएनए प्राप्त करने के लिए चुंबकीय मनका प्रौद्योगिकी जैसे विश्वसनीय तरीकों का अनुकूलन और उपयोग एक महत्वपूर्ण निवेश का प्रतिनिधित्व करता है जो आधे प्रयास के साथ दोगुना परिणाम देता है।, संपूर्ण पहचान परियोजना की सफलता या विफलता को सीधे निर्धारित करना. व्यवहार में, बार-बार पीसीआर विफलता वाले नमूनों के लिए, डीएनए टेम्प्लेट की गुणवत्ता का पहले पुनर्मूल्यांकन और शुद्धिकरण किया जाना चाहिए.

देने वाला

शंघाई लिंगजुन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी, लिमिटेडमें स्थापित किया गया था 2016 जो बायोमैग्नेटिक सामग्रियों और न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण अभिकर्मकों का एक पेशेवर निर्माता है.

हमारे पास न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण में समृद्ध अनुभव है, प्रोटीन शुद्धि, कोशिका पृथक्करण, chemiluminescence, और अन्य तकनीकी क्षेत्र.

हमारे उत्पाद कई क्षेत्रों में व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं, जैसे चिकित्सा परीक्षण, आनुवंशिक परीक्षण, विश्वविद्यालय अनुसंधान, आनुवंशिक प्रजनन, और इसी तरह. हम न केवल उत्पाद उपलब्ध कराते हैं बल्कि ओईएम का कार्य भी कर सकते हैं, ओडीएम, और अन्य जरूरतें. यदि आपको इससे संबंधित कोई आवश्यकता है, हमसे संपर्क करने के लिए कृपया स्वतंत्र महसूस करें .