لماذا يتطلب تحديد PCR قوالب الحمض النووي عالية الجودة?

طريقة الحصول على الخرزة المغناطيسية قوالب الحمض النووي عالية الجودة من الأنسجة النباتية أمر بالغ الأهمية لتحديد PCR لاحقًا ويمكن اعتباره حجر الزاوية في التحديد الجزيئي الناجح. وتنعكس أهميتها في المقام الأول في الجوانب التالية:

1.الإزالة الفعالة لمثبطات PCR. 

الأنسجة النباتية غنية بالسكريات, البوليفينول, أصباغ, حمض التانيك, والأيضات الثانوية, والتي تُعرف بأنها مثبطات قوية لـ PCR. تعمل طريقة الخرزة المغناطيسية على إزالة هذه الشوائب بكفاءة من خلال الآليات التالية: ملزمة انتقائية: تحت ظروف عازلة محددة, ترتبط الخرزات المغناطيسية على وجه التحديد بالحمض النووي, بينما تظل المثبطات في الطاف ويتم التخلص منها.

غسيل فعال: من خلال غسلات متعددة, يمكن إزالة بقايا المثبط الممتصة على الخرز المغناطيسي بالكامل.

دلالة: الإزالة غير الكاملة للمثبط سوف تثبط بشدة نشاط بوليميراز الحمض النووي طق, مما يؤدي إلى فشل PCR (سلبية كاذبة), انخفاض عائد المنتج, نطاقات ضعيفة أو غير محددة, ونتائج غير موثوقة تماما.

2.الحصول على حمض نووي عالي النقاء وسليم عالي النقاء:

 عادة ما تكون نسبة A260/A280 من الحمض النووي التي تم الحصول عليها بواسطة طريقة الخرز المغناطيسي قريبة من 1.8, ونسبة A260/A230 أكبر من 2.0, تشير إلى الحد الأدنى من بقايا البروتينات, أيونات الملح, والمذيبات العضوية. يعد الحمض النووي عالي النقاء شرطًا أساسيًا لإجراء التفاعلات الأنزيمية بكفاءة (على سبيل المثال, تفاعل البوليميراز المتسلسل).

سلامة معتدلة: للتعرف على PCR (شظايا التضخيم عادة <3 كيلو بايت), طول جزء الحمض النووي (عادة> 20 كيلو بايت) المقدمة من خلال طريقة الخرزة المغناطيسية تلبي المتطلبات تمامًا, مع تجنب الاختلافات الدفعية الناجمة عن القص الميكانيكي لسلاسل الحمض النووي الطويلة.

3.تعزيز الاستقرار واستنساخ تفاعلات PCR:

تُظهر طريقة الخرزة المغناطيسية أتمتة عالية, الحد الأدنى من الأخطاء التشغيلية البشرية, وجودة الحمض النووي المتسقة عبر دفعات مختلفة.

الدقة الكمية: يمكن قياس الحمض النووي عالي النقاء بدقة باستخدام مقاييس الطيف الضوئي أو مقاييس الفلور. وهذا يتيح إضافة كميات قالب الحمض النووي دقيقة ومتسقة أثناء إعداد تفاعل PCR, وهو أمر بالغ الأهمية للحصول على نتائج PCR موثوقة وقابلة للتكرار. إذا كان الحمض النووي يحتوي على شوائب, ستكون قيم الامتصاص الخاصة بها غير دقيقة, مما يؤدي إلى إضافة قالب غير لائق.

4.مناسبة للإنتاجية العالية والآلية

لمهام تحديد الهوية التي تتطلب معالجة كميات كبيرة من العينات (على سبيل المثال, فحص البلازما الجرثومية, الكشف المعدل وراثيا), يمكن لطريقة الخرزة المغناطيسية أن تحقق بكفاءة استخلاصًا عالي الإنتاجية في 96 لوحة جيدة، كما أنها متوافقة مع محطات العمل الآلية لمعالجة السوائل.

تنعكس الأهمية في تحسين مستوى الكفاءة والتوحيد في أعمال التقييم بشكل كبير على أساس ضمان الجودة العالية.

5.تعزيز حساسية وخصوصية PCR ذات الحساسية العالية:

تسمح قوالب الحمض النووي عالية الجودة بعوامل تخفيف أعلى, وبالتالي تقليل تركيز المثبطات المتبقية وتمكين اكتشاف كميات ضئيلة من الحمض النووي المستهدف في بعض الحالات.

خصوصية عالية: يسهل القالب النقي والتركيز الدقيق تحسين ظروف PCR, تمكين الاشعال لربط القالب على وجه التحديد, وبالتالي تقليل التضخيم غير المحدد وتشكيل التمهيدي الخافت, مما يؤدي إلى نطاقات تضخيم واضحة ومفردة.

6.مقارنة المزايا مع الطرق التقليدية:

بالمقارنة مع أساليب CTAB وSDS التقليدية, توضح طريقة الخرزة المغناطيسية مزايا كبيرة من حيث السرعة, أمان (تجنب الكواشف العضوية الضارة), البساطة التشغيلية, التوافق الآلي, وكفاءة إزالة المانع. إنها مناسبة بشكل خاص لتحدي العينات النباتية ذات المحتوى العالي من السكاريد والبوليفينول (على سبيل المثال, أوراق الشاي, إبر الصنوبر, الفراولة, الدرنات, إلخ.).

ملخص: تكمن الأهمية الأساسية للحصول على الحمض النووي الجينومي النباتي عالي الجودة من خلال طريقة الخرزة المغناطيسية لتحديد PCR في السلسلة التالية: الحمض النووي عالي الجودة (طريقة حبة مغناطيسية) → درجة نقاء عالية/خالية من المانع → القياس الكمي الدقيق للقالب + بيئة نشاط الإنزيم الأمثل → فعالة, مستقر, وتفاعلات PCR قابلة للتكرار → دقيقة, موثوق, ونتائج تحديد موثوقة.

7.حالات تجريبية

تم إجراء استخراج الحمض النووي الجينومي باستخدام كاشف استخراج الحمض النووي الجينومي للأنسجة النباتية الخاص بشركتنا (طريقة حبة مغناطيسية) على عدة عينات من الأنسجة الشابة الطازجة. النتائج هي كما يلي:

لا.	عينة	تناول	A260/A280	A260/A230	Conc.(نانوغرام / ميكرولتر)
1	بوك تشوي	5ملغ	1.956	2.035	359.9
2	بصل		1.922	2.108	305.9
3	سبانخ		1.95	1.894	495.85
4	شنغهاي الخضراء		1.979	2.069	658.7
5	براسيكا رابا		1.924	1.973	318.8
6	كمون		1.975	2.152	756.3
7	خَسّ		1.896	1.84	122.55

الرسم البياني الكهربائي هو على النحو التالي:

لذلك, قبل إجراء التحديد الجزيئي للنبات (على سبيل المثال, التنميط الجيني, تحديد الأنواع, الكشف المعدل وراثيا, الكشف عن مسببات الأمراض), إن تحسين واستخدام الأساليب الموثوقة مثل تقنية الخرز المغناطيسي للحصول على الحمض النووي الجينومي عالي الجودة يمثل استثمارًا بالغ الأهمية يؤدي إلى ضعف النتيجة بنصف الجهد, تحديد نجاح أو فشل مشروع تحديد الهوية بأكمله بشكل مباشر. في الممارسة العملية, للعينات مع فشل PCR المتكرر, يجب أولاً إعادة تقييم جودة قالب الحمض النووي وتنقيته.

مزود

شركة شنغهاي لينغجون للتكنولوجيا الحيوية, المحدودة.تأسست في 2016 وهي شركة متخصصة في تصنيع المواد المغناطيسية الحيوية وكواشف استخلاص الحمض النووي.

لدينا خبرة غنية في استخراج وتنقية الحمض النووي, تنقية البروتين, فصل الخلايا, التألق الكيميائي, وغيرها من المجالات التقنية.

منتجاتنا تستخدم على نطاق واسع في العديد من المجالات, مثل الفحوصات الطبية, الاختبارات الجينية, البحوث الجامعية, التكاثر الوراثي, وهكذا. نحن لا نقدم المنتجات فحسب، بل يمكننا أيضًا إجراء تصنيع المعدات الأصلية, أوديإم, وغيرها من الاحتياجات. إذا كان لديك حاجة ذات صلة, لا تتردد في الاتصال بنا .