Почему для ПЦР-идентификации требуются высококачественные матрицы ДНК?

Метод магнитных шариков для получения высококачественные шаблоны ДНК из растительных тканей имеет решающее значение для последующей ПЦР-идентификации и может считаться краеугольным камнем успешной молекулярной идентификации.. Его важность выражается, прежде всего, в следующих аспектах.:

1.Эффективное удаление ингибиторов ПЦР. 

Ткани растений богаты полисахаридами., полифенолы, пигменты, дубильная кислота, и вторичные метаболиты, которые, как известно, являются мощными ингибиторами ПЦР.. Метод магнитных шариков эффективно удаляет эти примеси посредством следующих механизмов.: выборочное связывание: в особых буферных условиях, магнитные шарики специфически связываются с ДНК, в то время как ингибиторы остаются в супернатанте и выбрасываются.

Эффективная стирка: Через несколько стирок, остатки ингибитора, адсорбированные на магнитных шариках, могут быть полностью удалены.

Значение: Неполное удаление ингибитора серьезно подавляет активность ДНК-полимеразы Taq., приводит к неудаче ПЦР (ложноотрицательный результат), низкий выход продукта, слабые или неспецифические полосы, и совершенно ненадежные результаты.

2.Получение высокочистой и неповрежденной ДНК:

 Соотношение А260/А280 ДНК, полученной методом магнитных шариков, обычно близко к 1.8, и соотношение A260/A230 больше, чем 2.0, что указывает на минимальные остатки белков, ионы соли, и органические растворители. ДНК высокой чистоты является необходимым условием эффективного проведения ферментативных реакций. (например, ПЦР).

Умеренная целостность: Для ПЦР-идентификации (обычно фрагменты амплификации <3 КБ), длина фрагмента ДНК (обычно> 20 КБ) полученное методом магнитных шариков, полностью соответствует требованиям, избегая при этом изменений в партиях, вызванных механическим разрезанием длинных цепей ДНК.

3.Повышенная стабильность и воспроизводимость ПЦР-реакций.:

Метод магнитных шариков отличается высокой степенью автоматизации., минимальные человеческие ошибки в работе, и стабильное качество ДНК в разных партиях.

Количественная точность: ДНК высокой чистоты можно точно определить количественно с помощью спектрофотометров или флуорометров.. Это позволяет добавлять точные и постоянные количества матрицы ДНК во время настройки реакции ПЦР., что имеет решающее значение для получения воспроизводимых и надежных результатов ПЦР.. Если ДНК содержит примеси, его значения поглощения будут неточными, приводит к неправильному добавлению шаблона.

4.Подходит для высокопроизводительных и автоматизированных

Для задач идентификации, требующих обработки больших объемов проб. (например, скрининг зародышевой плазмы, трансгенное обнаружение), метод магнитных шариков позволяет эффективно обеспечить высокопроизводительную экстракцию в 96-луночных планшетах и ​​совместим с автоматизированными рабочими станциями для обработки жидкостей..

Важность отражается в том, что эффективность и уровень стандартизации оценочной работы значительно повышаются благодаря обеспечению высокого качества..

5.Повышение чувствительности и специфичности ПЦР Высокая чувствительность:

Высококачественные матрицы ДНК позволяют использовать более высокие коэффициенты разведения., тем самым снижая концентрацию остаточных ингибиторов и позволяя в некоторых случаях обнаруживать следовые количества целевой ДНК..

Высокая специфичность: Чистый шаблон и точная концентрация облегчают оптимизацию условий ПЦР., позволяя праймерам специфически связываться с шаблоном, тем самым уменьшая неспецифическую амплификацию и образование димеров праймеров., что приводит к четким и одиночным полосам усиления.

6.Сравнение преимуществ с традиционными методами:

По сравнению с традиционными методами CTAB и SDS, метод магнитных шариков демонстрирует значительные преимущества с точки зрения скорости, безопасность (отказ от вредных органических реагентов), простота эксплуатации, совместимость с автоматизацией, и эффективность удаления ингибитора. Он особенно подходит для сложных образцов растений с высоким содержанием полисахаридов и полифенолов. (например, чайные листья, сосновые иголки, клубника, клубни, и т. д.).

Краткое содержание: Основная важность получения высококачественной геномной ДНК растений методом магнитных шариков для ПЦР-идентификации заключается в следующей цепочке.: высококачественная ДНК (метод магнитных шариков) → высокая чистота/без ингибиторов → точный количественный анализ шаблона + оптимальная среда для активности ферментов → эффективная, стабильный, и воспроизводимые реакции ПЦР → точные, надежный, и достоверные результаты идентификации.

7.Экспериментальные случаи

Экстракцию геномной ДНК проводили с использованием реагента для экстракции геномной ДНК из растительных тканей нашей компании. (метод магнитных шариков) на нескольких образцах свежих молодых тканей. Результаты следующие::

Нет.	Образец	Впуск	А260/А280	А260/А230	Конц.(нг/мкл)
1	Bok Choy	5мг	1.956	2.035	359.9
2	Лук		1.922	2.108	305.9
3	Шпинат		1.95	1.894	495.85
4	Шанхай Грин		1.979	2.069	658.7
5	Брассика рапа		1.924	1.973	318.8
6	Тмин		1.975	2.152	756.3
7	Латук		1.896	1.84	122.55

Схема электрофореза выглядит следующим образом.:

Поэтому, перед проведением молекулярной идентификации растений (например, генотипирование, идентификация вида, трансгенное обнаружение, обнаружение патогена), оптимизация и использование надежных методов, таких как технология магнитных шариков, для получения высококачественной геномной ДНК, представляет собой важнейшую инвестицию, которая дает двойной результат при вдвое меньших усилиях., непосредственно определяя успех или неудачу всего проекта идентификации. На практике, для образцов с повторными неудачными ПЦР, качество матрицы ДНК должно быть сначала переоценено и очищено.

Поставщик

Шанхайская биотехнологическая компания Линцзюнь., ОООбыл создан в 2016 который является профессиональным производителем биомагнитных материалов и реагентов для экстракции нуклеиновых кислот..

Мы имеем богатый опыт в экстракции и очистке нуклеиновых кислот., очистка белка, разделение клеток, хемилюминесценция, и другие технические области.

Наша продукция широко используется во многих областях., например, медицинское тестирование, генетическое тестирование, университетские исследования, генетическое разведение, и так далее. Мы не только поставляем продукцию, но и можем взять на себя OEM, ОДМ, и другие потребности. Если у вас есть соответствующая потребность, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам .