استخلاص الحمض النووي بطريقة الخرزة المغناطيسية:الكشف عن مكونات ووظائف الكواشف

مكونات ووظائف الكواشف المختلفة لاستخراج الحمض النووي بطريقة الخرزة المغناطيسية هي كما يلي.

1. تحلل العازلة

(1) الحزب الديمقراطي الصربي(كبريتات دوديسيل الصوديوم): مادة خافضة للتوتر السطحي أنيونية تعمل على تعطيل هياكل غشاء الخلية, الافراج عن محتويات الخلوية. يمكنه كسر الروابط الهيدروجينية بين الجزيئات وداخلها, التسبب في الكشف الجزيئي وتدمير الهياكل الثانوية والثالثية للبروتينات, مما يؤدي إلى تمسخ البروتين. في ظل ظروف درجات الحرارة المرتفعة, يمكن أن يعطل الارتباط بين البروتينات والأحماض النووية, تعزيز إطلاق الأحماض النووية.

(2) تريتون اكس-100(بولي إيثيلين جلايكول أوكتيل فينيل إيثر): مادة خافضة للتوتر السطحي غير أيونية مستقرة في الماء ولا يمكن فصلها بسهولة, ولا يتأثر بشكل كبير بالأملاح غير العضوية القوية. وتتمثل مهمتها في تكوين مجمعات قابلة للذوبان مع الدهون مثل الدهون الفوسفاتية في الأغشية البيولوجية; يمكن أن تشكل نهايته الكارهة للماء أيضًا مجمعات مع المناطق الكارهة للماء من بروتينات الغشاء, الذوبان في المحلول. يتم استخدامه بشكل رئيسي في التجارب البيولوجية مثل تحلل الخلايا واستخراج البروتين.

(3) بروتيناز ك: إنزيم قوي مذيب للبروتين معزول عن المبيضات البيضاء, مع نشاط محدد عالية, وهو كاشف رئيسي لاستخراج الحمض النووي. وتتمثل وظيفتها الأساسية في تحلل الهستونات المرتبطة بالأحماض النووية إنزيميًا, السماح للأحماض النووية بالتحرر في المحلول.

(4) جوانيدين ثيوسيانات(جيتك): مادة تمسخ بروتين قوية يمكنها إذابة البروتينات بسرعة, تعطيل هياكل الخلايا, فصل الأحماض النووية عن البروتينات, وتمنع نشاط nucleases, حماية الأحماض النووية من التحلل.

(5) إدتا(حمض إيثيلين ثنائي أمين رباعي الأسيتيك): عامل خالب يمكنه خلب أيونات المعادن مثل الكالسيوم والمغنيسيوم في المحلول, تثبيط نشاط النيوكلياز التي تعتمد على أيونات المعادن, ومنع الأحماض النووية من التدهور.

(6) تريس-حمض الهيدروكلوريك: يحافظ المخزن المؤقت على الاستقرار النسبي لدرجة الحموضة في المخزن المؤقت للتحلل, توفير بيئة حمضية أو قلوية مناسبة أثناء عملية استخلاص الحمض النووي.

2. المخزن المؤقت ملزم

(1) أملاح عالية التركيز(مثل كلوريد الصوديوم, ملغكل2, إلخ.): تعزيز ربط الأحماض النووية بسطح الخرز المغناطيسي. يمكن لأيونات الملح تحييد الشحنات السالبة للأحماض النووية في بيئة عالية الملوحة, تقليل التنافر الكهروستاتيكي بين الأحماض النووية والخرز المغناطيسي, مما يجعل امتصاص الأحماض النووية أكثر سهولة على سطح الخرز المغناطيسي.

(2) الخرز المغناطيسي: تم تعديل السطح بمجموعات نشطة محددة, مثل مجموعات السيلانول أو الكربوكسيل, والتي يمكن أن ترتبط على وجه التحديد بالأحماض النووية بواسطة روابط هيدروجينية, التفاعلات الكهروستاتيكية, إلخ., تحقيق الامتزاز وإثراء الأحماض النووية. وتشمل الأنواع الشائعة الخرز المغناطيسي القائم على السيليكا الفائق المغناطيسية والخرز المغناطيسي الكربوكسيل.

3. غسل العازلة

(1) أملاح منخفضة التركيز(مثل كلوريد الصوديوم): الحفاظ على بيئة أيونية معينة, مما يساعد على إزالة الشوائب دون التأثير على ارتباط الأحماض النووية بالخرز المغناطيسي.

(2) الإيثانول: يشيع استخدامها في خطوة الغسيل, يمكنه إزالة البروتينات المتبقية, أملاح, وغيرها من الشوائب, جعل الأحماض النووية أكثر نقاء. يقلل الإيثانول من قطبية المحلول, مما يجعل فصل الشوائب عن الأحماض النووية أسهل, ويساعد أيضًا على تثبيت ارتباط الأحماض النووية على سطح الخرز المغناطيسي.

(3) شطف العازلة

(4) قليل الملح أو عازلة خالية من الملح(مثل TE Buffer, تريس-حمض الهيدروكلوريك العازلة, إلخ.): يمكن أن يعطل قوة الربط بين الأحماض النووية والخرز المغناطيسي, مما يسمح بإزالة الأحماض النووية من سطح الخرز المغناطيسي. عادة ما تكون هذه المخازن المؤقتة قلوية بشكل ضعيف, والتي يمكنها تحييد الشحنات السالبة على سطح الخرز المغناطيسي, تقليل التفاعل الكهروستاتيكي بين الأحماض النووية والخرز المغناطيسي, وبالتالي إطلاق الأحماض النووية في المحلول, وتحقيق شطف وتنقية الأحماض النووية.

في ملخص, تحقق طريقة الخرزة المغناطيسية لاستخراج الحمض النووي استخلاصًا وتنقية فعالين للأحماض النووية من خلال مكونات كاشفة مصممة بعناية وإجراءات تشغيل محسنة. لا تعمل هذه التقنية على تحسين الكفاءة التجريبية فحسب، بل تضمن أيضًا جودة الأحماض النووية, توفير أساس متين لأبحاث البيولوجيا الجزيئية اللاحقة والتشخيص السريري.

مزود

شركة شنغهاي لينغجون للتكنولوجيا الحيوية, المحدودة.تأسست في 2016 وهي شركة متخصصة في تصنيع المواد المغناطيسية الحيوية وكواشف استخلاص الحمض النووي.

لدينا خبرة غنية في استخراج وتنقية الحمض النووي, تنقية البروتين, فصل الخلايا, التألق الكيميائي, وغيرها من المجالات التقنية.

منتجاتنا تستخدم على نطاق واسع في العديد من المجالات, مثل الفحوصات الطبية, الاختبارات الجينية, البحوث الجامعية, التكاثر الوراثي, وهكذا. نحن لا نقدم المنتجات فحسب، بل يمكننا أيضًا إجراء تصنيع المعدات الأصلية, أوديإم, وغيرها من الاحتياجات. إذا كان لديك حاجة ذات صلة, لا تتردد في الاتصال بنا علىsales01@lingjunbio.com.