Ekstraksi Asam Nukleat dengan Metode Manik Magnetik:Mengungkap Komponen dan Fungsi Reagen

Komponen dan fungsi berbagai reagen ekstraksi DNA dengan metode magnetic bead adalah sebagai berikut.

1. Penyangga Lisis

(1) SDS(Natrium Dodesil Sulfat): Surfaktan anionik yang mengganggu struktur membran sel, melepaskan konten seluler. Ini dapat memutus ikatan hidrogen antara dan di dalam molekul, menyebabkan terungkapnya molekul dan menghancurkan struktur protein sekunder dan tersier, menyebabkan denaturasi protein. Dalam kondisi suhu tinggi, dapat mengganggu pengikatan antara protein dan asam nukleat, mendorong pelepasan asam nukleat.

(2) Triton X-100(Polietilen Glikol Oktilfenil Eter): Surfaktan nonionik yang stabil dalam air dan tidak mudah terdisosiasi, dan tidak terpengaruh secara signifikan oleh garam anorganik elektrolit kuat. Fungsinya untuk membentuk kompleks larut dengan lipid seperti fosfolipid dalam membran biologis; ujung hidrofobiknya juga dapat membentuk kompleks dengan daerah hidrofobik protein membran, larut dalam larutan. Ini terutama digunakan dalam eksperimen biologis seperti lisis sel dan ekstraksi protein.

(3) Proteinase K: Enzim pelarut protein ampuh yang diisolasi dari Candida albicans, dengan aktivitas spesifik yang tinggi, ini adalah reagen kunci untuk ekstraksi asam nukleat. Fungsi utamanya adalah menghidrolisis histon yang terikat pada asam nukleat secara enzimatis, memungkinkan asam nukleat bebas dalam larutan.

(4) Guanidin Tiosianat(GITC): Denaturant protein kuat yang dapat melarutkan protein dengan cepat, mengganggu struktur sel, memisahkan asam nukleat dari protein, dan menghambat aktivitas nuklease, melindungi asam nukleat dari degradasi.

(5) EDTA(Asam Etilenadiamintetraasetat): Agen pengkelat yang dapat mengkelat ion logam seperti kalsium dan magnesium dalam larutan, menghambat aktivitas nuklease yang bergantung pada ion logam, dan mencegah asam nukleat terdegradasi.

(6) Tris-HCl: Buffer menjaga stabilitas relatif pH buffer lisis, menyediakan lingkungan asam atau basa yang sesuai selama proses ekstraksi asam nukleat.

2. Penyangga Pengikat

(1) Garam Konsentrasi Tinggi(seperti NaCl, MgCl2, dll.): Mempromosikan pengikatan asam nukleat ke permukaan manik-manik magnetik. Ion garam dapat menetralkan muatan negatif asam nukleat di lingkungan yang tinggi garam, mengurangi tolakan elektrostatik antara asam nukleat dan manik-manik magnetik, membuat asam nukleat lebih mudah teradsorpsi ke permukaan manik-manik magnetik.

(2) Manik-manik Magnetik: Dimodifikasi permukaan dengan grup aktif tertentu, seperti gugus silanol atau karboksil, yang secara spesifik dapat mengikat asam nukleat melalui ikatan hidrogen, interaksi elektrostatis, dll., mencapai adsorpsi dan pengayaan asam nukleat. Jenis yang umum termasuk manik-manik magnetik berbasis silika superparamagnetik dan manik-manik magnetik karboksil.

3. Penyangga Pencucian

(1) Garam Konsentrasi Rendah(seperti NaCl): Pertahankan lingkungan ionik tertentu, yang membantu menghilangkan kotoran tanpa mempengaruhi pengikatan asam nukleat ke manik-manik magnetik.

(2) Etanol: Biasa digunakan pada langkah pencucian, itu dapat menghilangkan sisa protein, garam, dan kotoran lainnya, menjadikan asam nukleat lebih murni. Etanol mengurangi polaritas larutan, membuat kotoran lebih mudah dipisahkan dari asam nukleat, dan juga membantu menstabilkan pengikatan asam nukleat pada permukaan manik magnet.

(3) Penyangga Elusi

(4) Buffer Rendah Garam atau Bebas Garam(seperti TE Buffer, Penyangga Tris-HCl, dll.): Dapat mengganggu kekuatan pengikatan antara asam nukleat dan manik-manik magnet, memungkinkan asam nukleat dielusi dari permukaan manik-manik magnetik. Buffer ini biasanya bersifat basa lemah, yang dapat menetralkan muatan negatif pada permukaan manik-manik magnet, mengurangi interaksi elektrostatik antara asam nukleat dan manik-manik magnetik, sehingga melepaskan asam nukleat ke dalam larutan, dan mencapai elusi dan pemurnian asam nukleat.

Singkatnya, metode manik magnetik untuk ekstraksi asam nukleat mencapai ekstraksi dan pemurnian asam nukleat yang efisien dengan komponen reagen yang dirancang secara cermat dan prosedur pengoperasian yang dioptimalkan. Teknologi ini tidak hanya meningkatkan efisiensi eksperimen tetapi juga menjamin kualitas asam nukleat, memberikan dasar yang kuat untuk penelitian biologi molekuler dan diagnosis klinis selanjutnya.

Pemasok

Shanghai Lingjun Bioteknologi Co., Ltd.didirikan pada 2016 yang merupakan produsen profesional bahan biomagnetik dan reagen ekstraksi asam nukleat.

Kami memiliki pengalaman yang kaya dalam ekstraksi dan pemurnian asam nukleat, pemurnian protein, pemisahan sel, kimialuminesensi, dan bidang teknis lainnya.

Produk kami banyak digunakan di berbagai bidang, misalnya tes kesehatan, pengujian genetik, penelitian universitas, pemuliaan genetik, dan sebagainya. Kami tidak hanya menyediakan produk tetapi juga dapat melakukan OEM, ODM, dan kebutuhan lainnya. Jika Anda memiliki kebutuhan terkait, jangan ragu untuk menghubungi kami dipenjualan01@lingjunbio.com.