चुंबकीय मनका विधि द्वारा न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण:अभिकर्मकों के घटकों और कार्यों का खुलासा

चुंबकीय मनका विधि द्वारा डीएनए निकालने के लिए विभिन्न अभिकर्मकों के घटक और कार्य इस प्रकार हैं.

1. लिसेस बफ़र

(1) एसडीएस(सोडियम डोडेसिल सल्फेट): एक आयनिक सर्फेक्टेंट जो कोशिका झिल्ली संरचनाओं को बाधित करता है, सेलुलर सामग्री जारी करना। यह अणुओं के बीच और भीतर हाइड्रोजन बंधन को तोड़ सकता है, आणविक विघटन का कारण बनता है और प्रोटीन की द्वितीयक और तृतीयक संरचनाओं को नष्ट करता है, जिससे प्रोटीन विकृतीकरण होता है. उच्च तापमान की स्थिति में, यह प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड के बीच बंधन को बाधित कर सकता है, न्यूक्लिक एसिड की रिहाई को बढ़ावा देना.

(2) ट्राइटन एक्स-100(पॉलीइथाइलीन ग्लाइकोल ऑक्टाइलफेनिल ईथर): एक गैर-आयनिक सर्फेक्टेंट जो पानी में स्थिर होता है और आसानी से अलग नहीं होता है, और मजबूत इलेक्ट्रोलाइट अकार्बनिक लवण से महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित नहीं होता है. इसका कार्य जैविक झिल्लियों में फॉस्फोलिपिड जैसे लिपिड के साथ घुलनशील परिसरों का निर्माण करना है; इसका हाइड्रोफोबिक सिरा झिल्ली प्रोटीन के हाइड्रोफोबिक क्षेत्रों के साथ कॉम्प्लेक्स भी बना सकता है, घोल में घुलना. इसका उपयोग मुख्य रूप से कोशिका विश्लेषण और प्रोटीन निष्कर्षण जैसे जैविक प्रयोगों में किया जाता है.

(3) प्रोटीनेज के: A potent protein-dissolving enzyme isolated from Candida albicans, with a high specific activity, it is a key reagent for nucleic acid extraction. Its primary function is to enzymatically hydrolyze histones bound to nucleic acids, allowing nucleic acids to be free in the solution.

(4) Guanidine Thiocyanate(GITC): A strong protein denaturant that can rapidly dissolve proteins, disrupt cell structures, separate nucleic acids from proteins, and inhibit the activity of nucleases, protecting nucleic acids from degradation.

(5) EDTA(Ethylenediaminetetraacetic Acid): A chelating agent that can chelate metal ions such as calcium and magnesium in the solution, inhibiting the activity of nucleases that depend on metal ions, and preventing nucleic acids from being degraded.

(6) Tris-HCl: The buffer maintains the pH relative stability of the lysis buffer, न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण प्रक्रिया के दौरान एक उपयुक्त अम्लीय या क्षारीय वातावरण प्रदान करना.

2. बाइंडिंग बफ़र

(1) उच्च सांद्रता वाले लवण(जैसे NaCl, MgCl2, वगैरह।): चुंबकीय मोतियों की सतह पर न्यूक्लिक एसिड के बंधन को बढ़ावा देना। नमक आयन उच्च नमक वाले वातावरण में न्यूक्लिक एसिड के नकारात्मक चार्ज को बेअसर कर सकते हैं, न्यूक्लिक एसिड और चुंबकीय मोतियों के बीच इलेक्ट्रोस्टैटिक प्रतिकर्षण को कम करना, जिससे न्यूक्लिक एसिड चुंबकीय मोतियों की सतह पर अधिक आसानी से सोख लिया जाता है.

(2) चुंबकीय मोती: विशिष्ट सक्रिय समूहों के साथ सतह-संशोधित, जैसे सिलानॉल या कार्बोक्सिल समूह, जो विशेष रूप से हाइड्रोजन बांड द्वारा न्यूक्लिक एसिड से बंध सकता है, इलेक्ट्रोस्टैटिक इंटरैक्शन, वगैरह।, न्यूक्लिक एसिड के सोखना और संवर्धन को प्राप्त करना। सामान्य प्रकारों में सुपरपैरामैग्नेटिक सिलिका-आधारित चुंबकीय मोती और कार्बोक्सिल चुंबकीय मोती शामिल हैं.

3. धुलाई बफर

(1) कम सांद्रता वाले लवण(जैसे NaCl): एक निश्चित आयनिक वातावरण बनाए रखें, which helps to remove impurities without affecting the binding of nucleic acids to magnetic beads.

(2) Ethanol: Commonly used in the washing step, it can remove residual proteins, salts, और अन्य अशुद्धियाँ, making nucleic acids purer. Ethanol reduces the polarity of the solution, making impurities more easily separable from nucleic acids, and also helps to stabilize the binding of nucleic acids on the surface of magnetic beads.

(3) एल्युशन बफ़र

(4) Low Salt or Salt-Free Buffer(such as TE Buffer, Tris-HCl Buffer, वगैरह।): Can disrupt the binding force between nucleic acids and magnetic beads, allowing nucleic acids to be eluted from the surface of magnetic beads. These buffers are usually weakly alkaline, which can neutralize the negative charges on the surface of magnetic beads, reducing the electrostatic interaction between nucleic acids and magnetic beads, thereby releasing nucleic acids into the solution, and achieving the elution and purification of nucleic acids.

सारांश, the magnetic bead method for nucleic acid extraction achieves efficient extraction and purification of nucleic acids by carefully designed reagent components and optimized operating procedures. This technology not only improves experimental efficiency but also ensures the quality of nucleic acids, providing a solid foundation for subsequent molecular biology research and clinical diagnosis.

देने वाला

शंघाई लिंगजुन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी, लिमिटेडमें स्थापित किया गया था 2016 जो बायोमैग्नेटिक सामग्रियों और न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण अभिकर्मकों का एक पेशेवर निर्माता है.

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