Extração de ácido nucleico pelo método de esfera magnética:Revelando os componentes e funções dos reagentes

Os componentes e funções de vários reagentes para extração de DNA pelo método de esfera magnética são os seguintes.

1. Tampão de lise

(1) FDS(Dodecil Sulfato de Sódio): Um surfactante aniônico que perturba as estruturas da membrana celular, liberando conteúdo celular. Pode quebrar ligações de hidrogênio entre e dentro das moléculas, causando desdobramento molecular e destruindo as estruturas secundárias e terciárias das proteínas, levando à desnaturação de proteínas. Sob condições de alta temperatura, pode interromper a ligação entre proteínas e ácidos nucléicos, promovendo a liberação de ácidos nucléicos.

(2) Tritão X-100(Éter octilfenílico de polietilenoglicol): Um surfactante não iônico que é estável em água e não é facilmente dissociado, e não é significativamente afetado por sais inorgânicos eletrolíticos fortes. Sua função é formar complexos solúveis com lipídios, como fosfolipídios, em membranas biológicas.; sua extremidade hidrofóbica também pode formar complexos com as regiões hidrofóbicas das proteínas de membrana, dissolvendo na solução. É usado principalmente em experimentos biológicos, como lise celular e extração de proteínas..

(3) Proteinase K: Uma potente enzima dissolvente de proteínas isolada de Candida albicans, com alta atividade específica, é um reagente chave para extração de ácido nucleico. Sua principal função é hidrolisar enzimaticamente histonas ligadas a ácidos nucléicos., permitindo que os ácidos nucléicos estejam livres na solução.

(4) Tiocianato de Guanidina(GITC): Um forte desnaturante de proteínas que pode dissolver proteínas rapidamente, perturbar estruturas celulares, separar ácidos nucléicos de proteínas, e inibir a atividade das nucleases, protegendo ácidos nucléicos da degradação.

(5) EDTA(Ácido Etilenodiaminotetracético): Um agente quelante que pode quelar íons metálicos como cálcio e magnésio na solução, inibindo a atividade de nucleases que dependem de íons metálicos, e evitando que os ácidos nucléicos sejam degradados.

(6) Tris-HCl: O tampão mantém a estabilidade relativa do pH do tampão de lise, fornecer um ambiente ácido ou alcalino adequado durante o processo de extração de ácido nucleico.

2. Buffer de ligação

(1) Sais de alta concentração(como NaCl, MgCl2, etc.): Promova a ligação de ácidos nucléicos à superfície das esferas magnéticas. Os íons de sal podem neutralizar as cargas negativas dos ácidos nucléicos em um ambiente com alto teor de sal, reduzindo a repulsão eletrostática entre ácidos nucleicos e esferas magnéticas, tornando os ácidos nucléicos mais facilmente adsorvidos na superfície das esferas magnéticas.

(2) Contas Magnéticas: Modificado na superfície com grupos ativos específicos, como grupos silanol ou carboxila, que pode se ligar especificamente a ácidos nucléicos por ligações de hidrogênio, interações eletrostáticas, etc., alcançando a adsorção e enriquecimento de ácidos nucléicos. Os tipos comuns incluem esferas magnéticas superparamagnéticas à base de sílica e esferas magnéticas de carboxila.

3. Tampão de lavagem

(1) Sais de baixa concentração(como NaCl): Manter um certo ambiente iônico, que ajuda a remover impurezas sem afetar a ligação dos ácidos nucléicos às esferas magnéticas.

(2) Etanol: Comumente usado na etapa de lavagem, pode remover proteínas residuais, sais, e outras impurezas, tornando os ácidos nucléicos mais puros. O etanol reduz a polaridade da solução, tornando as impurezas mais facilmente separáveis ​​dos ácidos nucléicos, e também ajuda a estabilizar a ligação de ácidos nucléicos na superfície das esferas magnéticas.

(3) Tampão de eluição

(4) Tampão com baixo teor de sal ou sem sal(como TE Buffer, Tampão Tris-HCl, etc.): Pode perturbar a força de ligação entre ácidos nucleicos e esferas magnéticas, permitindo que os ácidos nucleicos sejam eluídos da superfície das esferas magnéticas. Esses tampões são geralmente fracamente alcalinos, que pode neutralizar as cargas negativas na superfície das esferas magnéticas, reduzindo a interação eletrostática entre ácidos nucleicos e esferas magnéticas, liberando assim ácidos nucléicos na solução, e alcançar a eluição e purificação de ácidos nucleicos.

Resumindo, o método de esfera magnética para extração de ácidos nucleicos alcança extração e purificação eficientes de ácidos nucleicos por meio de componentes reagentes cuidadosamente projetados e procedimentos operacionais otimizados. Esta tecnologia não só melhora a eficiência experimental, mas também garante a qualidade dos ácidos nucleicos, fornecendo uma base sólida para pesquisas subsequentes em biologia molecular e diagnóstico clínico.

Fornecedor

Xangai Lingjun Biotecnologia Co., Ltda.foi estabelecido em 2016 que é um fabricante profissional de materiais biomagnéticos e reagentes de extração de ácido nucleico.

Temos vasta experiência em extração e purificação de ácidos nucleicos, purificação de proteínas, separação celular, quimioluminescência, e outras áreas técnicas.

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