Nukleinsäureextraktion durch Magnetkügelchen-Methode:Aufdeckung der Komponenten und Funktionen von Reagenzien

Die Komponenten und Funktionen verschiedener Reagenzien zur DNA-Extraktion mit der Magnetkügelchen-Methode sind wie folgt.

1. Lysepuffer

(1) Sicherheitsdatenblatt(Natriumdodecylsulfat): Ein anionisches Tensid, das Zellmembranstrukturen zerstört, Freisetzung von Zellinhalten. Es kann Wasserstoffbrückenbindungen zwischen und innerhalb von Molekülen aufbrechen, Dadurch kommt es zur molekularen Entfaltung und zur Zerstörung der Sekundär- und Tertiärstrukturen von Proteinen, was zur Denaturierung von Proteinen führt. Unter Hochtemperaturbedingungen, es kann die Bindung zwischen Proteinen und Nukleinsäuren stören, Förderung der Freisetzung von Nukleinsäuren.

(2) Triton X-100(Polyethylenglykol-Octylphenylether): Ein nichtionisches Tensid, das in Wasser stabil ist und nicht leicht dissoziiert, und wird durch starke anorganische Elektrolytsalze nicht wesentlich beeinflusst. Seine Funktion besteht darin, lösliche Komplexe mit Lipiden wie Phospholipiden in biologischen Membranen zu bilden; Sein hydrophobes Ende kann auch Komplexe mit den hydrophoben Bereichen von Membranproteinen bilden, in der Lösung auflösen. Es wird hauptsächlich in biologischen Experimenten wie der Zelllyse und der Proteinextraktion eingesetzt.

(3) Proteinase K: Ein wirksames proteinauflösendes Enzym, isoliert aus Candida albicans, mit hoher spezifischer Aktivität, Es ist ein Schlüsselreagenz für die Nukleinsäureextraktion. Seine Hauptfunktion besteht darin, an Nukleinsäuren gebundene Histone enzymatisch zu hydrolysieren, Dadurch können Nukleinsäuren frei in der Lösung vorliegen.

(4) Guanidinthiocyanat(GITC): Ein starkes Proteindenaturierungsmittel, das Proteine ​​schnell auflösen kann, Zellstrukturen zerstören, Nukleinsäuren von Proteinen trennen, und hemmen die Aktivität von Nukleasen, Nukleinsäuren vor dem Abbau schützen.

(5) EDTA(Ethylendiamintetraessigsäure): Ein Chelatbildner, der Metallionen wie Calcium und Magnesium in der Lösung chelatisieren kann, Hemmung der Aktivität von Nukleasen, die auf Metallionen angewiesen sind, und verhindert den Abbau von Nukleinsäuren.

(6) Tris-HCl: Der Puffer sorgt für die relative pH-Stabilität des Lysepuffers, Bereitstellung einer geeigneten sauren oder alkalischen Umgebung während des Nukleinsäureextraktionsprozesses.

2. Bindungspuffer

(1) Hochkonzentrierte Salze(wie NaCl, MgCl2, usw.): Fördern Sie die Bindung von Nukleinsäuren an die Oberfläche von Magnetkügelchen. Salzionen können die negativen Ladungen von Nukleinsäuren in einer Umgebung mit hohem Salzgehalt neutralisieren, Reduzierung der elektrostatischen Abstoßung zwischen Nukleinsäuren und Magnetkügelchen, Dadurch können Nukleinsäuren leichter auf der Oberfläche von Magnetkügelchen adsorbiert werden.

(2) Magnetische Perlen: Oberflächenmodifiziert mit spezifischen aktiven Gruppen, wie Silanol- oder Carboxylgruppen, die über Wasserstoffbrückenbindungen spezifisch an Nukleinsäuren binden können, Elektrostatische Wechselwirkungen, usw., Erreichen der Adsorption und Anreicherung von Nukleinsäuren. Zu den gebräuchlichen Typen gehören superparamagnetische Magnetkügelchen auf Silikatbasis und Carboxyl-Magnetkügelchen.

3. Waschpuffer

(1) Salze mit niedriger Konzentration(wie NaCl): Behalten Sie eine bestimmte ionische Umgebung bei, Dies hilft dabei, Verunreinigungen zu entfernen, ohne die Bindung von Nukleinsäuren an Magnetkügelchen zu beeinträchtigen.

(2) Ethanol: Wird häufig im Waschschritt verwendet, es kann restliche Proteine ​​entfernen, Salze, und andere Verunreinigungen, Nukleinsäuren reiner machen. Ethanol verringert die Polarität der Lösung, wodurch Verunreinigungen leichter von Nukleinsäuren abgetrennt werden können, und trägt außerdem dazu bei, die Bindung von Nukleinsäuren auf der Oberfläche von Magnetkügelchen zu stabilisieren.

(3) Elutionspuffer

(4) Salzarmer oder salzfreier Puffer(wie TE-Puffer, Tris-HCl-Puffer, usw.): Kann die Bindungskraft zwischen Nukleinsäuren und Magnetkügelchen stören, Dadurch können Nukleinsäuren von der Oberfläche magnetischer Kügelchen eluiert werden. Diese Puffer sind normalerweise schwach alkalisch, welches die negativen Ladungen auf der Oberfläche von Magnetperlen neutralisieren kann, Reduzierung der elektrostatischen Wechselwirkung zwischen Nukleinsäuren und Magnetkügelchen, Dadurch werden Nukleinsäuren in die Lösung freigesetzt, und das Erreichen der Elution und Reinigung von Nukleinsäuren.

Zusammenfassend, Die Magnetkügelchen-Methode zur Nukleinsäureextraktion ermöglicht eine effiziente Extraktion und Reinigung von Nukleinsäuren durch sorgfältig entwickelte Reagenzienkomponenten und optimierte Betriebsabläufe. Diese Technologie verbessert nicht nur die experimentelle Effizienz, sondern stellt auch die Qualität der Nukleinsäuren sicher, Bereitstellung einer soliden Grundlage für die nachfolgende molekularbiologische Forschung und klinische Diagnose.

Anbieter

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.wurde gegründet in 2016 Das ist ein professioneller Hersteller von biomagnetischen Materialien und Nukleinsäure-Extraktionsreagenzien.

Wir verfügen über umfangreiche Erfahrung in der Extraktion und Reinigung von Nukleinsäuren, Proteinreinigung, Zelltrennung, Chemilumineszenz, und anderen technischen Bereichen.

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