Nucleïnezuurextractie door middel van magnetische kralenmethode:Het onthullen van de componenten en functies van reagentia

De componenten en functies van verschillende reagentia voor het extraheren van DNA met behulp van de magnetische kralenmethode zijn als volgt.

1. Lysisbuffer

(1) SDS(Natriumdodecylsulfaat): Een anionische oppervlakteactieve stof die celmembraanstructuren verstoort, het vrijgeven van cellulaire inhoud. Het kan waterstofbruggen tussen en binnen moleculen verbreken, waardoor moleculaire ontvouwing ontstaat en de secundaire en tertiaire structuren van eiwitten worden vernietigd, wat leidt tot denaturatie van eiwitten. Onder omstandigheden met hoge temperaturen, het kan de binding tussen eiwitten en nucleïnezuren verstoren, het bevorderen van de afgifte van nucleïnezuren.

(2) Triton X-100(Polyethyleenglycoloctylfenylether): Een niet-ionische oppervlakteactieve stof die stabiel is in water en niet gemakkelijk dissocieert, en wordt niet significant beïnvloed door sterke anorganische elektrolytzouten. Zijn functie is het vormen van oplosbare complexen met lipiden, zoals fosfolipiden in biologische membranen; het hydrofobe uiteinde ervan kan ook complexen vormen met de hydrofobe gebieden van membraaneiwitten, oplossen in de oplossing. Het wordt voornamelijk gebruikt in biologische experimenten zoals cellyse en eiwitextractie.

(3) Proteïnase K: Een krachtig eiwitoplossend enzym geïsoleerd uit Candida albicans, met een hoge specifieke activiteit, het is een belangrijk reagens voor de extractie van nucleïnezuren. De primaire functie ervan is het enzymatisch hydrolyseren van histonen gebonden aan nucleïnezuren, waardoor nucleïnezuren vrij in de oplossing kunnen zijn.

(4) Guanidinethiocyanaat(GIT): Een sterk eiwitdenatureermiddel dat eiwitten snel kan oplossen, celstructuren verstoren, scheiden nucleïnezuren van eiwitten, en remmen de activiteit van nucleasen, het beschermen van nucleïnezuren tegen afbraak.

(5) EDTA(Ethyleendiaminetetra-azijnzuur): Een chelaatvormend middel dat metaalionen zoals calcium en magnesium in de oplossing kan cheleren, het remmen van de activiteit van nucleasen die afhankelijk zijn van metaalionen, en het voorkomen dat nucleïnezuren worden afgebroken.

(6) Tris-HCl: De buffer handhaaft de relatieve pH-stabiliteit van de lysisbuffer, het verschaffen van een geschikte zure of alkalische omgeving tijdens het nucleïnezuurextractieproces.

2. Bindende buffer

(1) Zouten met hoge concentratie(zoals NaCl, MgCl2, enz.): Bevorder de binding van nucleïnezuren aan het oppervlak van magnetische kralen. Zoutionen kunnen de negatieve ladingen van nucleïnezuren in een zoutrijke omgeving neutraliseren, het verminderen van de elektrostatische afstoting tussen nucleïnezuren en magnetische kralen, waardoor nucleïnezuren gemakkelijker worden geadsorbeerd op het oppervlak van magnetische kralen.

(2) Magnetische kralen: Oppervlak-gemodificeerd met specifieke actieve groepen, zoals silanol- of carboxylgroepen, die specifiek kunnen binden aan nucleïnezuren door waterstofbruggen, elektrostatische interacties, enz., het bereiken van de adsorptie en verrijking van nucleïnezuren. Veel voorkomende typen zijn onder meer superparamagnetische magnetische kralen op silicabasis en magnetische carboxylkralen.

3. Wasbuffer

(1) Zouten met lage concentratie(zoals NaCl): Zorg voor een bepaalde ionische omgeving, wat helpt onzuiverheden te verwijderen zonder de binding van nucleïnezuren aan magnetische kralen te beïnvloeden.

(2) Ethanol: Vaak gebruikt in de wasstap, het kan resterende eiwitten verwijderen, zouten, en andere onzuiverheden, waardoor nucleïnezuren zuiverder worden. Ethanol vermindert de polariteit van de oplossing, waardoor onzuiverheden gemakkelijker van nucleïnezuren kunnen worden gescheiden, en helpt ook de binding van nucleïnezuren aan het oppervlak van magnetische kralen te stabiliseren.

(3) Elutiebuffer

(4) Zoutarme of zoutvrije buffer(zoals TE-buffer, Tris-HCl-buffer, enz.): Kan de bindingskracht tussen nucleïnezuren en magnetische kralen verstoren, waardoor nucleïnezuren van het oppervlak van magnetische kralen kunnen worden geëlueerd. Deze buffers zijn doorgaans zwak alkalisch, die de negatieve ladingen op het oppervlak van magnetische kralen kunnen neutraliseren, het verminderen van de elektrostatische interactie tussen nucleïnezuren en magnetische kralen, waardoor nucleïnezuren in de oplossing vrijkomen, en het bereiken van de elutie en zuivering van nucleïnezuren.

Samengevat, De magnetische parelmethode voor nucleïnezuurextractie zorgt voor een efficiënte extractie en zuivering van nucleïnezuren door zorgvuldig ontworpen reagenscomponenten en geoptimaliseerde operationele procedures. Deze technologie verbetert niet alleen de experimentele efficiëntie, maar waarborgt ook de kwaliteit van nucleïnezuren, het bieden van een solide basis voor daaropvolgend moleculair biologisch onderzoek en klinische diagnose.

Leverancier

Shanghai Lingjun Biotechnologie Co., Ltd.werd opgericht in 2016 dat een professionele fabrikant is van biomagnetische materialen en reagentia voor nucleïnezuurextractie.

We hebben een rijke ervaring in de extractie en zuivering van nucleïnezuren, eiwit zuivering, cel scheiding, chemiluminescentie, en andere technische gebieden.

Onze producten worden op veel gebieden veel gebruikt, zoals medische testen, genetische testen, universitair onderzoek, genetische veredeling, enzovoort. Wij leveren niet alleen producten, maar kunnen ook OEM ondernemen, ODM, en andere behoeften. Als u een gerelateerde behoefte heeft, neem dan gerust contact met ons op viasales01@lingjunbio.com.